人类生物样本采集规范中国专家共识（2025版）

人类生物样本采集规范中国专家共识（2025版）1适用范围与基本定义生物样本采集活动的规范化直接决定了后续多组学数据的真实性与可重复性，任何样本质量偏差都会在PCR、测序或质谱分析中被指数级放大。本共识适用于中国大陆地区医疗机构、科研院所及生物医药企业开展的人类生物样本（包括血液、组织、体液、排泄物等）采集活动。本规范不适用于法医鉴定或临床输血用血液采集（需遵循《临床输血技术规范》）。凡涉及人类遗传资源材料出境，必须同时符合《中华人民共和国生物安全法》及《人类遗传资源管理条例》的严格监管要求。2伦理合规与知情同意伦理合规不是行政审批的流程过场，而是生物样本库合法存续的法律底线与道德防线。所有样本采集活动开展前，必须获得依托单位伦理委员会（IRB/IEC）的批准文件（批件有效期通常为1年，过期需重新申报）。2.1知情同意书（ICF）核心要素知情同意书必须包含以下强制条款，缺一不可：采集目的：明确是用于基础研究、新药开发还是疾病诊断。样本类型与数量：例如「静脉血20mL（分4管）」或「肿瘤组织2块（每块约0.5cm隐私保护措施：说明去标识化处理方式（如使用MD5哈希算法编码），明确除法律法规强制要求外不向第三方披露。自愿与退出权：受试者有权在任何阶段无需任何理由撤回同意，且不影响后续医疗待遇。撤回同意后，已采集样本需进行「销毁」或「去标识化封存」处理（需在ICF中明确二选一）。2.2特殊人群的授权无民事行为能力人或限制民事行为能力人（如未成年人、精神障碍患者）：必须由其法定监护人签署知情同意书，同时如受试者本人具备一定理解能力，应签署「赞同书」。紧急情况下的豁免：若受试者处于危及生命的状态且无法签署同意书，需经伦理委员会前置审批（或紧急会议审议），并需在恢复意识后24小时内补签同意，否则样本必须销毁。3采集前评估与准备采集前的环境评估与受试者准备是影响样本质量变异系数（CV）最大的可控环节。此阶段失误往往导致不可逆的溶血、降解或生物活性丧失。3.1受试者状态管控饮食控制：原则上采集空腹血。需明确「空腹」定义为「禁食至少8小时，不禁水」。若需餐后样本，必须记录进食时间与食物种类。生理节律：皮质醇、促肾上腺皮质激素（ACTH）等激素存在显著昼夜节律。采集时间误差必须控制在±15用药史记录：必须详细记录受试者过去7天内的用药情况（包括处方药、非处方药及保健品）。例如，抗凝药物（华法林、肝素）会显著影响凝血功能检测。3.2人员与物资配置人员资质：操作人员必须持有《护士执业证书》或《医师执业证书》，且每年至少完成2次生物安全与采样技术培训。物料核查：使用前必须核对耗材有效期、无菌状态及添加剂匹配度。严禁使用破损、漏气或超过有效期的真空采血管。环境要求：采集区温度应控制在20∼25∘4血液样本采集标准作业程序（SOP）静脉采血看似基础，实则是对时间、温度与采血顺序精确控制的系统工程。错误的采血顺序会导致试管间添加剂交叉污染，导致检验结果失真（如K⁺/EDTA污染导致高钾假象）。4.1采血管顺序（核心安全条款）必须严格执行以下顺序，严禁颠倒（除非使用蝶翼采血系统且配备discardtube弃血管）：血培养瓶（厌氧/需氧）：确保无菌操作优先，防止皮肤菌群污染。无添加剂管（血清管/红管/黄管）：避免凝血机制被其他添加剂干扰。凝血检测管（蓝管）：盖子内含枸橼酸钠，比例为1:9。若抽血量不足1.8mL（针对2mL规格），检测结果无效。血沉管（黑管）：盖子内含枸橼酸钠，比例为1:4。肝素管（绿管）：用于生化、血流变。