秋冬季流感多病原联合检测课件

CLINICALLABORATORYDIAGNOSTICS秋冬季流感病毒多病原联合检测多病原联合检测·多重PCR·临床检验·精准诊断汇报时间：2026CONTENTS课程导览01秋冬季多病原流行背景叠加流行态势与临床痛点02联合检测技术原理多重PCR与检测方法解析03临床应用与判读标准分层路径与报告解读04产品落地与行业趋势最新获批与市场前景秋冬季多病原流行背景多病原叠加流行，单一检测难以应对01哨点监测·2026年第41周秋冬季多病原叠加流行门急诊流感样病例占3.8%南方4.6%北方3.0%流感是主力，但不是全部阳性率前三·门急诊流感病毒13.6%鼻病毒11.2%肠道病毒3.9%阳性率前三·住院SARI鼻病毒9.3%流感病毒4.3%人偏肺病毒4.1%年龄分层15–59岁流感阳性率最高14岁以下鼻病毒较高0–4岁人偏肺病毒、副流感病毒较高主流毒株A（H3N2）亚型+B（Victoria）系秋冬季流感多病原联合检测04/30病原谱六联检覆盖常见呼吸道病原甲型流感秋冬/冬春流行，高热、咳嗽、肌痛，多伴严重肺炎。乙型流感起病急骤，数小时至24小时内体温达峰，头痛、全身酸痛、乏力。呼吸道合胞病毒传染性强，主要引起6个月以下婴儿细支气管炎与肺炎。腺病毒儿童重症肺炎重要病原，可致急性发热性咽喉炎、咽结膜热等四种综合征。副流感病毒

I型/III型I型为儿童喉气管支气管炎主因；III型常致肺炎与细支气管炎。六种病原体症状高度重叠，仅凭临床表现难以区分——病原学检测是鉴别诊断的关键。秋冬季流感多病原联合检测05/30问题→对策单一检测方法存在局限现有方法的局限三种常用手段抗原检测灵敏度仅

60%–80%，低病毒载量易假阴性，且无法区分甲流分型抗体检测需双份血清对比，IgG升高

4倍

以上才有诊断价值，早期诊断意义小病毒分离培养金标准之一，但耗时久、操作复杂，临床少用于早期诊断推荐方案荧光PCR荧光PCR灵敏度

90%以上，特异性超

95%，同为金标准之一数据佐证感染初期

72小时

内，核酸检测阳性率

92%，显著高于抗原检测的

60%秋冬季门急诊症状相似患者量大，单一检测手段难以实现快速精准分流。秋冬季流感多病原联合检测06/30检测应用联合检测提升诊断效率呼吸道病原体核酸联合检测咽拭子或痰液采样，以实时荧光定量PCR

或一代测序仪毛细管电泳的多重PCR扩增技术，一次同时检测多种呼吸道病原体。核心价值提升诊断效率，辅助鉴别诊断、识别混合感染一次采样完成多病原检测，节省时间与资源指导针对性用药，减少不必要抗生素使用，支撑院感防控落地进程联合检测正从大型医院向基层医疗机构快速普及秋冬季流感多病原联合检测07/302022–2023年已有医院开展

13种

呼吸道病原体联合检测2024年乌兰察布市中心医院开展六项病原体核酸检测2025年济南市第三人民医院上线四种病原体快速检测，最快

1小时出报告临床证据混合感染更需精准识别抗原阴性

≠

无感染单一检测存在漏诊风险日本

2024–2025

流感季，对

30

例抗原阴性发热患者加做多重PCR，8

例检出呼吸道病毒，其中

2

例确诊流感。流感组特征鲜明68.5

岁平均年龄83.3

%持续高热超3天↓4.2

天48小时内启动抗病毒治疗，住院时间平均缩短+37

%病毒清除率提升适用人群明确发热门诊、呼吸道感染门诊及住院、危重症或免疫缺陷患者重点人群·尽早检测婴幼儿老年人孕妇慢性病患者出现症状应尽早多病原检测秋冬季流感多病原联合检测08/30联合检测技术原理多重PCR实现一次采样多病原同步检测02技术原理多重PCR实现同步扩增核心机制同一反应体系加入两对以上特异性引物，由DNA聚合酶催化，实现多个核酸靶标片段同步扩增。对比传统PCR传统一次反应仅测单一靶标多重PCR一次识别多种病原体，缩短检测时间、降低成本引物设计约束113

