临床常见标本的微生物检验

1、，主要内容1。一般临床标本的微生物检查1，血液，骨髓，静脉导管标本2，痰和下呼吸道标本3，尿液标本4，大便标本5，生殖器系统标本6，化脓和外伤标本7，穿刺液标本8，眼睛，耳朵，鼻子，咽拭标本9，组织标本。一、血、骨髓、静脉导管标本，(a)血液培养检查采血迹象临床怀疑有败血症、败血症或其他血液感染的患者1。发热(38)或低温(36)2。韩战3。白细胞增加(10109/L，特别是“核左移”不成熟或杆核白细胞增加)4。粒细胞减少(成熟多核白细胞1109/L)5。血小板减少6。皮肤粘膜出血7。在评估昏迷、休克、多器官功能衰竭8CRP增加可疑新生儿败血症时，除发烧或低热外几乎没有培养，对重症住院患者进行

2、系统的抗菌药物治疗之前，应尽快进行血液培养。长期使用骨髓炎或抗菌药物的人骨髓培养阳性率高于血液培养。(2)血液培养检查和消毒程序1。皮肤消毒程序：第3阶段(防止皮肤寄生菌污染)(1)用75%酒精擦拭静脉穿刺部位，30s以上；(2)然后使用1%-2%碘伏酊在30秒或10%碘伏作用60秒内从穿刺点向外消毒环，消毒部位直径达到3厘米以上；(3)最后用75%的酒精去除碘，酒精挥发，干燥后采血。新生儿及碘过敏患者可以消毒75%万60s的酒精，在穿刺部位进行酒精挥发干燥后穿刺采血。2.瓶消毒程序培养：(1) 75%酒精血液消毒培养瓶橡皮擦，作用60秒。(2)用无菌纱布或无菌棉棒去除橡胶塞表面残留的酒精，然

3、后注入血液。(。无论使用什么采血方法，血液培养中可接受的污染率通常为3%。1.严格的无菌工作，以避免身体表或中空炉的正常植物相污染；不要与血气、血液凝固采血同时进行。3.穿刺点消毒不要使用效率低下的消毒剂，不要从静脉注射中提取血液。4.不得从静脉导管或静脉输液口采集血液，从该部位采集血液时，应在申请书中注明；为了比较，最好同时用静脉采血。5.静脉血不建议直接进入病中，以免血液量调节出错或对患者不利。6.不主张把注射针放在瓶子里以增加污染机会。7.采集血液之前，先从冰箱里取出血培养瓶，恢复室温，采集后，不要放回冰箱。(3)采集和运输血液培养标本1。采集时间患者发冷前，体温升高前；使用抗菌剂之前；

4、如果患者已经在使用抗菌素的情况下出现明显的发热前症状，可以在韩战前或韩战后一小时内采血。如果没有明显的错别字阶段，在服用第二种抗菌素之前，应采取采血方法。没有明显感染病变或找不到发热原因的发热患者，以1小时以上，24小时-36h间隔2 3个血液标本后，2个以上采集。疑似沙门氏菌感染的患者取静脉血1-2周。建议：同时收集2-3瓶(其他部分)；需氧细菌，厌氧菌各副本，收集后同时检查；采血后2-5天，无需重复采血培养。2 .采集部位要求：双侧上肢静脉采血，“两病双面”采血培养。至少做“双面双瓶”。必要时从下肢静脉采血，进行第三次血液培养。动脉采血(1)不推荐，因为它比静脉血没有诊断价值。(2)静脉导

5、管，因为它伴随着高污染率。所谓的“双病双方”，是在一部分采血接种一套培养瓶，然后在另一部分采血接种另一套培养瓶。(通常是双臂)所谓的“双侧双病”，意思是从一个部位采血，接种一瓶氧气需求，然后从另一个部位采血，接种另一瓶厌氧病。静脉采血注入多种培养瓶，应视为单血培养。3 .要求收集次数：建议对怀疑菌血症、菌血症的成人患者同时提取2-3套(其他部分)血液培养标本。两瓶手臂同时采集血液培养标本。)建议同时收集2次(其他部分)婴儿及幼儿患者、血液培养标本。为什么要求采血多次？(1)菌血症具有“持续性”和“暂时性”点，多次采血可以提高阳性检出率，减少泄漏。两瓶以上血液培养以上的血液培养结果呈阳性，细菌鉴

6、定结果也相同，被判断为感染菌，因药物敏感症进行临床申报。检查2瓶以上的血液培养，结果仅培养1瓶，将潜在污染细菌(如葡萄球菌、葡萄球菌、红藻等)用作污染细菌。出现多种细菌排除污染可能性后，可以考虑腹水细菌败血症的诊断。只发送一瓶血液培养，培养这种潜在的污染菌。其临床意义不确定，应与临床医生讨论其可能的临床价值。(2)血液感染有一级和二级分划，多次采血培养有助于循环外感染部位的诊断。(3)菌血症患者大部分是间歇性的，病菌定期出现在血液中，在灭菌期间，不管临床症状经历过什么重病，患者血液中病原菌的浓度都相当低，因此多次要求采血，但24小时内一般不超过3次。4 .采血量要求：成人患者推荐的采血量为每套

