常用药典分析方法

1、.,第一节 药典采用的计量单位、 符号与专业术语 第二节 药典常用分析方法,第六章 中国药典常用分析方法,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,一法定计量单位和符号,长度： 米m 分米dm 厘米cm 毫米mm 微米m 纳米nm,体积： 升L 毫升mL 微升L,波数 厘米的倒数cm-1,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,一法定计量单位和符号,质（重）量： 千克kg 克g 毫克 mg 微克g 纳克ng,压力 ： 帕Pa 千帕kPa 兆帕MPa,密度 千克每立方米 Kg/m3,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,1、溶解度,是药品的一种物理性质,是指

2、药品在溶剂中的溶解能力. 药典中的溶解度是指在各品种项下选用的溶剂中的溶解性能.,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,实验法 除另有规定外,称取研成细粉的供试品或量取液体供试品,置于252一定溶剂中,每隔5min强力振摇30秒,观察30分内的溶解情况，如不见溶质颗粒或液滴即为完全溶解,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,极易溶解系指溶质（1g或1ml）能在溶剂不到1ml中溶解. 易溶 系指溶质（1g或1ml）能在溶剂1不到10ml中溶解. 溶解 系指溶质（1g或1ml）能在溶剂1不到30ml中溶解. 略溶系指溶质（1g或1ml）能在溶剂30不

3、到100ml中溶解. 微溶系指溶质（1g或1ml）能在溶剂100不到1000ml中溶解. 极微溶解系指溶质（1g或1ml）能在剂1000不到10000ml中 溶解. 几乎不溶或不溶 系指溶质（1g或1ml）能在溶剂10000ml 中不能完全溶解.,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,2、温度 温度以摄氏度（）表示： 水浴温度 98100 热水 7080 微温或温水 4050 室温 1030 冷水 210 冰浴 0 放冷 系指放冷至室温,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,3、百分比（%） 百分比用“%”表示，系指重量的比例；但溶液百 分比,除

4、另有规定外,系指溶液100ml含有溶质若干克； 乙醇的百分比,系指在20时容量的比例.此外根据需 要可采用下列符号： （g/g）表示溶液100g含有溶质若干克 （ml/ml）表示溶液100ml含有溶质毫升 （ml/g）表示溶液100g含有溶质若干毫升 （g/ml）表示溶液100ml含有溶质若干克.,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,4、液体的滴 液体的滴指在20时1.0ml水相当于20滴.,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,5、溶液后记示的“（110）”等符号 系指固体溶质1.0g或液体溶质1.0mL加溶剂使 成10ml的溶液 未指明用何

5、种溶剂时,均系指水溶液 两种或两种以上液体的混合物,品名间用半字 线“-”隔开,其后括号内所示的 “：”符号,系指各液体混合时的体积 （重量）比例.,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,6、药筛 药典所用的药筛，选用国家标准的R40/3系列,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,7、粉末粗细 最粗粉 指能全部通过一号筛,但混有能通过 三号筛不超过20的粉末 粗粉 指能全部通过二号筛,但混有能通过 四号筛不超过40的粉末 中粉 指能全部通过四号筛,但混有能通过 五号筛不超过60的粉末 细粉 指能全部通过五号筛,并含能通过 六号筛不少于95的粉末

6、极细粉 指能全部通过六号筛,并含能通过 七号不少于95的粉末 最细粉 指能全部通过八号筛,并含能通过 九号不少于95的粉末,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,8、滴定液和试液的浓度 本版药典使用的滴定液和试液的浓度, 以mol/L(摩尔/升)表示. 其浓度要求精密标定的滴定液用“XXX 滴定液（YYYmol/L）”表示. 作其他用途不需要精密标定其浓度 时,用“Y mol/L XXX溶液”表示以示区别.,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,9、贮藏项下的规定,系对药品贮存与保管的基本要求.,遮光 系指用不透光的容器包装， 例如棕色容器或黑纸

7、包裹的无色透明、 半透明容器 密闭 系指将容器密闭,以防尘土及异物进入 密封 系指将容器密封以防止风化、吸潮、挥发或,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,熔封或严封 系指将容器熔封或用适宜的材料严封,以防空气与水分的侵入并防止污染 阴凉处 系指不超过20 凉暗处 系指避光并不超过20 冷处 系指2-10.,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,10 标准品对照品与试药,(1) 标准品 指用于生物检定、抗生素或生化药品中含 量或效价测定的标准物质,按效价单位（或 g）计,以国际标准品进行标定.,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二

