课题3 分解纤维素的微生物的分离最新版本

1、1.判断选择性培养基是否发挥了选择性作用的控制因素有：(1)未接种的选择性培养基；(2)未接种的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基；(3)接种的牛肉膏蛋白胨(全营养)培养基；(4)接种的选择性培养基。上述数据表明，如果有机锡被长期污染，将导致_ _ _ _ _ _ _。如果我们将来要探索海洋沉积物中是否存在用于生态修复的三丁基锡分解菌，筛选目标菌株的培养基成分是蛋白胨、氯化钠、水和琼脂。在2011年广东高考中，人们使用含有有机锡化合物如三丁基锡和三苯基锡的涂料来涂覆船只和海洋建筑，有效防止海洋生物附着和生长。然而，最近的研究发现，油漆中的有机锡会释放到海洋中，对各种生物造成毒性。关于这种污染物的部分

2、研究如下，请回答：三丁基锡，生物多样性，稳定性。深圳第二模型，2011，16分)下面是三个探索土壤微生物的案例，请在相应的空白处回答。1)案例一：探究落叶是否在土壤微生物的作用下腐烂(分解)。设计思路：各组、对照组、实验组的处理情况，未处理的落叶土，处理过的落叶土，用相同数量的塑料袋包裹相同数量的落叶土，埋深5厘米。试验组的土壤应进行处理，以尽可能消除这种影响。土壤微生物的作用，灭菌，案例一：探索土壤微生物对淀粉的分解。实验步骤：(1)将农田土壤制成土壤浸出液，放入烧杯中静置一段时间。取两个烧杯，编号为A和B，放入等量的淀粉糊。向烧杯A和烧杯b中加入30毫升土壤浸出液。室温放置7天后，从烧杯A

3、中取出20毫升溶液，加入10毫升；A1和A2试管；从烧杯B中取20毫升溶液，分别加入10毫升B1和B2试管；向A1和B1中加入碘溶液；加入A2和B2，处理。观察试管并记录实验结果。(3)案例二：探索土壤微生物中是否存在纤维素分解菌。在实验过程中，土壤浸出液应接种在唯一碳源的培养基上，并用(试剂)鉴定。30毫升(等量)蒸馏水(无菌水)，(等量)费林试剂，变色，水浴加热，纤维素，刚果红，主题3分解纤维素的微生物的分离，(1)纤维素和纤维素酶，纤维素：由葡萄糖的端对端连接形成的高分子化合物，广泛存在于植物的根、茎、叶和其它器官中。世界上最丰富的多糖。纤维素酶：由微生物分泌的复合酶，包括C1酶、Cx酶

4、和葡萄糖苷酶。由于它们的协同作用，纤维素最终被分解成葡萄糖。纤维素、纤维二糖、葡萄糖、刚果红染色法，刚果红可与纤维素形成红色络合物，但不与水解的纤维二糖和葡萄糖反应。(2)纤维素分解菌的筛选：当添加刚果红的纤维素培养基用于培养微生物时，如果培养基中出现以菌落为中心的透明圈，则表明该菌落为纤维素分解菌，因为它分解了被岗国红染成红色的纤维素。1.对于实际设计，请根据实验流程图、提供的三份材料和“操作提示”以及对相关问题的思考，设计一个详细的实验方案。这个实验的过程和主题2中的实验过程有什么异同？该实验的过程和受试者2的过程之间的差异如下。第二个任务是用尿素作为唯一的氮源，直接将由土壤样品制成的细菌

5、悬液包被在选择性培养基上，然后直接分离菌落。在本课题中，通过选择性培养使纤维素分解细菌增殖，然后将细菌溶液涂布在选择性培养基上。其他步骤基本相同。2.为什么我们要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解细菌？由于生物与环境的相互依赖性，纤维素分解菌的含量在富含纤维素的环境中相对增加，因此从该土壤样品中获得目标微生物的概率高于普通环境。把滤纸埋在土壤里会有什么影响？你认为滤纸应该埋在土壤里多深？将滤纸埋在土壤中可以使纤维素分解菌相对聚集，这实际上是一个适合人为设置纤维素分解菌生存的环境。一般来说，纸应该埋在大约10厘米深的腐殖土里。阅读并思考，阅读教材第28 29页的“材料1”“材料3”，思考相关问题

6、。问题1:它是液体培养基，因为没有加入琼脂。问题2:它具有筛选功能，因为培养基中的碳源是纤维素，只有能分泌纤维素酶的纤维素分解菌才能生长。问题3:数据3中两种方法的优缺点是什么？你会选择哪一个？第一种方法是传统方法，其缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落混合；其优点是以这种方式显示的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。第二种方法的优点是易于操作，并且不存在群体混合问题。缺点是纤维素、琼脂和马铃薯汁都含有淀粉类物质，会使产生淀粉酶的微生物产生假阳性反应。然而，由这种产淀粉酶微生物产生的透明圈相当模糊，因为纤维素在培养基中占优势，所以它可以与由纤维素酶产生的透明圈区分开来。第二种方法的另一个缺点