7、10毫升以上，每瓶5毫升以上。婴幼儿患者建议的采血量为每瓶2ml以上。说明：血样采集量是影响检出率的最重要因素。成人血液培养采血量在2 30毫升之间，病原体检出率与采血量成正比增加。每增加1毫升血液，病原体的检出率就增加了3.2%。儿童患者血液中病原体的浓度高，因此血液培养量不必与成人相同。对血液疾病患者或血液容量相对较低的患者，最好利用儿童病减少采血量，提高病原体的检出率。5 .血液培养标本的携带要求：(1)采集后，血液培养瓶必须在一小时内送到实验室。(2)血培养瓶在接种前和接种后都不能冷藏或冷冻。血液样本处理，1 .自动血液培养系统：立即放入仪器内，采取下一步措施，直到仪器警报提示良性疾病

8、。2.传统血液培养瓶：放入35温箱孵化，每天观察，生长情况立即改变，如果第7天无菌生长持续，则需要最后接种。双相培养瓶，2 .导管相关血流感染的标本培养；导管相关血流感染：最常见的是血管内导管相关血流感染(CRBSI)；发生率与导管类型、导管相关医疗护理频率、患者状况等有关。短期留置血管内导管，皮肤值细菌通过皮下隧道移植到导管尖端，随后发生感染；长期留置血管内导管、导管被细菌污染，导管产生细菌菌落，引起感染；血液传染的细菌可以在血管内导管中定值，引起新的病变。、皮肤凝固酶阴性葡萄球菌在输液管中定，怀疑与导管相关的血流感染的患者可以使用培养方法(推荐同时):1。用马基半定量培养法培养血管内导管的

9、尖端片段：收集：75%酒精消毒导管周围皮肤；移动导管，无菌剪刀末端5厘米，直接放置在灭菌试管中；应立即检查，防止干燥，常规培养保存在15分钟，42小时以内。接种：用无菌镊子在一千盘血液中交叉滚动5厘米导管4次，然后扔掉，放入二氧化碳5% 35温度箱中。治疗：24小时后血液琼脂盘生长如果有15个菌落，则暗示存在潜在的导管相关血流感染。不建议培养细菌肉汤。因为增菌扩大了污染的可能性，结果变得不可靠。2.外周静脉血采集培养：至少提取2个血液培养，至少1个在外周静脉血穿刺中采集血液，至少1个在导管中心或静脉下腔膜中采集血液，两者之间的采血时间必须为，Maki滚动方法，2，痰和下呼吸道标本，痰在口咽通和

10、不可避免污染的唾液中，口咽菌落的浓度可达108 109/ml。据调查，国内常规痰标本中约有一半显示出唾液的严重污染现象。(a)x线检查显示，发烧、咳嗽和痰、痰、粘液性、粘液性或血性、胸痛、气、肺部气味和湿罗音、周围白细胞计数和中性粒细胞比率明显增加，肺部有炎症性浸润或胸腔积液，甚至感染性休克和呼吸衰竭患者，应采取痰或下呼吸道标本。在给疑似SARS、肺炭疽病、肺传染病等强呼吸道传染病患者采集检查标本时，必须注意生物安全保护。(b)应用抗生素前收集痰标本的收集时间；收集样本后1 2小时内要立即进行实验室处理。痰标本是最古老、最广泛使用的，但也是最有争议的标本。取得标本前，要去除牙托，清洁口腔，例如

11、刷牙和刷牙。深度咳嗽，标本采集过程要有专业医务人员的指导；对于细菌性肺炎，痰标本每天进行1次，连续2 3天检查。除非痰的外观特性发生变化，否则不建议在24小时内多次收集。怀疑分枝杆菌感染者，连续3天早晨取痰。(c)采集方法自然痰法，早上痰法好。用清水反复刷牙，用力咳嗽呼吸道深痰，将痰直接吐到灭菌容器中，尽快送到。否则，某些细菌(如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌)可能会在外部死亡。未及时检验的标本在室温下保存了要求开闭肺深痰，不要吐痰。2 .外伤性痰采方法(均由医生操作):通过支气管镜抽吸法(支气管肺泡灌洗液、防止污染样品刷等)，直接从肺部感染病变中提取高浓度病原体更安全，但喉部正常的植物性污染是不可

12、避免的。虽然使用人工气道吸入分泌物(导管吸入、防止污染清洗等)，但人工气道病原体或值细菌很多，因此最好在采集前检查细胞血液。通过气管穿刺讲义采集的下呼吸道标本没有被上呼吸道污染，多用于厌氧细菌培养，但患者不容易接受。经壁针吸也用于原因不明的肺炎或接近胸壁的病变。感染结核杆菌的婴幼儿用痰法向后压舌板，用棉棉棉棉棒插入咽部，儿童受到刺激，咳嗽分泌物。由于雾化引起的痰或痰量很少的情况下，由5%NaCl雾化诱导痰。哮喘患者不能使用这种方法。痰标本运送，保存，1 .收集标本后2小时内送到实验室；否则，嗜肺链球菌、嗜血杆菌等毒菌可能会死亡。2.延迟检查或待处理的标本应放在4 的冰箱保管中(肺炎链球菌、流感