8、专业术语,(2)对照品 指在用于检测时,除另有规定外,均按干燥品 （或无水物）进行计算后使用的标准物质.,(3)试药 指不同等级的符合国家标准或国家有关规定标准的化学试剂.,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,标准品与对照品选用原则,标准品、对照品系指用于鉴别、检查、含量测定的标准物质. 标准品与对照品均由国家药品监督管理部门指定的单位制备、标定和供应. 在检测时除效价测定采用“标准品”、以及某些检查或含量测定应采用“对照品”外, 其他可用化学试剂取代,应尽量避免使用标准品或对照品.,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,11 称取样品的要求,

9、试验中的供试品与试液等“称重”或“量取” 的量均以阿拉伯数码表示,其精确度可根 据数据值的有效数位来确定.,(1)“称取”或“量取”的精密度,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,称取“0.1g”,系指称取重量可为0.06-0.14g 称取“2g”,系指称取重量可为1.5-2.5g 称取“2.0g”,系指称取重量可为1.95-2.05g 称取“2.00g”,指称取重量可为1.995-2.005g,.,二 专业术语,规定“精密称定”时,系指称取重量应准确 至所取重量的千分之一.,规定“称定”时,系指称取重量应准确至所 取重量的百分之一.,规定精密量取时,系指量取体积的准确

10、度 应符合国家标准中对该体积移液管的精 密度要求.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,.,二 专业术语,规定“量取”时,系指可用量筒或按照量取 体积的有效数位选用量具.,取用量为“约”若干时,系指取用量不得超 过规定量的10.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,.,(2)恒重 恒重系指供试品连续两次干燥或灼烧后 的重量差异在0.3mg以下的重量. 干燥至恒重的第二次级以后各次称重均 应在规定条件下干燥1h后进行干燥或炽 灼至恒重的第二次称重应在继续炽灼 30min后进行.,二 专业术语,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,.,二 专业术语,(3)“干燥品计算”的概念

11、 试验中规定“按干燥品（或无水物,或 无溶剂）计算“时,除另有规定外,应取 未经干燥（或未去水、或未去溶剂）的 供试品进行试验,并将计算中的取用量 按检查项下测得的干燥失重（或水分、 或溶剂）扣除.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,.,二 专业术语,(4)空白试验 试验中的“空白试验”,系指在不加供试 品或以等量溶剂替代供试品的情况下,按 同法操作所得的结果； 含量测定中的“并将滴定的结果用空白 试验较正”.系指按供试品所耗滴定液的 毫升数与空白试验中所耗滴定液毫升数 之差进行计算.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,.,二 专业术语,12、限度数值要求 （1）纯度和限度

12、数值 标准中规定的各种纯度和限度数值以 及制剂的重（装）量差异(包括上限和下 限两个数值本身及中间数值),规定的这 些数值不论是百分数还是绝对数字,其最 后一位数字都是有效位. 试验结果在运算过程中,可比规定的有 效数字多保留一位数,而后根据有效数字 的修约规则舍至规定有效位.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,.,第二节 药典常用分析方法,二 专业术语,（2）原料药的含量百分数 原料药的含量百分数,除另有规定外, 均按重量计.如规定上限为100以上时, 系指用本药典规定的分析方法测定时可 能达到的数值,它为药典规定的限度或 允许偏差,并非真实含有量；如未规定 上限时,系指不超过10

13、1.1.,.,第一节 药典采用的计量单位、符号与专业术语,二 专业术语,（3）制剂的含量百分数 制剂的含量限度范围,系根据主药含量的 多少、测定方法、生产过程和贮存期间 可能产生的偏差或变化而制定的,生产中 应按标示量度100投料,如已知某一成分 在生产或贮存期间含量会降低,生产时可 适当增加投料量,以保证在有效期或使用 期内的含量能符合规定.,.,第二节 药典常用分析方法,一 氮测定法,凯氏定氮法药物分析 杜马氏法元素定量分析 范斯莱克法生化分析 （氨基氮测定）,.,第二节 药典常用分析方法,一 氮测定法,1、原理 含氮供试品与浓硫酸共热，供试品中所含氮转变成氨，并与硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸

