课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

1、主题背景，尿素CO(NH2)2重要农业氮肥。只有被土壤中的细菌分解成NH3，才能被植物吸收和利用。co (NH2) 2 CO2 2n H3，主题2分解土壤分解元素的细菌的分离和计算，第一，研究思路，(a)菌种筛选，1例：寻找高温DNA聚合酶，启示：PCR技术：高温(930C)，在查找目标菌株时，为环境选择_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 高温生物，高温环境(热泉，火山口)，寻找，Taq细菌，筛选原因：热泉的高温条件去除大部分微生物，保存耐热Taq细菌。2实验室微生物筛选原理，人

2、们提供营养、温度、pH等目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长。想法：在这个培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的物质是什么？碳源：葡萄糖，元素，氮源：元素，这个公式能筛选出产生脲酶的细菌吗？怎么了？原则上可以。只有生产脲酶的细菌才能使用尿素作为氮源存活。3在微生物学中_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _，某些种类的微生物生长，抑制或阻止其他种类的微生物的结果：如果培养一定的时间，其细菌数量会增加，以稀释涂层板等方法进行精制的培养分离。如何计算细菌？1用显微镜直接计数，用血细胞

3、计数板(血细胞计数板)用显微镜计算特定容积内样品的微生物数量。2稀释涂层板法(间接计数)，101，102，103，104，105，106，(2)使用稀释涂层板法计算样品中活细菌的数量。原则1群体1生菌，在30 300的板块上计算群体数。要培养3个以上的名誉殖民地平均。统计菌落往往低于活细菌的实际数量。读课本P22，讨论这两个学生认为正确的事。如果有问题，错在哪里？一级生：没有重复实验(至少涂了3个板)二级生：a组结果误差太大，不能用于计算平均值。计算公式：有些学生在稀释倍数为106的培养基上，用234来测量平板中群体数量的平均值。那么，每个样品的菌落数(涂层平板时使用的稀释剂体积为0.1ml)

4、()a . 2.34108 b . 2.34109 c . 234d . 23.4，b，每个样品的菌株数=(CV，设定比较目的：排除实验组非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可靠性。(1)A同学是这个结果的可能原因吗？设定比较实验，以排除土壤样品可能影响其他培养基污染(或其他含氮物质混合)、(2)测试结果的两个因素？这个例子表明，实验结果必须有说服力，对比设置必须。节目1:其他学生用相同的土壤样本和a同学一起实验，节目2: a同学准备的培养基没有土壤样本的培养，作为空白对照，证明培养基被污染了。预测结果：如果结果与A同学匹配，则证明_ _ _ _ _ _ _ _ _，实验过程：样品稀释涂

5、层板，微生物培养和观察，菌落数，第二，实验设计，土壤取样，准备培养基，(a)土壤取样，肥沃，在接近ph的中性湿润土壤中取样。先铲出3厘米表土药，然后重新取样，将样品装入事先准备好的信封。“最大数量的“微生物天然培养基”，约70%-90%是细菌，(2)准备培养基，选择培养基(尿素是唯一的氮源)准备牛肉奶油蛋白胨培养基相同的菌液，牛肉奶油蛋白胨培养基中生长的群体数量明显大于选择培养基的数量，因此牛肉奶油蛋白胨培养基中的选择培养基是选择培养基的数量，(对照角色)，想？为什么制造牛肉软膏蛋白胨培养基？(c)样品稀释涂层板，稀释倍数为101 106。每种稀释度由3个选择培养基和1个牛肉软膏蛋白胨培养基进

6、行。(4)微生物培养和观察，计数菌落数时，每24小时统计一次种群数量。选择殖民地数量稳定时的记录作为结果，防止培养时间不足，群体流失。培养其他微生物经常需要不同的培养温度。细菌：在30 37 培养1 2d放线菌：在25 28 培养5 7d真菌：在25 28 培养3 4d。不同种类细菌形成的殖民地，在大小、形状、光泽、颜色、硬度、透明度等方面一度具有特色，殖民地特性可以作为识别菌株的重要依据。殖民地，殖民地，(a)无菌手术1，采土的小铲子的土一样的袋子在使用前必须杀菌。2、火焰旁边应该叫土壤。在火附近将众所周知的土样倒入锥子瓶里，装满棉塞。3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火边操作。(b)

7、标明培养基种类、培养日期、平板培养样品稀释程度；(c)规划，3，操作提示，4，结果分析和评估，1。培养菌是否有污染的细菌，选择培养基是否筛选群体？对照组培养皿没有菌落，表明培养基没有污染。牛肉油液培养基的群数过多的选择培养基的群数意味着选择培养基筛选了部分群体。四、结果分析和评价，2 .为了获得任何稀释，殖民地30-300的板块，这种稀释程度至少说明了两个板块的殖民数量？接近表示操作成功。5，主题扩展，1 .在以尿素为唯一氮源的培养基中添加酚红指示剂。培养某种细菌后升高PH，表示该细菌能分解尿素的指示剂就会变红。2 .饮用水中大肠杆菌量的测定方法是将一定量的水作为细菌过滤器，将过滤膜放入李红-米蓝培养基中培养。大肠杆菌群殖民地呈现黑色，通过在水样中记忆大肠杆菌的数量来计数。关于此主题的知识摘要：集成练习，1。使用选择培养基的目的是()培养细菌b .真菌c .大量繁殖所需的微生物d .将特定微生物的特定特性与其他微生物区分开来2 .合成脲酶的微生物所需的碳源和氮源分别为()A.CO2和N2 B .葡萄糖和NH3 C.CO2和元素D .葡萄糖和元素C，D，3 .以下说法不正确()a .科学家在70-80度的热泉中用高温ta q DNA合成酶分离。b .统计稀释度的5个板的群数按M1、M2、M3、M4、M5的顺序，作为此样本群数的估计值，计算结果为M3。c .设置对照实验的主