种呼吸道病原体引物须经

BLAST比对排除交叉反应2Tm值差异控制在

5℃

内，减少引物二聚体与非特异性扩增高阶扩展MeltArray利用Taq酶5'-瓣状内切酶活性切割媒介探针，熔解曲线分析实现单通道

12

靶标、6通道

72

重检测多重巢式PCR外引物富集靶序列、内引物放大信号，敏感性高于常规实时定量PCR，可避免常见呼吸道病毒交叉反应秋冬季流感多病原联合检测10/30检测技术荧光PCR实时定量检测检测原理探针与靶标序列完全杂交后，扩增过程中被酶切割，释放荧光信号，由仪器实时采集。完全杂交酶切割释放荧光实时采集RNA前置步骤流感、新冠等RNA病毒需先经逆转录酶转化为cDNA，方可作为PCR扩增模板。核心优势灵敏度高：可检测极低浓度核酸，适合早期感染或无症状筛查特异性强：特异性引物与探针设计减少非目标核酸干扰判读与局限Ct值判读：Ct值反映病毒载量，辅助评估感染阶段或治疗效果存在局限：无法区分死病毒与活病毒，核酸残留可能导致康复期检测仍呈阳性秋冬季流感多病原联合检测11/30关键技术机制热启动探针提升特异性双重特异性筛选从源头抑制非特异扩增问题→对策问题：室温配制阶段活性未受控聚合酶活性未受控，易引发引物错配与二聚体延伸对策：封闭聚合酶，升温启动抗体封闭或化学修饰聚合酶，室温下活性被抑制；升温至

90℃

以上，抑制基团解离，扩增才启动双重保障排除非靶序列无效扩增阻断非特异扩增的假阳性信号痕量检出10拷贝级别仍可稳定检出扩增资源集中供给目标靶序列，适配早期感染与微量残留DNA

样本秋冬季流感多病原联合检测12/30前处理质控样本质量决定检测下限01采样无菌拭子采集鼻咽或口咽分泌物，采样深度与旋转次数须符合指南，避免样本量不足或污染。02保存采集后立即置入病毒转运介质，2–8℃

保存、4小时内送检；超时须冷冻于

-70℃以下。03提取磁珠法或柱提法；粘稠痰液增加蛋白酶K浓度、延长裂解至

30分钟。每批次加入外部内标（如MS2噬菌体RNA）监控提取效率——内标

Ct值>32

判定该批次失败，须重做。关键参数·磁珠结合阶段pH5.2–5.6关键参数·乙醇浓度70%–80%关键参数·洗脱体积50–100微升以提高核酸浓度秋冬季流感多病原联合检测13/30质量控制标准化流程保障结果可靠1样本采集2快速转运3核酸提取4PCR扩增5结果判读防污染硬措施1实验区严格区分清洁区与污染区，使用带滤芯吸头2每提取

10份样本后更换手套3紫外照射生物安全柜

30分钟以上，阻断气溶胶交叉污染批次质控扩增环节设计特异性引物与探针，以阳性对照、阴性对照、临界值对照监控每批次质量。一体化操作多重PCR整合多靶标于单管，配合自动化仪器实现样本进、结果出。可追溯要求严格按试剂盒说明书操作，记录每批次内标Ct值与扩增曲线；混合感染或需分型病原体可一次性全面筛查，避免漏检。秋冬季流感多病原联合检测14/30方法学对比与选型四种方法学各有适用场景病毒检测四法对照1核酸检测优势特异度、敏感度高，可早期诊断局限要求高、步骤繁、耗时长2抗原检测胶体金免疫层析优势简便快速局限敏感度、特异度低于核酸，阴性不能排除感染3抗体检测优势需对比急性期与恢复期血清，IgG升高

4倍及以上有诊断价值局限对早期诊断意义小4分离培养优势诊断金标准局限耗时久、操作复杂，少用于早期诊断肺炎支原体检测核酸检测灵敏度与特异性高，适合早期诊断IgM抗体感染后

4–5天出现，可作早期诊断指标培养金标准，但生长缓慢选型依据：按患者病程、就诊场景与时效要求，合理选择或组合使用。秋冬季流感多病原联合检测15/30临床应用与判读标准阶梯化检测路径，规范报告判读03专家共识·检测路径共识确立阶梯化检测路径2026版专家共识2026年7月，《感染性疾病多重病原体检测临床合理应用专家共识（2026版）》在《中华传染病杂志》发布，系我国首部覆盖六大系统感染的多重病原体检测共识。核心原则阶梯化

·

个体化

·

最少够用明确反对无指征的大撒网式广谱检测。出发点以最短时间、最低资源消耗提供关键病原学信息，指导精准治疗、减少不必要的抗菌药物使用。3重症疑难推荐方案·大靶标规模2普通住院推荐方案·中等靶标规模1门急诊轻症推荐方案·小靶标规模阶梯化分层推荐秋冬季流感多病原联合检测17/30分级诊疗路径门急诊优先小靶标快检轻症首选对症支持为主，需明确病原时用快速抗原或

2至6靶标

多重核酸检测，TAT≤2小时。扩展指征婴幼儿、老年人、经验性治疗无效者，扩至

2–10靶标

多重核酸检测，指导目标性抗感染治疗。核心覆盖病原流感病毒（甲/乙型）呼吸道合胞病毒腺病毒肺炎支原体呼吸季高发，临床鉴别价值最突出检测启动条件聚集发病、高危人群、症状迁延才启动病原检测；单纯轻症上呼吸道感染对症处理即可。秋冬季流感多病原联合检测18/30检测路径·住院重症场景住院重症需扩展靶标适用对象住院CAPHAPVAP患者共识推荐路径1下呼吸道标本→细菌培养+药敏常规病原学检测基石，先行明确致病菌与耐药性2联合10至20靶标