14、铵，用氢氧化钠碱化后，释出氨，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸吸收后，用标准酸液或标准碱液滴定，用空白试验校正。,.,第二节 药典常用分析方法,一 氮测定法,凯氏定氮法分为3个步骤,(1) 消解 (凯氏烧瓶中进行) 将样品、Con.H2SO4、K2SO4、CuSO4放入凯氏烧瓶中一起加热，有机含N化合物中的N全部转变成NH3并以铵盐的形式固定(NH4)2SO4、NH4HSO4。,.,第二节 药典常用分析方法,一 氮测定法,H2SO4：氧化剂和炭化剂。 SO2和SO3 消解一般在通风橱中进行,K2SO4：提高H2SO4沸点 缩短消解时间,CuSO4：催化剂，使消解速度加快,消解产物：(NH4)

15、2SO4、NH4HSO4,.,第二节 药典常用分析方法,一 氮测定法,(2) 蒸馏与吸收,用40%的NaOH溶液 水蒸气蒸馏,(NH4)2SO4+2NaOHNa2SO4+2NH3+2H2O NH4HSO4+NaOHNaHSO4+NH3+H2O,.,第二节 药典常用分析方法,一 氮测定法,(3) 测定, 直接滴定法,吸收液：2%硼酸溶液 滴定液：0.005mol/L H2SO4液 每1ml的0.005mol/L H2SO4液=0.1401mg的N 指示剂：甲基红-溴甲酚绿混合指示剂 终点颜色：灰紫色 NH3+H3BO3NH3.H3BO3 2NH3.H3BO3+H2SO4(NH4)2SO4+2H3

16、BO3,.,第二节 药典常用分析方法,一 氮测定法, 剩余滴定法,用标准盐酸或硫酸作吸收液。 将蒸馏出来的NH3吸收于定过量的标准酸溶液中，过量的酸用标准碱溶液滴定。,.,第二节 药典常用分析方法,二 电位滴定法,原理： 是一种容量分析中确定终点或选择核对指示剂变色域的方法. 应用标准溶液滴定待测物溶液过程中,借助指示电极参比电极和电位计来监测滴定时电极电位的变化率, 发生“突跃”的最大点就是滴定的终点,以替代一般指示剂用变色来指示终点的方法.,.,2.终点指示方法,.,3. 应 用,第二节 药典常用分析方法,二 电位滴定法,酸碱滴定法：PHV（含非水） 沉淀滴定法：PAgV 络合滴定法：PM

17、V 氧化还原滴定法：EV,.,第二节 药典常用分析方法,三 永停滴定法,1. 原 理,测量时, 把两个相同的铂电极插入滴定溶液中,在两个电极间外加小电压（10200mv）, 进行滴定，根据电流变化情况确定终点。,.,第二节 药典常用分析方法,三 永停滴定法,可逆电对：I2/I 两个铂电极间外加一个小电压, 接正端的电极发生氧化反应：2II22e,接负端的电极发生还原反应：I22e2I ,即发生电解。 只有两个电极上都发生反应,他们之间才会有电流通过。 I2/ I,在溶液中与双铂电极组成电池 ,给一个很小的外加电压就能产生电解,有电流通过,称为可逆电对。,可逆电对与不可逆电对,.,第二节 药典常

18、用分析方法,三 永停滴定法,电对的氧化态和还原态浓度相等时电流最大; 不相等时电流的大小决定于浓度低的那个氧化态和还原态的浓度。,.,第二节 药典常用分析方法,三 永停滴定法,不可逆电对：S4O62与S2O32(S4O62/ S2O32),.,第二节 药典常用分析方法,三 永停滴定法,永停滴定法: 利用上述现象确定滴定终点的方法。,.,第二节 药典常用分析方法,三 永停滴定法,2. 指示终点的方法,滴定剂属可逆电对,被测物属不可逆电对 如：I2滴定Na2S2O3,终点前： a.溶液中只有S4O62/ S2O32电对,虽有外加电压, 也不能产生电解。 b.溶液中虽有I,阳极上有I氧化成I2的可能

