眼用药物(改剂型改途径)临床前安全性评价的一些考虑

1、发表日期20040220栏化学药品评价非临床安全性和有效性评价标题眼用药物(剂型改变途径)临床前安全性评价的几点思考作者文宇部门正文的内容眼用药物(剂型改变途径)临床前安全性评价的几点思考审查评价三个医学小组的文宇部分国内申请存在剂型眼药明显的现象，对临床前的安全性研究没有系统的认识，只提供了眼睛刺激性试验资料，不能结合申报品种的具体情况进行综合分析。 针对上述问题，结合国内外相关问题，提出以下剂型眼用药物临床前安全性评价的几点思考，想与大家探讨一下。一、一般考虑和一般药物临床前评价安全性评价原则一样，剂型眼用药物临床前评价的要点也在于安全性。 只是，这种安全性的想法有系统地出现，必须综合分析

2、眼科药物的特点和化合物本身的状况。 改变剂型的眼用药物临床前安全性评价的一般想法如下(1)全身毒性：眼部药物剂量极少，测定者结膜囊内最大液体容量为20-30ul，除10ul正常泪液外，最多只能容纳20ul药液。 眼部给药后药物进入体循环的量很少，一般不产生具有临床意义的全身药理作用。 通常，在以下情况下，不需要进一步进行全身毒性研究1 .药物眼睛吸收慢，可以明确排除该药物眼睛给药的全身作用。2 .药物可以吸收，但以前进行过充分的全身毒性研究(包括急性毒性、长期毒性、生殖毒性、突变、致癌性试验等)。(2)眼睛耐受性：1 .眼刺激性试验：眼用药物的临床前安全性首先需要评价眼刺激性，该试验在各种类型

3、的眼用药物的开发中不可或缺。1.1试验的意义：药物直接接触角膜时会产生刺激作用，表现为炎症反应。 短期接触刺激性强的药物的话，会产生灼热痛、眼泪、怕光等症状和结膜充血、浮肿等症状。 长时间接触刺激性弱的药物，会引起慢性结膜炎和眼睑炎，充血、分泌物多。兔眼类似人眼结构，用兔眼进行眼刺激性试验，提供初步的眼药安全性信息，保证受试者药物用于人眼时无明显刺激性。该试验结果显示，受试者对兔子的眼睛有一定的眼睛刺激性时，申请人有必要综合分析其原因(试验操作上的系统误差和兔子的眼睛和人眼的差异和药物自身的不同)和是否需要修正处方(PH、浓度、渗透压、粘度等)。1.2试验目的：观察动物眼睛接触受试者后发生的刺

4、激反应。1. 3试验类型：分为单次给药的眼刺激试验和反复给药的眼刺激试验。通常需要一次给药的眼刺激试验。结合单次给药的眼刺激试验结果，考虑是否进行反复给药的眼刺激试验。 通常，临床药物超过一周的药物，必须考虑反复给药眼刺激试验。1.4试验方法：1.4.1单次给药：以健康成年兔子为优先，每组给药量至少4只动物(4只眼)，体重2-3g，单笼饲养。 兔子的动物房温度为20(3)，相对湿度为30%-70%。 如果是人工光线的话，需要12小时的阳光、12小时的黑暗。 不吃水。 受试者的浓度一般不需要用原液或原浆稀释，在一只眼睛上滴下0.1ml或0.1g以内。 对于固体和粒子状物质，将其粉碎成微细的粉末，

5、给药体积必须是敲固的体积。 受试者滴下或涂在动物侧眼结膜囊上，另一侧作为空白对照。 给药后，轻轻闭上眼睑约1秒钟，保证药液与局部充分接触。 记录给药后1、24、48、72小时角膜、虹膜、结膜及其他观察到的损伤情况，用Draize眼部刺激试验评价。 观察时用荧光素钠检查角膜损伤，用裂隙灯检查角膜透明度和虹膜纹理的变化。如果72小时内没有出现刺激症状，该试验就结束。72小时内出现刺激症状时，应进行眼睛清洗试验：试验设置为3组，每组3只动物，受试者用药方法相同。 第一组不清洗，第二组在给眼睛用药2秒后用20ml温水或生理盐水清洗受试者的眼睛，第三组在给药4秒后用20ml温水或生理盐水清洗受试者的眼睛

