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文档简介

1、荧光光度法测定核黄素的含量,实验一,一、实验目的,了解荧光法测定核黄素的原理和方法光谱分析法有哪些？学习荧光分光光度计的操作和使用,二、实验原理,核黄素（维生素B2），一种异咯嗪衍生物VB2在中性或弱碱性的水溶液中为黄色，并具有很强的荧光，但在强酸和强碱中易被破坏,二、实验原理,核黄素的激发光波长范围为440-500nm，发射光波长范围为510-550nm在稀溶液中，核黄素荧光强度与其浓度成正比样品中加入亚硫酸盐，将荧光素还原成无荧光物质，然后测定样品中残余荧光强度，两者之差即为核黄素所产生的荧光,三、试剂和器材,1.材料核黄素药片,三、试剂和器材,2.仪器和器材荧光分光光度计、天平试管、容量

2、瓶、烧杯、研钵、滤纸、漏斗,四、试剂的配制,核黄素标准液（5g/mL）准确称取核黄素10mg，加100mL浓度为1.71mol/L的醋酸和适量蒸馏水，置于水浴中直至完全溶解。冷却至室温，用蒸馏水定容至2000mL，转入棕色瓶中。,五、操作步骤,1.样品液的制备取样：取核黄素药片一粒，放入研钵中磨成粉；定容：用蒸馏水洗入容量瓶，定容至100mL，摇匀，浸提10min；过滤：收集部分滤液于试管中；稀释：取滤液2mL于棕色容量瓶中，加5mL1.74mol/LHAc，用蒸馏水定容100mL，待测。,五、操作步骤,2.标准曲线的制作取10只试管，按下表顺序操作：,五、操作步骤,注意：在测定中，如果待测样品溶液的荧光强度超出100%，则需要再行稀释，并记录稀释倍数；或者通过调节里灵敏度，最后乘以倍率亚硫酸钠不能过多，以免影响荧光强度；加入后立即读数，否则核黄素又被氧化成荧光型,六、结果处理,由1-6号管的数据，以核黄素含量（g）为横坐标，F值为纵坐标绘制标准曲线；求样品管F的平均值F-；由F-从标准曲线中求得样品管的含量（g）；计算你所称取药

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