19、性, 无I2 ,故电解反应同样不能发生。 所以,终点前电流计指针一直在0电流位置上不动。,.,第二节 药典常用分析方法,三 永停滴定法,终点时：达到终点有稍过量的I2,溶液中有I2/ I可逆电对,电极上产生电解反应,有电流通过,电流计指针开始偏转并不再返回0,指示滴定终点到达。,终点后：随I2浓度的逐渐增加,电解浓度逐渐增大。,.,第二节 药典常用分析方法,三 永停滴定法,滴定剂为不可逆电对,被测物为可逆电对 如Na2S2O3滴定I2,终点前：即存在I2/ I的可逆电对,有电流通过,滴定越接近终点,I2的浓度逐渐变小, 电流逐渐变小。,终点时：由于I2浓度为0, 电解电流变为0,指针突然下降并

20、停留在0电流的位置保持不动,指示滴定终点到达。,.,第二节 药典常用分析方法,三 永停滴定法,终点后：溶液中只有S4O62/ S2O32的不可逆电对,无电解发生,电流降到最低点并不在变化,.,第二节 药典常用分析方法,三 永停滴定法,滴定剂与被滴定剂均为可逆电对 如Ce4滴定Fe2,滴定前：溶液中只有Fe2, 无Fe3存在,阴极上不可能有还原反应, 无电解反应,无电流通过。,.,第二节 药典常用分析方法,三 永停滴定法,滴定时：当Ce4Fe3 Fe3/ Fe2可逆 电流不断; 当【Fe3】=【Fe2】时,电流达到最大值, 继续加入Ce4 , 【Fe2】 ,电流。,终点时：电流降至最低点。 阳极

21、【O】：Fe2Fe3e 阴极【H】：Fe3eFe2,.,第二节 药典常用分析方法,三 永停滴定法,终点后：Ce4过量，溶液中有Ce4/ Ce2可逆电对，【Ce4】不断 电流又开始上升。 阳极【O】：Ce2Ce42e 阴极【H】：Ce42eCe2,.,第二节 药典常用分析方法,三 永停滴定法,3. 应 用,(1)重氮化滴定法的终点指示,(2)在用Karl Fisher法测定微量水 分时的终点指示（自习）,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法,紫外可见分光光度法 原理：根据LambertBeer定律 A = E CL E：吸收系数 C:单位浓度 L:液层厚度,.,第二节 药典常用分析方法,四

22、光谱法,与E关系 E= 吸收物质的摩尔质量（分子量） 强吸收度：=104105 弱吸收度：102 中强吸收：=102104,吸收系数有两种：,摩尔吸收系数（）：指在一定波长下,溶液浓度为1mol/L厚度为1时的吸收度.,百分吸收系数（ ）：指在一定波长下,溶液浓度为1%（W/V）厚度为1的吸收度.,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法,(2) 应 用,定性鉴别：,max及或E Amax /Amin 与标准品溶液的吸收光谱比较,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法, 纯度检查：,在某波长，药物无吸收，而所含杂质有吸收，可检查某杂质的限度。,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法,如：肾

23、上腺素中肾上腺铜的检查,肾上腺素 2mg/mL 的0.05mol/L HCl液,310nm处测得的A0.05,肾上腺铜的E=435 ,求其限量,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法, 含量测定,a.单组分的测定方法,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法,b. 两组分测定方法： 计算分光光度法,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法,2.荧光分析法, 原理：物质在受到激发光（ex）照 射后产生了较长波长的荧光（em） 溶液的荧光强度和溶液的吸光程度、溶液中荧光物质的荧光效率等因素有关。,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法,F：荧光强度 K：荧光效率 I0：入射光强度 C：荧光物质

24、的浓度 E：吸收系数 l：液层的厚度,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法, 应 用, 鉴别： ex和em 荧光激发光谱, 发射光谱,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法, 含量测定：,a.标准曲线法,b.比例法（对照法）,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法, 说明,a. 药物本身无荧光： 加衍生试剂（荧胺、邻苯二甲醛（OPA）丹酰氯）,使成荧光物质后测定。,b.荧光测定影响因素多： 溶剂、pH值、散射光、荧光物质浓度 故做空白试验，不易测得绝对荧光强度。,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法,3.红外分光光度法 原理： 由分子的振动及转动能级跃迁而引起的。 一束具有连续波长

25、的红外光通过物质时，当物质分子中某个基团的振动频率和红外光的频率一致时，分子便吸收能量并发生跃迁。根据分子吸收红外光的情况进行分析的方法为红外分光光度法.,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法,应用,已知化合物的鉴定： a.同时测定样品和标准品吸收光谱 b.样品图谱与标准品的吸收光谱比较,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法,未知化合物的研究,有机化合物官能团 推定结构细节,如共轭结构、脂环、芳环及其取代情况等 推定分子骨架,功能团位置和分子的主体结构.,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法,药物的纯度检查 杂质有自身吸收峰, 使纯物质红外光谱吸收峰增多,通过图谱可推断含有某杂质.