EDTA管（紫管）：用于血常规、PCR。血糖管（灰管）：含氟化钠（糖酵解抑制剂）。4.2止血带使用规范绑扎时间：严禁超过1分钟。风险机理：止血带压迫→静脉回流受阻→局部血液浓缩→蛋白质、铁、钾等大分子及离子浓度假性升高。若需重新穿刺，必须在对侧肢体进行。禁忌：严禁在输液同侧肢体采血（导致药液稀释），严禁在乳腺癌术后患侧上肢采血（避免淋巴水肿风险）。4.3标本混匀动作动作要求：采集完毕后，必须颠倒混匀5∼8次。力度控制：动作应轻柔，严禁剧烈震荡。剧烈震荡→红细胞机械性破坏→细胞内K⁺、LDH释放→细胞内物质干扰胞外检测（溶血）。5组织样本采集标准作业程序（SOP）组织样本采集的核心矛盾在于如何最大程度缩短热缺血时间与保持组织形态完整性的平衡。热缺血时间是指器官/组织血液供应中断至开始冷冻或固定的时间间隔，是评价样本质量的核心指标。5.1手术室离体处理流程离体计时：手术医生切断组织血管的那一刻，即视为「离体时间0秒」。必须由巡回护士在标本袋上用不可擦拭记号笔记录精确到秒的时间（如09:30:15）。降温转运：离体后30秒内，必须将标本放入预冷的4∘病理交接：若需进行病理诊断，应遵循「病理优先」原则。在送交病理科取材后，再留取科研样本。严禁在病理诊断出具前将肿瘤组织全部耗尽。5.2分离与切割技术工具要求：必须使用无菌、无RNA酶、无DNA酶的器械。建议使用陶瓷刀或一次性手术刀片（避免金属刀头高温研磨导致的蛋白变性）。切块规格：冷冻样本：大小建议为0.5×0.5×0.5cm3。过厚导致液氮/干冰无法快速穿透中心固定样本：厚度不得超过0.5cm（约5mm）。过厚导致固定液渗透困难→内部组织自溶→5.3保存策略与选择优先液氮速冻：将样本投入液氮（−196∘C）中至少2分钟，直至不再冒出气泡（确认样本温度已降至−OCT包埋剂：用于冷冻切片。必须先将样本置于模具中，滴加OCT覆盖，再在液氮表面漂浮冷冻（避免OCT接触液氮沸腾溢出）。福尔马林固定：必须使用10%中性缓冲福尔马林（NBF）。固定液体积必须是样本体积的10∼20倍（确保完全浸没）。固定时间室温下为24∼48小时。时间<6小时固定不全，>72小时抗原丢失严重。6其他体液样本采集要点不同体液的物理性质与生化成分差异巨大，必须针对性地调整采集容器与抗凝策略。6.1尿液样本采集类型：优先采集晨尿（浓缩度高，成分稳定）。若需随机尿，必须记录采集时间。防腐剂：若无法在2小时内处理，必须添加防腐剂：尿生化/激素：加浓盐酸（pH<3），每100mL尿液加5mL。尿沉渣/细胞学：加麝香草酚或甲醛（极少量，防止破坏细胞形态）。清洁要求：采集前必须指导受试者进行会阴部清洗（女性避开月经期），留取中段尿（舍弃前段与后段，减少包皮垢或脱落细胞污染）。6.2脑脊液（CSF）穿刺定位：通常选择L3∼L4或L4∼L5椎间隙。采集顺序：第1管用于细菌学检查（最易污染），第2管用于生化/免疫检查，第3管用于细胞计数。严禁颠倒顺序。压力记录：穿刺成功后必须立即测量初压，取液后测末压。正常卧位脑脊液压力为80∼1806.3唾液/口腔拭子禁食禁水：采集前30分钟内严禁进食、饮水或吸烟。刺激方式：若使用棉拭子，必须在双侧颊粘膜用力擦拭30∼40次（旋转刮取），并确保棉签头干燥后放入保存管。若使用唾液自然分泌法，需静坐低头引流，不要强行吐口水（避免混入唾液淀粉酶抑制剂或气泡）。7采集后处理与暂存样本离体后的每一秒延迟都在不可逆地降解生物大分子的原始信息。此环节的目标是将样本通过「极速冷冻」或「完美固定」锁定在采集时的生理状态。