7、是，一些微生物具有降解色素的能力，它们会在长期培养过程中降解刚果红，形成明显的透明圈，这很难与纤维素分解菌区分开来。问题4:为什么选择培养可以“浓缩”的微生物？在选择性培养的条件下，那些能够适应这种营养条件的微生物可以快速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物被抑制繁殖，因此它们可以起到“浓缩”的作用。土壤中纤维素分解菌的分离。1.土壤样品的采集：土壤样品的采集方法与本专题2相似。土壤样本应该在富含纤维素的环境中收集，因为在富含纤维素的环境中，通常会积累更多的纤维素分解微生物。如果找不到合适的环境，滤纸可以埋在土壤中，能够分解纤维素的微生物可以在大约一个月内生长。2.实际案例，2。选择性培养：

8、选择性培养所需的仪器有：250毫升锥形瓶、无菌称量瓶、药勺、1毫升和10毫升移液管、天平、摇床、温度计等。在250毫升锥形瓶中加入30毫升选择性培养基，瓶塞由8层纱布制成，瓶口紧闭，然后用两层包装纸包住瓶塞，用细绳扎紧，用121高压蒸汽灭菌20分钟。选择培养操作：称取20克土壤样品，在无菌条件下将其加入装有30毫升培养基的摇瓶中。将摇瓶放在摇床上，在30摇床培养1 2天，直至培养基变浑浊，重复上述方法再次培养，然后进行梯度稀释和平板涂布。刚果红染色法分离纤维素分解菌这一步所需的仪器有：无菌培养皿、涂片机、1毫升移液器、20毫升装有9毫升无菌水的大试管、培养箱等。培养基的配制应参照教科书边栏中的

9、比例。将200毫升培养基放入500毫升三角瓶中，在121高压灭菌20分钟。翻板操作：将灭菌后的固体培养基融化，按照无菌操作的要求，将15-20毫升培养基倒入无菌培养皿中，备用。涂布平板：取0.1毫升稀释度为104 106的细菌悬液，滴在平板培养基上，用涂布机均匀涂布细菌溶液，在30下倒置培养至菌落生长。每种稀释液应涂三块板，对照刚果红染色法，方法1:先培养微生物，然后加入刚果红进行显色反应，方法2:在倒平板时加入刚果红，思考这两种方法的优缺点，方法1的缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会造成菌落间的混乱；优点是以这种方式显示的颜色反应基本上是纤维素分解细菌的作用。第二个优点是操作简单，没有菌落混合

10、问题。第一个缺点是培养基中还含有淀粉类物质，这会使能产生淀粉酶的微生物产生假阳性反应；缺点2:有些微生物具有降解色素的能力，在长期培养过程中会降解刚果红，形成明显的透明圈，很难与纤维素分解菌区分开来。3。结果分析与评价，1。培养基的制备是否合格，以及培养基是否被筛选出菌落对照，这意味着培养基的制备是合格的。如果观察到产生透明圈的菌落，这可能表明已经获得了分解纤维素的微生物。2.分离结果是否一致因为土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌，所以细菌是最容易分离的。然而，由于土壤样品的环境不同，不同的学生可能会得到不同的真菌和放线菌分离结果。土壤采样选择性培养(这一步是否需要根据样品中目标菌株的数量来

11、确定)梯度稀释在具有特定选择性功能的培养基上涂布细菌悬液选择单个菌落发酵培养，课后练习2:深圳第二模型，2011，16分)以下是三个探索土壤微生物的案例，请在相应的空白处回答(1)案例一：探索落叶在土壤微生物的作用下是否腐烂(分解)。设计思路：各组、对照组、实验组的处理情况，未处理的落叶土，处理过的落叶土，用相同数量的塑料袋包裹相同数量的落叶土，埋深5厘米。试验组的土壤应进行处理，以尽可能消除这种影响。上述数据表明，如果有机锡被长期污染，它将导致下降，从而减少生态系统。如果我们将来要探索海洋沉积物中是否存在用于生态修复的三丁基锡分解菌，筛选目标菌株的培养基成分是蛋白胨、氯化钠、水和琼脂。在20

12、11年广东高考中，人们使用含有有机锡化合物如三丁基锡和三苯基锡的涂料来涂覆船只和海洋建筑，有效防止海洋生物附着和生长。然而，最近的研究发现，油漆中的有机锡会释放到海洋中，对各种生物造成毒性。关于这种污染物的一些研究如下，请回答：三丁基锡，生物多样性，稳定性，2，案例一：探索土壤微生物对淀粉的分解。实验步骤：(1)将农田土壤制成土壤浸出液，放入烧杯中静置一段时间。取两个烧杯，编号为A和B，放入等量的淀粉糊。向烧杯A和烧杯b中加入30毫升土壤浸出液。室温放置7天后，从烧杯A中取出20毫升溶液，加入10毫升；A1和A2试管；从烧杯B中取20毫升溶液，分别加入10毫升B1和B2试管；向A1和B1中加入碘溶液；加入A2和B2，处理。观察试管并记录实验结果。(3)案例二：探索土壤微生物中是否存在纤