6、。 滴加后观察24、48、72小时、4天、7天的眼睛反应，直到眼睛正常为止。 (该试验的意义是评价温水和生理食盐水清洗能否改善药物引起的眼部刺激，即评价该受试者的药物的眼部刺激是否可逆。 (请参见。)1.4.2反复给药：连续给药1周以上后，继续观察7-14天。 观察时尚，用荧光素钠检查角膜损伤，用裂隙灯检查角膜透明度和虹膜纹理的变化1.5结果：用表1评分方法，将每种动物的角膜、虹膜和结膜的刺激反应分数相加，是所有受试动物眼刺激反应的总和积分。 总分除以动物数，就是该受试者对眼刺激性的最后分数。 用表2的标准判定了受试者的刺激程度。表1Draize眼刺激试验评价表眼刺激反应分数角膜混浊(以最致密

7、的部分为基准)没有浑浊散在或弥漫性混浊，虹膜清晰可见半透明区域容易理解，虹膜模糊出现灰色半透明区域，虹膜细节不清楚，瞳孔大小才知道角膜不透明，混浊，虹膜无法辨认01234虹膜正常皱纹明显较深，充血、肿胀，角膜周围轻度充血，瞳孔还对光有反应肉眼可见坏死、出血，对光没有反应(其中的任一个或全部反应)。012结膜充血(指眼睑结膜和球结膜)血管正常血管充血呈鲜红色血管充血呈深红色，血管难以分辨弥漫性充血呈紫红色0123浮肿没有浮肿轻微浮肿(包括瞬膜)明显的浮肿，伴有部分眼睑外展浮肿直到眼睑的一半闭上从浮肿到眼睑超过半封闭01234分泌物没有分泌物少量分泌物分泌物弄湿眼皮和睫毛，粘在一起分泌物湿润了整个

8、眼睛区域，粘在一起0123综合要点16表2眼刺激性评价标准刺激度积分刺激度积分无刺激性0-3轻度刺激性4-8中度刺激性9-12重度刺激性13-162 .眼部长期给药的眼毒性试验受试者的药物应与作为临床药物的制剂基本相同，即用制剂的溶剂或赋形剂稀释药物，给药途径尽量模拟临床给药途径，保证药物与眼部的接触。 每次用药保持时间尽量模拟临床，通常每天给药4周。 除了观察全身指标外，还要重点观察可能波及给药局部的周围组织(包括角膜、虹膜、结膜、晶状体、视网膜、脉络膜)的反应和病理变化。3 .考试注意事项如果从保护动物的角度观察到严重的副作用，预计继续试验也无法提供本质的风险评价结果，就中止试验，将刺激受

9、试者动物的疼痛降到最小。4 .说明4.1眼部重复给药试验和眼部长期给药的毒性试验的意义分别很重要，如果两者互不可替代，可以同时观察给药的局部刺激性前者是观察评价受试者药物对眼睛前段(包括角膜、虹膜、结膜)的刺激性，后者是观察评价受试者药物对眼睛自身即眼睛前段(包括角膜、虹膜、结膜)和眼睛后段(水晶体、视网膜、脉络膜)的毒性。前者主要用荧光素钠和裂隙灯进行检查，后者主要用组织病理学检查。前者的考试时间短(7-14天)，后者的考试时间稍长(4周)。4.2 Draize眼刺激试验得到的信息：4.2.1根据判断标准得到的信息角膜混浊膜实质(骨胶原)自变性胶原浸润(取决于上皮和间质的损害程度)上皮细胞剥

10、离(由细胞毒性引起)虹膜角膜吸收程度和虹膜的损伤程度对光的反射性结膜充血提示炎症性血管扩张浮肿提示炎症性浮肿分泌物提示泪液分泌过多和炎症性浸润反应4.2.2在不同的观察时间得到的信息快发性反应迟发性反应组织的恢复性4.2.3其他角膜溃疡、上皮损伤、缺损脱落角膜表面的凹凸，干燥性清洗可以减轻或恶化损伤。被实验者和泪液的相容性从动物的行动判断有无疼痛用物理刺激监视损伤(3)致敏性眼药可能会引起过敏反应，多见于抗生素、局麻药、消毒剂等免疫原性药物。 有必要考察这些具有免疫原性的药物眼部给药是否会引起过敏反应。 目前认为，采用豚鼠皮肤过敏试验，能反映药物眼部给药时有无致敏性。(4)其他考试必要时，还没

