（优质医学）梅毒感染的实验室检测流程及策略.ppt

1、梅毒感染的实验室检测 流程与策略,1,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,梅毒流行病学简介 梅毒实验室检测流程 罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果 梅毒实验室检测策略,主要内容,2,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,据最新估计，全球每年有1200万新发梅毒感染病例，其中200万为孕妇,WHO. 2011; WHO. 2012; UNICEF. 2011.,梅毒感染新发病例 (单位：百万),全球梅毒流行现状,3,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,梅毒起源于美洲，然后从美洲到西班牙，从欧洲到亚洲印度，1505年从印度传入广东岭

2、南（“广东疮”），后传到全国各地。,少数民族地区居民梅毒感染率 = 10% 牧区人群梅毒感染率 = 48% 部分城市地区人群梅毒感染率 = 5% 部分农村地区人群梅毒感染率 = 2-3%,我国梅毒流行现状,4,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,通过三大措施，梅毒在我国实现基本消灭 健康教育和宣传运动 免费梅毒筛查（梅毒血清制动试验、荧光抗体试验） 治疗,我国梅毒基本消灭(1950-1964年),作为重大防治成就、学术成就，赢得国际上的广泛认可。 1978年获得全国科学大会奖 发表论文我国对梅毒的控制和消灭、梅毒的传播及在中国的消灭,我国梅毒流行现状,5,医学实验室认可

3、经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,中国梅毒报告发病趋势,梅毒报告病例数448 620例，居甲乙类传染病第3位 梅毒报病较2011年增长4.41%，隐性梅毒增长的贡献率99.6%,（此幻灯片内容源自中国疾病预防控制中心性病控制中心龚向东教授）,我国梅毒流行现状,6,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,梅毒是一个可以临床治愈的传染病,病例诊断依据 病史 症状 实验室检查 实验室检查结果对梅毒诊断及判愈有决定性意义,我国梅毒流行现状,7,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,我国政府梅毒控制相关政策,卫生部于2010年6月3日下发了关于中国预

4、防与控制梅毒规划（2010-2020年） 卫生部2011年2月12日下发预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播工作实施方案 国务院2012年1月13日中国预防控制艾滋病五年行动计划（21011-2015年） 2013年1月实施性病防治管理办法,梅毒控制主要措施： 提高梅毒实验室检测质量 加强梅毒筛查力度,我国梅毒流行现状,8,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,梅毒流行病学简介 梅毒实验室检测流程 罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果 梅毒实验室检测策略,主要内容,9,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,常用梅毒实验室检测方法,病原学检测 血清学检测,10,医

5、学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,病原学检查,原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。 方法： （1）暗视显微镜检查 （2）镀银染色法 （3）核酸检测（血液标本？） 注：梅毒螺旋体目前体外人工培养还没有获得成功，仅能通过接种兔睾丸等部位进行有限增殖。,11,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,病原学检查的临床意义,螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后

6、和尽早切断传染源都有十分重要的意义。 如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性。,12,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,梅毒血清学检测方法,非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体） 梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）两类方法。,13,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,非梅毒螺旋体抗原血清学检测,方法包括： （1）快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) （2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） （3）性病研究实验室试验 (VDRL)等。 基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇 抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼

7、所见 上述方法的敏感性和特异性都基本相似,14,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,梅毒螺旋体抗原血清学检测,抗原为梅毒螺旋体特异蛋白（包括螺旋体重组特异抗原），检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体。 感染梅毒螺旋体后，一旦梅毒螺旋体抗体试验呈阳性，则患者终身阳性。,15,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,梅毒螺旋体抗原血清学试验方法,梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA) 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA） 化学发光免疫分析法（CLIA） 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测 (RT) 荧光螺旋体抗体吸收试

8、验（FTA-ABS） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）,16,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,梅毒螺旋体免疫学检测的发展历程,1980s,2000,EIA被FDA批准用于确认试验和血液筛查,英国公共健康实验室指南：EIA可以作为替代VDRL/RPR+TPHA的选择之一,2001,FDA批准EIA用于临床诊断,2008,欧盟指南推荐：EIA/CIA/TPPA用于筛查，不再推荐VDRL/RPR,2009,美国CDC-APHL报告：EIA/CIA用于筛查,. European guideline on the management of syphili

9、s 2008 STD treatment guideline 2006 US CDC,17,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,2014欧洲梅毒管理指南,自动化的化学发光检测已经用于许多大型的欧洲实验室，尤其适合对无症状的人群和献血者进行高通量的筛查。,该检测流程更能检测非常早期的梅毒感染。,European guideline on the management of syphilis 2014,18,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,美国梅毒检测类型的变化,化学发光的测试数量逐年增加,19,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.1

10、1.29,为何选择ECLIA/CLIA?,自动化（高通量） 低成本（高样本量的情况下） 更少的实验室职业危害 没有假阴性 结果客观 检测IgM抗体，可用于诊断非常早期的感染,VS,US CDC: reverse sequence syphilis screening,20,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,检测原理: 双抗原夹心法(DAGS) ，检测时间18 分钟,快速,高效,全自动,电化学发光(ECLIA)免疫检测原理,21,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,梅毒流行病学简介 梅毒实验室检测流程 罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果 梅毒实验室检

11、测策略,主要内容,22,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,国际多中心研究,Clinical and Vaccine Immunology January 2015 Volume 22 Number 1,23,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,国际多中心研究,24,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,研究设计,Elecsys,Liaison,Serodia,Immulite,Architect,Liaison,Serodia,Immulite,Architect,敏感性评估,特异性评估,Vitros,Enzygnost,

