土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

1、微生物的培养与应用,土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,尿素分子的立体结构,CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3,脲酶,两个主要目的： （1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌； （2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。,研究思路,美国黄石国家公园的一个热泉,（一）筛选菌株,水生耐热细菌Taq ( Thermus aquaticus ) 耐高温的Taq DNA聚合酶 美国微生物学家布鲁克（T.Brock) 1966年发现耐热细菌,选择培养基,去哪里寻找耐高温的DNA聚合酶？,根据对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。,允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养

2、基，叫做选择培养基,尿素,尿素,（二）统计菌落数目,理论依据： 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在 30300的平板进行计数。,常用方法：稀释涂布平板法（统计活菌）,？,说明设置重复组的重要性。在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。,注意： 统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。这是因为当

3、两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。 显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。,每克样品中的菌株数 （CV）M C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积（ml) M：稀释倍数,显微镜直接计数,（三）设置对照,一是由于土样不同 二是由于培养基污染或操作失误。,（概念、目的）,另一种方案： 将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。,一种方案： 可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验，如果

4、结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。,实验设计,从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。,“微生物的天然培养基”,一土壤取样,数量最大、种类最多,大约70%90%是细菌,二制备培养基,由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为103107。 准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基。各有一个空白对照。还需要6个灭菌试管和1个灭菌移液管 。 将稀释相同倍数的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌

5、落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。,三样品的稀释,好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。,为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？,30300,四微生物的培养与观察,形态、大小、 隆起程度、颜色,三接种,五计数,（菌落数稳定时）,操作提示,一无菌操作 1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭

6、菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 二做好标记 注明培养基种类、培养日期、平板培养样品 的稀释度等。 三规划时间,课题延伸,CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3,脲酶,pH升高 指示剂（酚红）将变红,习题,1、实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线（3条线均与下图中的链霉素带接触），将平板置于37条件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析以下叙述，不正确的是 A链霉素能阻止结核菌的生长 B链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效 C链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效 D链霉素可以用于治疗伤寒病人,2.利用生物工程生产啤酒、味