高效液相色谱使用详细操作步骤

1、高效液相色谱使用操作步骤一、泵操作面板PUMP：运行键 START：梯度运行键 PURGE：快冲键 RESET：复位键 HOLD： 程序暂停键 STOP： 泵停止键TIME： 程序开启键 FLOW：流速： RSVR： A B C PROG：程序 DEL：删除程序 PMAX：最大压力 PMIN：最小压力 ENTER：确定TIME 0 FLOW ENTER （设置流速）TIME 0 RSVR ABC ENTER （设置溶剂）TIME 0 PROG ENTER （设置程序）TIME 0 % A 30 ENTER （设置比例）TIME 0 % B 30 ENTER （设置比例）TIME 0 % C 4

2、0 ENTER （设置比例）DEL PROG 1 ENTER （删除程序）1. 对于梯度泵设定举例如下：(人参皂苷的梯度)TIME 0 PROG 1 ENTERTIME 0 % A 81 ENTERTIME 15 % A 81 ENTERTIME 60 % A 65 ENTERTIME 65 % A 0 ENTERTIME 80 % A 0 ENTERTIME 81 % A 81 ENTERTIME 100 % A 81 ENTER因为A+B之和始终是100%，所以B相就不用设了。7对于对照品在这种条件下只要对照品的峰全部出完后按下RESET键等20分钟即可进第二针进完针后按START键运行梯

3、度程序。但是对样品来说一定要等峰出完后再按下RESET键等基线基走直才可进下一针。二、检测器操作面板RESET：复位键 A/Z：调零键 WL：调波长 ENTER：确定三、实验前的准备工作1、实验前流动相提前配好过滤脱气。2、置换流动相时把泵的滤头从原来的流动相中换到新的流动相中滤头要轻拿轻放。3、液路排气顺序：首先打开排气阀按PURGE键进行排气结束后按STOP键停止再拧紧排气阀按PUMP键让泵运行。4、打开检测器首先观察右上角氘灯指示灯确认氘灯是否点亮，按WL键调好实验波长后按A/Z键调零。5、打开电脑打开在线工站选择对应的通道，输入实验信息、方法、包括采样控制，积分和仪器条件，积分面积外标

4、法测绝对含量归一法相对含量内标法测绝对含量；后点数据采集，将电压调到-2020，时间调到030，点零点校正后再点查看基线，大约1个小时左右基线基本稳定（就是基本成直线，因为检测器打开后需要一定的稳定时间，检测器基本稳定泵里面的流动相同时也就置换好了），就可以进样了。6、进对照品：对照品配成溶液后要过滤再进样等对照品的峰出来以后点停止采集输入文件名后保存。（一般连进三针为准）7、进样品：样品配成溶液后要过滤再进样等样品的峰出来以后点停止采集输入文件名后保存。8、进样阀搬阀顺序搬到LOAD位置时进针打完针后搬到INJECT位置进样要求打针匀速轻快搬阀轻快每次基本一样，外标法进样量是定量管的四五倍。

5、9、用以下公式算出样品含量：C标/C样=S标/S样10、做校正曲线：打开离线点打开打开对照品的谱图点积分方法（选用面积外标法）点组分表点全选输入所需要对照品的峰名点采用点校正点标准含量输入含量（可以是对照品的浓度也可以是百分数）OK点加入标样再次打开刚才打开的对照品的谱图校正完毕点峰名看校正曲线图点输出取名保存。11、计算样品的含量：打开离线-打开样品的谱图-点预览点加载加载刚才对照品的校正曲线谱图即可得出样品的含量四、液相色谱仪注意事项：1、泵正常工作时，在流动相和流速不变的前提下柱压应该是稳定的，当然在换流动相时压力变化是正常的，正常情况下如果柱压升高基本上都是由色谱柱使用时间长引起的（只

6、有更换色谱柱），如果正常情况下压力突然降低有可能是（1）接头处有漏液的地方，采取的方法是有滤纸检查，如有漏液的地方用扳手拧紧即可。如果没有漏液则可能是（2）白色的管子里面有气泡从而导致流动相进不到泵里面去，采取的方法是排气泡排气时：先STOP停泵打开排气阀按PURGE（快冲）键等气泡排完后先STOP停泵拧紧排气阀，其先后步骤不要搞反了。2、泵正常工作时最高压力最好不要超过200KG，所以打开泵以后可以将泵的最大压力调到200KG，这样如果压力超过上限则会自动报警停机，流速最好不用超过1ML/MIN，如果使用时压力超过200KG，建议将流速调低点以降低压力（在色谱柱正常的情况下），如果是因为色谱

7、柱长时间使用造成压力升高则建议更换色谱柱（因为色谱属于耗材长时间使用就需要更换，更换的主要依据色谱柱出峰不正常或者柱压力过高）。3、泵正常工作时平均每15天左右向注油孔加润滑油23滴。4、流动相里面如果有盐或酸类，做完实验后要先用95%二次蒸馏水与5%甲醇洗色谱柱40分钟左右，然后用纯甲醇洗30分钟左右才可以关机。第二天如果继续做实验流动相里面仍旧有盐或酸类，最好先用95%二次蒸馏水与5%甲醇过度20分钟，再用流动相。如果流动相里面只有甲醇，水，乙腈。做完实验后就不用95%二次蒸馏水5%甲醇冲洗，可直接用纯甲醇洗30分钟即可关机。5、C18色谱柱的耐酸PH值范围38使用时不要超出。6、仪器长期不用时一定要将滤头泡在甲醇里半月开机一次，如果开机时泵抽不上液可以打开排气阀按PURGE快冲。7、调反压器时要注意等液体流出来