实验设计(硕士)

1、.,实验设计 一、实验设计概论 （一）概念 （二）重要性及意义 二、实验设计原则 三、实验设计三要素 四、实验设计内容 （一）课题研究设计 （二）实验操作设计 1. 基本程序 2. 具体步骤和注意事项 五、计算机在科学研究中的应用,.,一、概论 （一）概念 实验设计: 是从事科学研究的设想和计划 是进行科学研究必须首先经过的步骤 也是能否达到研究目的的关键所在 包括课题研究设计和实验操作设计,.,（二）重要性和意义 良好的设计是成功的一半 能否达到研究目标的关键所在 设计按设计操作结果目标 蛋白检测技术：ELISA Western Blot 免疫组化 放免检测 抗体芯片 免疫共沉淀,.,二、实

2、验设计原则 1. 为目标服务 2. 简捷化的原则 用简单的方法能解决的问题不要用复杂的方法 以节省时间和经费 3. 要有创新意识 学术思路创新 技术方法创新 研究有所发现和突破 4. 可行 理论基础 实践条件,.,三、实验设计三要素 1. 分组随机化避免偏倚 2. 设置对照组 通过比较得结论，认识规律和特点 3. 实验的可重复性 样本量的问题 普遍规律：个别一般,.,四、实验设计的内容 （一）课题研究设计 研究生开题报告、课题研究计划 1. 选题方面 在充分调研了解某项目研究的目的和意义、国内外研究动态的基础上， 立题 科学性、迫切性和实用性,.,2. 明确研究目标 从事科学研究要解决的问题，

3、达到的目标 3. 确定研究内容 研究内容为研究的核心，内容为目标服务 4. 选定研究方法 据研究内容而定，方法为内容服务 不能为方法而方法 5. 解决关键技术 内容创新的关键，技术创新的主要内容。,.,6. 可行性分析 不仅要创新，而且可行，缺一不可 技术路线可行 研究方法可行 7. 工作基础 预实验 研究内容 研究方法,.,8. 条件保障 实验室建设 仪器设备情况 9. 课题组成员 人在科学研究中起决定作用 周密的实验，无人无法进行,.,（二）实验操作设计 研究生一定要掌握 1. 基本程序 熟悉观察指标 确定研究方法 查阅资料，熟悉该研究方法的各项内容 确定实验流程 物品、器材准备 试剂配制

4、 实验操作程序实施 结果判定、记录 数据处理,.,2. 具体步骤和注意事项 （1） 明确观察指标 了解课题研究的整体设计 关键是明确要解决的问题 明确研究内容 根据研究内容确定观察指标,.,（2） 选择合适的技术方法 简单、创新、可行 基因检测技术 PCR：扩增 杂交：膜杂交：Southern Blot Northern Blot 原位杂交 基因芯片：集成化,.,（）熟悉技术方法的有关知识 原理： 明白为什么能用此方法解决问题 如PCR原理：DNAn扩增 核酸分子杂交 探针标记 步骤：不仅知道如何做 还知道为什么这么做 （how and why),.,., 关键步骤：实验成败的关键 改建创新技

5、术方法 结果判定 阳性与阴性结果的判定与分析 真假阳性与意义 如何避免、克服和改进,.,（）关于试剂配制问题 整个实验的关键 一旦试剂配制不当 会导致整个实验的失败 如：抗凝剂凝血有核细胞分离,., 选对试剂： 磷酸盐，Tris-HCl, 钠盐 是否含水，分子量是多少 浓度：原装试剂纯度与浓度 不一定是100% 如：盐酸，甲醛 稀释的倍数关系：抗体等,., Ph值：适宜 AP-碱性（8.2） HRP中性（7.4） 多聚甲醛配制（8.0） 溶液： 水（最常用） 甲醇和乙醇等,., 消毒、灭菌问题 是否要求无菌操作 高压灭菌 应用于能耐高温试剂，如盐溶液 过滤除菌 应用于不耐高温试剂，如蛋白制剂,

6、., 试剂储存问题 避免蛋白制剂的反复冻融 温度：室温，-20 -80 ，-180 时间：有效期，半衰期 过滤,.,（）操作流程 物品器材准备充分 有条不紊，避免随用随抓的坏习惯 无菌问题,., 边做边思考 明白每一步所起作用 假如去掉此步，会有什么影响 假如改进此步，会有什么效果 技术改进与创新的基础 加样要看清试剂 否则导致整个实验失败,., 做上一步要想到下一步如何做 提前做好准备，避免手忙脚乱 如冰冻切片后固定，要提前配好固定液 结果要妥善保管，及时记录 保密，丢失 阳性结果丧失 如荧光染色及时照相，因结果不稳定,., 根据需要设置对照实验 保证结果的科学性和可信性 1. 阴性对照 2

7、. 阳性对照 3. 空白对照 4. 溶液对照：配试剂的溶液 5. 参比标准对照：用标准的药物做对照 6. 质控对照：控制实验稳定性对照,.,（）记录与归档 包括结果观察和实验方法两部分 应一并归档 边做边记录，避免归档时重整理 蓝黑或黑墨水记录 切忌用圆珠笔记录，否则，无法归档 打印原件归档,., 实验记录的基本要求 真实、及时、准确、完整 谨防随意乱记和随意涂改 更不能伪造，编造数据 实验记录的内容 实验的名称、目的、设计方案、时间 材料、方法、过程、观察指标 实验结果及分析等,.,（7）数据处理问题 要贯彻在研究工作的全过程 利用计算机进行分析处理 在数据处理过程中，善于发现问题 反馈修正研究和设计中的不足 边实验边处理数据 不易遗漏和丢失数据 若待实验结束后再处理、整理数据往 往会发现重要数据的丢失,.,（8）在整个实验过程中 注意发现新现象和意想不到的结果 重大的发现往往在偶然中获得的 不应删改实验记录，一定要真实,.,五、计算机在科学研究中的应用 1. 查阅资料（internet) 2. 实验设计(words) 3. 实验记录（Excel,