12、25,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,样本信息,26,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,研究结果,敏感性结果 * Elecsys 梅毒检测试剂在所有实验室中的敏感度结果均达到 100%,* 2例样本结果为“不确定”，4例为“无反应性”,27,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,研究结果,梅毒分期样本的敏感性结果 * Elecsys 梅毒检测试剂在能100%检测出不同分期梅毒样本,# 排除4例疑似操作错误的样本最终计算结果时排除2例确证试验结果为未确定的样本 * 排除2例确证试验结果为未确定的样本,28,医学实验室认可

13、经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,研究结果,总体特异性结果（3批次试剂） * Elecsys 梅毒检测试剂的总体特异性大于 99.85%,29,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,研究结果,特异性结果-献血员样本 * Elecsys 梅毒检测试剂在献血员样本中的总体特异性达到 99.93%,30,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,研究结果,特异性结果-常规样本 * Elecsys 梅毒检测试剂在常规样本中的总体特异性达到 99.80%,31,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,研究结果,干扰样本结果 * El

14、ecsys 梅毒检测试剂在可能的干扰样本中的敏感性和特异性均更高,EBV (+) / Syphilis (-),特异性,HIV (+) / Syphilis (-),EBV-Lyme (+) / Syphilis (-),100.0,90.0,80.0,敏感性,HIV (+) / Syphilis (+),n=228,（%）,（%）,32,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,中国多中心研究,广西,海南,黑龙江,济南,杭州,安徽,武汉,湖南,山西,内蒙古,西安,甘肃,青海,成都,贵州,西藏,乌鲁木齐,北京*2,南京,上海,长春,昆明,南宁,广州*2,福州*2,牵头单位：

15、四川大学华西医院 王兰兰主任/陶传敏教授 研究中心：15家,33,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,研究中心,34,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,研究设计,常规随机样本,预留确诊样本,“临界”样本*,干扰样本,不一致结果,RIBA（免疫印迹）,* 临界样本（检测结果出现不一致结果可能性较大的区间）： Architect：0.9 COI 5 ELISA：0.75 COI 3 国产化学发光法：0.9 COI 5,35,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,样本信息,4种比对方法，4组样本 * 所有比对组共收集样本近2万例

16、,36,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,研究结果,Elecsys梅毒检测结果的阳性结果分布 * 在所有常规随机样本中的阳性率为4.97%，剔除传染病院数据后的阳性率为2.58%,Cut off 1.0,例 数,检测结果区间,37,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,研究结果,Elecsys与不同比对方法间的一致性 * Elecsys 与所有比对方法在常规随机样本中的一致性达到 99.48%,38,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,Elecsys 比对试剂,随机样本结果,随机样本的敏感性和特异性结果 * Elecsys

17、 在所有比对组随机样本中的假阳性和假阴性结果均最少,vs,vs,vs,vs,假阴性 假阳性,假阴性 假阳性,假阴性 假阳性,假阴性 假阳性,39,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,研究结果,随机样本的敏感性和特异性结果 * Elecsys 在所有比对组随机样本中的敏感性均达到 100%，特异性也更优异,40,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,研究结果,预留确诊样本的敏感性 * Elecsys 及所有比对试剂均能 100%检测出不同分期的确诊梅毒样本,41,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,研究结果,预留干扰样本 干扰

18、样本类型： HBV，HCV，HIV，EBV，自身免疫病，淋巴瘤，多发性骨髓瘤，其他肿瘤，妊娠,各组共收集920例干扰样本，仅出现8例假阳或假阴结果，基本无干扰,* FN: false negative FP: false positive,42,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,研究结果,预留“临界”样本 * Elecsys 在所有比对组”临界”样本中的假阳性和假阴性结果更少,* 临界样本（检测结果出现不一致结果可能性较大的区间）： Architect：0.9 COI 5 ELISA：0.75 COI 3 国产化学发光法：0.9 COI 5,43,医学实验室认可经验交

19、流会-杭州三台山 2011.11.29,具有最佳的灵敏度与特异性 灵敏度为100% （MCE结果） 特异性为99.88（MCE结果） 有效检出不同分期的梅毒感染,即用型试剂 18 分钟出检测结果 仅需10 ml 样本量,高精密度 室间、仪器间、批内、批间精密度高 无灰区 准确区分样本，无需重测,安全,高效,可靠,Elecsys Syphilis免疫检测,降低确诊试验需求,优化工作流程,较高的血清转换特异性,降低传播风险,提高检测速度,提高效率，节省成本,44,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,梅毒流行病学简介 梅毒实验室检测流程 罗氏梅毒检测试剂多中心研究结果 梅毒实

20、验室检测策略,主要内容,45,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,梅毒实验室检测策略,初筛试验：EIA/TPPA(TPHA),46,CLIA+/EIA+/TPPA(TPHA)- 或 CLIA+/EIA+/TPPA(TPHA)-,CLIA+/EIA+/TPPA(TPHA)+,RPR Titer,确认试验：IgG immunoblot,anti-treponemal IgM test,梅毒排除,RPR Titer 1:32,梅毒活动期,不能排除梅毒活动期,+,+,-,-,European guideline on the management of syphilis 201

21、4,46,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,梅毒实验室检测策略,方法选择依据 敏感性、特异性（试剂评估） 操作流程（可及性） 试剂的价格、结果时间（可接收性）,47,初筛目的和方法选择,47,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,规范化梅毒实验室检测要求,根据目的选择检测方法及检测策略。 可采用任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验。,48,医学实验室认可经验交流会-杭州三台山 2011.11.29,非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义,梅毒活动期诊断 治疗监测：因治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。 神经梅毒确诊：VDRL