11、有进行眼部给药后对瞳孔大小的影响及对角膜敏感性的影响的试验。(5)动物药费动力学评价临床前安全性需要结合动物药代动力学研究资料。 眼用药物的动物药代动力学研究包括眼部给药全身吸收试验和眼部给药局部PK试验两个试验。1 .眼部给药全身吸收试验：眼部给药后的药物只有被泪道吸收才能代谢，所以应该对改变剂型的眼药，特别是噻诺罗等可能引起严重全身不良反应的药物进行全身吸收试验。 目的是在制定的眼部给药方案时明确药物的全身吸收率(Cmax )和程度(AUC )，是否会因药物的全身吸收而引起明显严重的系统副作用，如心血管系统、呼吸系统的副作用。2 .眼部给药局部PK试验：2.1眼部PK试验的意义是，明确眼部

12、药物的吸收、分布、代谢、去除的特征，理解眼部给予的毒性靶器官，为综合评价临床前的安全性(也包括初步有效性)提供依据。人体可以进行眼部给药的全身吸收试验(只要提取血浆标本即可)，但从伦理上来说，人的泪膜/泪液/角膜/房水通常很难得到，因此，动物眼部PK试验对眼用药物来说是获得药物眼部PK参数的重要方法。2.2分为单次给药和反复给药PK试验。2.3这个试验需要解决的问题如下药物眼部给药后能否通过角膜屏障到达房水(通过测定房水中的药物浓度获得)，通过角膜在房水中维持在有效浓度以上的时间(抗生素类药物在病原菌MIC90以上的时间，为决定给药间隔提供依据)。什么是眼内组织中的药物分布(可以通过测定组织匀

13、浆中的药物含量来得到)。药物在眼内是否有积蓄性，特别是在眼的后段(通过反复给药时房水中的药物浓度的测定和组织匀浆中的药物含量的测定得到)。2.4试验中的注意事项：关于作用于眼表的药物，可以测定泪膜/泪液中的药物浓度关于作用于角膜的药物，可以测定角膜中的药物含量，作用于角膜后眼部组织的药物，可以测定房水中的药物浓度。采集泪膜/泪液/角膜/房水标本时，动物只能一只一只地使用。 只有这样，才能正确反映眼睛中的药物浓度，具有操作性。二、常见申报类型的评价要点(1)改变给药途径的剂型品种，如抗病毒药物被新开发为滴眼液。这种品种在市场上销售的使用途径(口服、静脉给药、皮肤外用等)的安全性认识上有基础，但改

14、变为眼部给药后，除了对眼部给药的眼部刺激性的研究外，还进行了针对眼部长期毒性和动物眼部PK的研究。(二)采用新辅助材料的剂型品种处方中使用国内外尚未使用的含有新辅料的剂型品种眼部药品时，为了明确新辅料是否具有全身毒性，应进行新辅料的急性毒性、长期毒性、突变、致癌性、生殖毒性试验。为了明确新辅助材料是否具有眼睛刺激性和长期给药眼睛毒性，进行了新辅助材料的眼睛刺激性试验和长期给药眼睛毒性试验。 为了明确新辅助材料的PK，需要进行动物眼部给药全身吸收试验和眼部PK试验。同时，进行了含有新助剂的制剂的眼刺激性试验、眼部长期给药的眼毒性试验和动物PK试验，调查新的助剂是否与主药相互作用。当申报的品种为变更辅助材料的品种时，根据变化的性质进行相应的研究。(3)具有缓释性的剂型品种，如脂质体滴眼液、眼用凝胶等。这种品种明显改变了原剂型制剂的眼部PK，因此有必要提供动物的眼部PK。 这是评价此类品种立题和临床前安全性的基础。必须提供新制剂的眼部刺激性试验。基于动物眼部PK数据，结合主药现有的人体PK数据，综合分析是否需要进行眼部长期给药的眼毒性试验(是否有新的安全性担心)。三、结语以上是笔者考核评价的经验，欢迎大家讨论。四、参考文献1.EMEA.non-clinicallocaltolerancetestingofmedicinalproducts .卷3 b2.oecd