26、,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法,含量测定,选择一个预测成分的特征吸收峰,此吸收峰不被其他成分干扰即可. 定量时多采用内标法,依对照品比较法公式计算含量.,.,第二节 药典常用分析方法,四 光谱法,红外吸收光谱特征性较强 常用于物质的鉴定时比UV法更可靠.,操作麻烦 测定的准确度及精密度, 不如UV法, 用作含量测定的较少.,.,第二节 药典常用分析方法,五 色谱法,原理：吸附剂对不同化合物的吸附力不同,展开剂对各组分的溶解解吸能力不同,使待分离的组分Rf值不同,不同物质最后形成相互分离的斑点., TLC,.,第二节 药典常用分析方法,五 色谱法,应用 定性分析,样品、对照品在同一薄

27、层板上点样展开 要求Rf 值斑点颜色一致.,.,第二节 药典常用分析方法,五 色谱法,杂质检查,对照品对照法 高低浓度对照法,杂质斑点的数目及颜色不得超过规定.,.,第二节 药典常用分析方法,五 色谱法, 定量分析,c.采用薄层扫描仪直接在薄层板上测定,a.目视法,b.浦集斑点洗脱后测定,.,第二节 药典常用分析方法,五 色谱法,2.气相色谱法（GC）,原理 样品中各组分在固定相与载气间分配,由于各组分的分配系数不同而分离,.,第二节 药典常用分析方法,五 色谱法,一般要求（ChP） 载气：N2 色谱柱：填充柱 毛细管柱 进样口温度：高于柱温30-50 进样量：不大于数微升 检测器：常用氢焰离

28、子化检测器（FID） 检测温度一般高于柱温,不得低于100,以免水气凝结,常用250-350.,.,第二节 药典常用分析方法,五 色谱法,系统适用性试验（ChP）,色谱柱的理论板数（n）,.,第二节 药典常用分析方法,五 色谱法, 分离度（R）, 拖尾因子,.,第二节 药典常用分析方法,五 色谱法,重复性 取各品种项下的对照溶液,连续进样5次,除另有规定外,其峰面积测定值的相对标准差应2.0%,.,第二节 药典常用分析方法,五 色谱法,应用 定性：根据tR,含量测定：a内标法 b外标法,.,第二节 药典常用分析方法,五 色谱法,杂质检查,a 峰面积归一化法 b 主成分自身对照法 c 内标法测定

29、供试品中杂质的总量限度 d 内标法加校正因子测定供试品中某个 杂质含量 e 外标法测定供试品中某个杂质的含量,.,第二节 药典常用分析方法,五 色谱法, HPLC,分类： 液固吸附柱色谱法 液液分配柱色谱法 离子交换柱色谱法 分子排阻塞谱法,.,第二节 药典常用分析方法,五 色谱法, 液-液分配柱色谱法,原理:根据物质在两相不相混容的溶剂间溶解度不同,而具有不同分配系数,从而达到分离。,.,第二节 药典常用分析方法,五 色谱法,常用反相液-液色谱法,流动相：水、甲醇-水、乙腈-水 固定相：十八烷基硅烷键合硅胶 （ODS或C8）,.,第二节 药典常用分析方法,五 色谱法,系统适用性试验 应用:鉴别检查含量测定 同GC,.,第二节 药典常用分析方法,六 PH值测定法, 原理,玻璃电极:指示电极（电位随溶液中待测氢离子活度变化而变化的电极） 饱和甘汞电极:参比电极（电位值基本不变的电极）,玻璃电极、饱和甘汞电极与被测溶液组成电池：,（）玻璃电极待测溶液饱和甘汞电极（）,.,第二节 药典常用分析方法,六 PH值测定法,电动势：=E参E玻,E玻=K0.059pH K玻璃电极常数,=E参K0.059pH,K已知并固定不变，测得, 可求出待测溶液的pH值。,.,第二节 药典常用分析方法,六 PH值测定法,两次测量法,再用样