多重核酸检测覆盖

耐药细菌、病毒、非典型病原体

三类病原谱升级条件：常规检测阴性或病情快速进展→tNGS或mNGStNGS定位三级检测的重要手段抗宿主背景干扰强灵敏度高成本相对可控临床误区大Panel、测序下沉至门急诊轻症，造成卫生经济学负担低流行、定植风险靶标检出后解读困难并非靶标越多，临床价值越高秋冬季流感多病原联合检测19/30结果解读报告判读关注Ct值阳性结果检出病原体核酸，通常为确诊依据；条件致病菌须结合临床区分感染与定植。阴性结果未检出≠100%排除，可能受采样误差或载量低于检测下限影响。Ct值判读Ct值越小，病毒载量越高，可辅助评估感染阶段与治疗效果。性能参考规范操作、样本合格且条件达标时：90%以上灵敏度95%以上特异性可疑结果须复检或结合临床症状综合判断，警惕假阴性与假阳性。秋冬季流感多病原联合检测20/30质量控制全程质控降低假性结果试剂端优先选择带全程内标的试剂，监控提取扩增全流程，降低假阴性；UNG-dUTP防污染体系减少气溶胶假阳性，适配高通量样本。操作端严格区分清洁区与污染区，使用带滤芯吸头；每提取10份样本后更换手套，紫外照射生物安全柜

30

分钟以上。批次判定每批设置阳性、阴性、临界值对照；内标Ct值大于

32

时，判定该批次提取失败，需重新操作。样本端严格遵循试剂盒说明书，呼吸道检测选用鼻咽拭子或相应合格样本类型；秋冬样本量激增时，可配套全自动核酸提取设备缓解人力负担。秋冬季流感多病原联合检测21/30适用人群与触发场景重点人群应尽早检测四类重点人群1发热门诊患者、呼吸道感染门诊及住院患者2危重症或免疫缺陷呼吸道感染患者3高风险人群婴幼儿、老年人、孕妇、慢性病患者4密接暴露者家人、同学、同事已确诊且出现类似症状建议检测的触发场景发热、咳嗽、咽痛、鼻塞流涕、头痛、肌肉酸痛等症状较重或持续不退流感高发季节或局部暴发流行期间临床组合模式抗原快速初筛是第一道防线，PCR精准确认为第二层判读，二者组合已成为发热门诊工作标准。秋冬季流感多病原联合检测22/30产品落地与行业趋势多联检成为精准诊断主流方向04行业动态2026年多款联检获批10月12日圣湘生物·四联检三类注册证覆盖副流感病毒、人鼻病毒、腺病毒、肺炎支原体；系第二款冻干四联检，与首款新冠/甲流/乙流/RSV四联检互补，合计覆盖

8种

常见呼吸道病原体。4月30日康为世纪·六项细菌联检单管检测单管检测肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌等

6种

高发致病菌，灵敏度

300–400copies/mL

。9月mNGS试剂盒全球首创基于联合探针锚定聚合测序法，将mNGS从科研工具升级为标准化、可质控的诊断产品。秋冬季流感多病原联合检测24/30行业趋势市场规模持续快速扩容呼吸道多病原检测市场规模与同比增速单位：亿元|2026E为预测值312

亿元2026年预计市场规模，为近三年最高绝对增量+16.2%2026E较2025年同比增速+43.53

亿元2026E较2025年绝对增量2025年增速

19.2%，显著高于体外诊断行业整体约11.5%的平均增速2022–2024年复合增长率维持在

16.8%增长引擎：多病原联检

与

POCT快速化，叠加公共卫生需求升级、技术迭代加速、基层诊疗能力强化秋冬季流感多病原联合检测25/30竞争格局与国产化国产试剂份额稳步提升竞争格局一第一梯队安图生物、英诺特二第二梯队之江生物、万孚生物、圣湘生物三第三梯队博晖创新、仁度生物43.0%2024年前五大厂商合计约占市场份额产品与应用结构54.8%核酸检测·占比最大产品类别68.5%医院端·主要需求来源国产化进程58.4%2023年73.6%2025年79%+2026年预计突破注册壁垒98项已批流感检测试剂盒（截至2023年11月）45.9%联合检测

占比多联检注册壁垒高、定价优势明显秋冬季流感多病原联合检测26/30政策依据医保立项规范检测收费662个主项目2026年8月14日，国家医保局印发《检验类医疗服务价格项目立项指南（试行）》，整合规范为662个主项目。门急诊常见病原均有对应条目检测项目计价规则流感病毒抗原检测序号543按项计价，甲型、乙型分别计费呼吸道合胞病毒抗原检测序号547按次计价腺病毒抗原检测序号552按次计价肺炎支原体抗体检测序号608按项计价，IgM/IgG可分别计费病原体核酸扩增检测序号175按每种病原体一项计价，靶标可灵活组合联检分档计价规则与共识强调的