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文档简介

ImpactofFoodborneContaminantsonOvarianDrosophilamelanogasterMod2026-01-05发布2026-01-16实施I本文件起草单位:安徽医科大学、安徽医科大学第二附2食源性污染物对卵巢健康影响黑腹果蝇模型快速筛查法位于雌性果蝇卵巢管顶端原卵区(germarium)微环境内的一类成体干细胞。它通过不Notch、Hippo、JAK/STAT等)与哺乳动物高度保守。食源性污染物通过饮食途径暴露于果35.1标准培养基),根据受试物性质,选用超纯水、二甲亚砜(DMSO5.3对照物试验应设置阴性对照组和阳性对照组。阳性对照可选择氯丙醇(如3-氯-1,2-丙醇,CAS#96-24-2);重金属镉(如氯化镉,CAS#10108-65.4解剖与固定液磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,CAS#12111中加入0.3%Triton-100,v/vTriton-100,CAS#9036-19-5)、4%多聚甲醛磷酸缓冲液5.5染料与抗体恒温恒湿培养箱、体视显微镜、果蝇饲养管-20℃冰箱、-80℃超低温冰箱、倒置荧光显微镜、激光扫描共聚焦显微镜。4将三日龄雌性果蝇随机分为以下组别,每组至少设置3个平行重复,每个平行不少于溶剂浓度相同(例如<0.1%DMSO)的标准培养基,以排除溶剂本身可能d)阳性对照组:饲喂混有已知卵巢毒性食源性污将分组后的果蝇在标准环境下饲养,每2d更换一次新鲜配制的相应培养基,以防止培养基变质及成分变化,并记录果蝇的存活情况。饲养周期为7d~14d(依据预分离雌蝇,将每只雌蝇单独转移至含有标准完成产卵计数后,将含有受精卵的培养皿在标准环境条件下继后,在体视显微镜下观察并统计成功孵化的一龄幼虫(L1幼虫)数量。卵子孵化率按以下变化。使用图像采集系统获取卵巢图像,并利用统计分析软件测量卵巢5入用免疫组化一抗稀释液稀释的Hts抗体(稀释比例1:20),),e)回收二抗,重复步骤b)后加入细胞核DAPIg)将组织放到加有50%甘油的载玻片上,用解剖针将卵巢管挑开,使每个卵巢管的卵h)在激光共聚焦显微镜下观察卵巢卵原区生殖干细胞(图谱见附录A并统计其数则可判定为阳性,该受试物对卵巢健康具有对黑腹果蝇卵巢健康产生不良影响。”6胞数目减少等],且效应呈现剂量依赖性,提示其初筛结果为‘阳性’,表明该受d)果蝇品系、果蝇日龄、饲养温度/湿度/光f)试验结果:以列表方式报告空白对照组、溶剂对照组(溶剂是水则不用设置)、低789[2]RenjunTu,BoDuan,XiaoqingSong,TingXie.(2020)Dlp-mediatedHhandWntsignalinginterdependenceiscriticalinthenicheforgermline

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