13、嗜血菌除外)，但应在24小时内处理。3.非典、炭疽病、传染病等疑似强呼吸道流行病的标本，必须在整个过程中注意生物安全。4.口腔污染的标本不能进行厌氧细菌培养。痰标本处理，I .痰标本的革兰染色涂层检查：其目的是判断标本是否适合细菌培养，对病原体的数量分类有助于初步报告，培养基选择和培养结果的确定。一般认为，在下呼吸道合格的标本中，高浓度细胞和支气管柱状上皮细胞较多，来自被唾液污染的颊粘膜的扁平上皮细胞较少，其判定标准如下：a，b级痰标本适合培养。c，d级标本应以高倍率镜观察区分，根据视野中白细胞或纤毛柱状上皮细胞的数量、细菌的种类和分布等进行判定。e级是不合格的标本。2 .清洗痰标本：目的：为

14、了最大限度地排除上呼吸道正常植物上的污染：方法：将痰放入包含15-20毫升灭菌生理盐水的试管，剧烈震动5-10s，然后用接种环埋下沉入管子底部的一小块脓，放入其他无菌试管，重复同样的方法两次。iii。痰标本的均匀化：目的：提高痰培养标本的阳性率，有助于痰核内部细菌暴露。方法：将等量无菌PH7.6磷酸盐缓冲液制成的1%胰蛋白酶溶液放入痰中，在37温度箱内消化90分钟，将粘液均匀化，对菌培养没有影响。还可以使用玻璃组织研磨机或振荡器。痰标本处理(一般)，痰区3区刮皮板(和麦康凯板MAC)需要培养嗜血杆菌的情况下，添加抗生素(每千毫升巧克力30米，巴什肽50毫克，氯丁霉素1毫克)血液板放在35普通温

15、度盒中，巧克力板放在5%CO2温度盒中。18-24小时后观察。他们认为，痰培养结果在培养细菌的时候，判断细菌是病原体还是携带菌存在问题，很难提取这些标本，不污染携带菌。现代感染的特点是低免疫人口的增加，条件病原体、非病原体的感染增加，这些特性也给病原体的判断带来了困难。规范要求(见)，有意义的痰培养结果，合格的痰标本培养优良品种异常生长(“)，合格的痰标本少量生长，但涂层显微镜检查结果(streptococcus pneumoniae，Haemophilus influenza，)，无意义痰培养结果，痰培养为多种病原体少量(105CFU/ml或革兰阳性球菌104 cfu/mm)，带有上呼吸道正

16、常菌的细菌(如链球菌、表皮葡萄球菌、非致病性淋球菌、白喉等)的痰(不是绝对的，在多因素的影响下综合判断)2 .在尿液标本的采集及培养中，问题是污染杂菌，所以要严格无菌操作。3.尿液标本采集后要立即检查，不能在尿液中添加防腐剂和消毒药。4 .除非进行流行病学调查，长期留置尿管患者的日常尿液培养没有临床意义，大量病原体经常可以在这样的患者中检测出来，如果导管的留置时间延长，很容易发生与患者尿道感染不一致的微生物生长；5.不能从尿液袋底部的壶嘴取样，尿液袋内的尿液也不能用于培养，会引起污染；6.临床上，应经常让患者服用清洁中尿，在医疗人员的监督下，正确地给患者留下清洁中尿。7.由于各种原因，患者不能

17、妥善保管中间尿液，实验室只能评价培养尿液标本的结果，或者分析前尿液标本污染了多种细菌，所以经常有无法正确说明的结果，因此临床的正确诊断和治疗可能会延迟。以下因子可以减少尿液中细菌的数量，判断结果时要注意，用抗生素治疗会抑制细菌的生长；尿稀释，尿比重1.003，营养成分减少，细菌生长迟缓；尿ph 8.5，细菌生长受阻；小便频繁的时候，膀胱里的细菌停留很短的时间，殖民地数量减少。尿横向消毒剂混合在标本中，影响细菌繁殖，种群数量减少。细菌的生长速度和营养要求不同，菌落数也不同。免疫方法，接种到血液板；放置在35普通温度箱中；18-24小时后观察。使用1ul或10ul定量接种环。尿培养scrill，1ul接种环：菌落数*1000/ml10ul接种环：菌落数*100/ml5ul接种环：菌落数*200/ml，尿培养结果表明，肾脏向膀胱排出的正常尿液是无菌的，但通过膀胱的尿液向外排出尿道时，尿道下裂的正常植物污染会引起细菌。因此，必须正确评价通过多种方法获得的尿液标本培养结果，才能有效诱导临床上合理的治疗。一般来说，中尿液标本中的单细