光激化学发光技术介绍.ppt

1、1,Light Initiated Chemiluminescence Assay,光激化学发光（LiCA）,2,光激化学发光（LiCA）介绍,以高分子微粒为基础 两种微粒近距离 离子氧能量传递 主要特点： 高灵敏度 低本底 稳定 均相 免洗 广泛应用于生物分子间的相互作用,3,微粒的组成,感光微粒内含感光化合物 发光微粒内含发光化合物和镧系元素 微粒直径188nm，表面覆盖水凝胶 共价连接 增大的表面积 成百上千个生物分子，捕获目标分子,4,LiCA发光原理,核心原理是能量的近距离转移 转移的介质是高能态离子氧 红色激光680nm照射，感光微粒释放离子氧（4微秒），传播直径200nm，发光微

2、粒（520618nm），高能级的光 反应的基础有赖于两种微粒的相互接近 反应体系中，微粒的浓度很低，碰撞机率很低，本底信号微弱,5,原理 (1),6,原理 (2),7,LiCA的技术特点（一）,高灵敏度 信号产生逐级放大的结果 每个感光微粒释放出近6万个离子氧 离子氧作用于二甲基噻吩，产生大量紫外光 紫外光激发镧系元素 实际检测能力为10-15摩尔 理论检测能力为10-18摩尔,8,LiCA的技术特点（二）,低本底 时间分辨模式采集光信号（延迟150 ms），天然荧光的寿命小于100 ns 采用680 nm红光激发，生物样品中的荧光物质不敏感 发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，有别于荧光

3、，有效避免荧光物质干扰,9,稳定 均相环境使反应更充分 免洗操作杜绝随机误差和交叉污染 感光和发光的有机分子受到微粒的保护，环境稳定和安全 溶液中的氧浓度是一个常数 不易受到pH值、离子强度和温度的影响,LiCA的技术特点（三）,10,临床免疫的各项检测 生命科学的基础研究 新药的筛选 标记简便 检测过程简单,广泛应用,11,基本包被模式,GG-Streptavidin（SA）,FG- Antibody（Ab）,12,基本反应模式,biotin-antigen,primary Ab,secondary Ab (or protein A, G, LA),13,应用类型,配体受体 激酶 蛋白蛋白

4、免疫 蛋白酶 蛋白DNA,14,配体受体(1),TNFa-sTNFR1,Biotin,anti-TNFR1 IgG,FG,-TNFa,Protein A-,sTNFR1,15,配体受体(1),TNFa-sTNFR1,GG-SA,Biotin,anti-TNFR1 IgG,FG,-TNFa,Protein A-,sTNFR1,16,配体受体(1),TNFa-sTNFR1,GG-SA,Biotin,anti-TNFR1 IgG,FG,-TNFa,Protein A-,sTNFR1,17,配体受体(2),环磷酸腺苷 cAMP,Biotin,FG,- cAMP,anti-cAMP-,18,配体受体(2

5、),环磷酸腺苷 cAMP,GG-SA,Biotin,FG,- cAMP,anti-cAMP-,19,激酶,Akt,Biotin,anti-Gsk3 IgG,FG,-Gsk3,Protein A-,20,激酶,Akt,Biotin,anti-Gsk3 IgG,FG,-Gsk3,Protein A-,21,激酶,Akt,GG-SA,Biotin,anti-Gsk3 IgG,FG,-Gsk3,Protein A-,Akt,磷酸化,22,激酶,Akt,GG-SA,Biotin,anti-Gsk3 IgG,FG,-Gsk3,Protein A-,Akt,23,蛋白蛋白,Biotin,FG,-p53,An

6、ti-GST-,p53/HDM2,HDM2-,GST,24,蛋白蛋白,GG-SA,Biotin,FG,-p53,Anti-GST-,p53/HDM2,HDM2-,GST,25,免疫(1),肿瘤坏死因子 TNFa,Biotin,FG,- anti-TNFa,anti-TNFa-,TNFa,26,免疫(1),肿瘤坏死因子 TNFa,GG-SA,Biotin,FG,- anti-TNFa,anti-TNFa-,TNFa,27,免疫(2),Biotin,anti-TNFa,FG,-anti-TNFa,Protein A-,TNFa,肿瘤坏死因子 TNFa,GG-SA,28,免疫(2),GG-SA,Bi

7、otin,anti-TNFa,FG,-anti-TNFa,Protein A-,TNFa,肿瘤坏死因子 TNFa,29,蛋白酶(1),GG-SA,Biotin,FG,- substrate,anti-digoxigenin-,组织蛋白酶 Cathepsin D,- digoxigenin,Cathepsin D,水解,30,蛋白酶(2),ACE,Biotin,FG,- angiotensin I,anti-angiotensin II-,ACE,切割,31,蛋白酶(2),ACE,GG-SA,Biotin,FG,- angiotensin I I,anti-angiotensin II-,32,

8、蛋白DNA,ERa-DNA,Biotin,FG,-ERa,anti-digoxigenin-,-digoxigenin,DNA,33,蛋白DNA,ERa-ERE,GG-SA,Biotin,FG,-ERa,anti-digoxigenin-,-digoxigenin,DNA,34,当前成功应用实例,35,HBsAg,GG-SA,Anti-HBs-FG,HBsAg,36,Anti-HBs,GG-SA,Biotin-HBsAg,Anti-HBs,37,HBeAg,GG-SA,Biotin,FG,-Anti-HBe,Anti-HBe-,HBeAg,38,Anti-HBe,GG-SA,Biotin,FG,-Anti-HBe,Anti-HBe-,中和HBeAg,39,Anti-HBc,GG-SA,Anti-HBc,40,检