7.1血清/血浆分离操作离心参数：血清（红管/黄管）：1500∼血浆（绿管/紫管）：2000∼温度控制：离心机温度必须设定在4∘吸取技巧：使用移液管小心吸取上清液，严禁吸起底部的白细胞层（buffycoat）或红细胞凝块。若有红细胞混入，必须再次离心。7.2分装原则aliquot原则：严禁对大体积样本进行反复冻融。必须按单次实验用量（如200μL管材选择：必须使用耐低温、密封性好的聚丙烯（PP）管。管盖必须带O型圈（防止−80冻融次数限制：任何样本的冻融次数不得超过3次。超过3次的样本仅可用于非关键质控，不得用于高通量测序。8样本信息与标识管理样本信息的颗粒度与结构化程度决定了样本能否在未来的二次研究中被复用与挖掘。错误的标识等同于样本的彻底丢失。8.1唯一标识符（UID）编码规则：采用「机构代码+项目代码+年份+流水号」结构。例如：HOSP-PROJ-2025-00001。标签材质：必须使用耐低温（−196打印方式：必须使用热转印打印（分辨率>300DPI）。严禁使用手写标签（字迹可能被低温液氮浸湿褪色）或普通喷墨打印（墨水遇水化开）。8.2临床信息采集（CaseReportForm,CRF）最小数据集（MDS）：必须包含至少以下字段：人口学信息：性别、出生日期、民族。临床诊断：ICD-10编码、TNM分期（肿瘤类）、病理分级。样本信息：采集时间、离体时间、处理时间、样本量、外观描述（溶血/脂血/黄疸）。输助检查：关键影像学结果（如肿瘤大小）、关键生化指标。脱敏处理：在录入样本库管理系统（LIMS）前，必须删除受试者姓名、身份证号、电话号码等直接识别符，替换为UID。9质量控制与不良事件处置质量控制的终点不是发现错误，而是建立预防错误的机制。必须引入PDCA（计划-执行-检查-改进）循环管理样本质量。9.1样本质量抽检机制抽检比例：每月随机抽取上月入库样本量的5%进行质量核查。检测指标：DNA质量：NanoDrop检测A260/ARNA质量：RIN（RNAIntegrityNumber）值>7.0为优质，5.0∼蛋白质量：BCA法测定浓度，考马斯亮蓝染色检测降解条带。9.2职业暴露应急处理生物样本采集涉及针刺伤与血液喷溅风险，必须按3级应急响应处置。Ⅰ级响应（皮肤/粘膜接触）场景：血液溅入眼睛或沾染皮肤。处置动作：立即使用洗眼器冲洗眼睛15分钟（水流速度适中，避免损伤角膜）。皮肤使用肥皂液和流动水彻底清洗。报告科室负责人，并在24小时内进行基线传染病检测（HBV、HCV、HIV）。Ⅱ级响应（锐器刺伤）场景：针头刺破手套及皮肤。处置动作：严禁挤压伤口（挤压会将局部血液推入深部循环）。立即从近心端向远心端挤压出血，尽可能挤出损伤处的血液。用肥皂水和流动水清洗伤口，再用75%乙醇或0.5%碘伏消毒。若已知源患者为HIV阳性，必须在4小时内服用阻断药物（TDF/FTC+RAL），越早效果越好。Ⅲ级响应（样本大量泼洒/破裂）场景：液氮罐倾倒或大批量试管破碎。处置动作：立即疏散非相关人员，拉起警戒线。操作人员必须穿戴正压防护服或N95口罩+防护面屏+双层手套。使用吸水材料覆盖液体，倾倒0.5%次氯酸钠溶液覆盖作用30分钟（杀灭病原体）。清理废物按感染性医疗废物（黄色垃圾袋）双层打包，贴上「高危生物危害」标签。附录A：样本采集前准备核查清单检查项目检查标准合格(✓)不合格(×)备注受试者准备确认空腹8小时确认签署知情同意书物资准备真空采血管在有效期内批号：_________采血针型号匹配（21G/22G）冷却盒已预冷至4环境检查采集室已消毒，空间洁净废利器盒未满（<3/4）信息核对受试者姓名与I