微生物的培养.ppt

1、1，特集2微生物的培养和应用，课题1微生物的实验室培养，2，1，培养基分为哪两种，2，培养基一般含有什么营养物质？ 另外，需要满足什么样的要求？3、获得纯培养物的关键是什么？4、避免杂菌污染的方法主要有哪些4个方面，5、消毒、灭菌是什么，常用方法是什么？ 6、制造牛肉膏胨固体培养基的方法步骤，7、如何打倒平板？ 3.微生物类群，微生物，原核类：真核类，非细胞类：细菌，支原体，放线菌，蓝藻，个体微小，结构简单，酵母菌4，1 .细菌形态，5细菌主要以二分裂繁殖(如右图)，2 .细菌繁殖，3 .细菌菌落，定义：单一或少数细菌在固体培养基上大量繁殖，形成肉眼可见的具有一定形态结构的亚细胞群，称为菌落。

2、 特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。 功能：每种细菌在一定条件下形成的菌落，可作为菌种鉴定的重要依据。 6、一些菌落及其形态，7、一些菌落及其形态，8，4 .病毒结构，由核酸和蛋白质构成。 9、病毒结构、10、吸附、注入、合成、放出、组装、5 .病毒繁殖、病毒增殖一般是核酸合成核酸和蛋白质的吸附注入、6 .病毒的营养方式、寄生、11、微生物所需的五种营养要素物质、微生物所需的营养物质和功能、1 .碳源无机碳源： CO2； NaHCO3等有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等构成细胞物质和某些代谢产物的微生物的能量源，概念、源：作用：1 .微生物的碳源，12，无机氮源： N2、N

3、H4、NO3-、NH3等。 有机氮源：能为微生物提供n元素的营养物质，如尿素、牛肉膏、胨、氨基酸等。 主要用于合成含有蛋白质、核酸和n的代谢产物。 2 .微生物的氮源，概念：源：作用：3 .生长因子，常见生长因子：概念：作用：微生物生长不可缺少的微量有机物。 酶和核酸的组成成分。 维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。 13 .培养基、培养基(培养液)是人工制备的，是微生物生长专用的营养基质。 1 .培养基的种类和用途，2 .不同的微生物多采用不同的培养基处方(参照教材附录内容)，3 .每种培养基都一般含有水、碳源、氮源、无机盐等营养物质。 另外，微生物的生长需要满足pH、特殊营养物质例如：生长因子(

4、即需要细菌的生长，自己不能合成的化合物例如维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶)和氧、二氧化碳、渗透压等要求。14、培养基种类，不添加凝固剂，添加凝固剂，琼脂，工业生产，观察微生物运动，分类鉴定，微生物分离，鉴定，活菌计数，保存菌种，含有化学成分不明的天然物质，工业生产，培养基成分明确，分类鉴定，添加培养基中的化学物质，不需要的微生物的加入培养、分离所需微生物的培养基中的指示剂和化学药品，识别不同种类的微生物，识别不同种类的微生物，选择培养基，液体培养基、半固体培养基、固体培养基、15、液体培养基：表面生长、均一混浊生长、沉淀成长、back、半固体培养基： (是否运动)，无动力，有动力(分散)，固体培养

5、基：分离导入了菌落，16个目的基因的受体细胞，选择几个培养基，分离加入青霉素的培养基、酵母菌、霉菌等真菌，分离不加氮源的无氮培养基、固氮菌，加入含碳有机物分离自营养微生物，加入青霉素等抗生素的培养基、back、17、血清中含有多种蛋白质(白蛋白、球蛋白、铁蛋白等)的多种金属离子的激素粘着蛋白、冷析球蛋白、胶原质等附着促进物质。 各种生长因子转铁蛋白不明的成分在人工合成培养基中只能维持细胞的生存，为了使细胞生长繁殖，需要补充一定量的天然培养基(如血清)。 18 .无菌技术，1 .无菌技术概念，无菌操作是指在培养微生物的操作中，防止杂菌污染的方法。 消毒定义：利用化学或物理的方法，杀死部分微生物的

6、过程。 2、消毒和灭菌概念两者的差异，灭菌的定义：用化学试剂和物理方法消灭所有微生物，达到完全无菌的过程，包括所有细菌的繁殖体、芽胞、霉菌和病毒。 灭菌和消毒技术是微生物工作中最普通最重要的技术。 煮沸消毒法： 100煮沸5-6分钟。 巴氏消毒法：用70-75煮30分钟或80分钟。 化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁面等进行皮肤消毒的氯气消毒水源。 紫外线消毒。 消毒的方法：3 .常用的消毒和灭菌方法，20、烧灼灭菌、干热灭菌：用160-170加热1-2h。 高压蒸汽灭菌： 100kPa，121下15-30min .灭菌方法：21，最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，可以杀死所有生物，包括最耐热的

7、微生物休眠体在内，几乎不损害培养基的营养成分。 有些玻璃器具可以采用高温的干热灭菌。 为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管和玻璃烧瓶需要用适当的塞子塞住口，通常用棉塞住。 也可以使用各种金属、塑料、硅胶帽。 空气中的其他微生物不能通过。 平盘是用正反两面板固定的，这个器具是为了防止空气中的微生物污染而设计的。 22，2 .实验操作(以大肠菌的培养为例)，制备牛肉糊的胨培养基，1 .计算2 .称量3 .溶解4 .将灭菌：玉米瓶放入高压蒸汽灭菌锅中，压力100kPa、温度121、灭菌1530min。 5 .反平板：培养基冷却到50左右时，在酒精灯附近变成反平板。 2d后观察平板，没有杂菌污染

8、就不能接种。23、逆平板操作、24、精制大肠菌、平板划线法和稀释涂布平板法。 微生物接种的常用接种方法有：1 .平板划线的操作方法，平板划线的操作，25、26、二是，由于缝隙中残留的各个细胞不能形成规则的菌落，所以菌落沿着缝隙生长，形成条纹状的菌落。 27，28，2 .稀释涂布平板的操作方法，29，30，31，4 .菌种的保存，在固体斜面培养基上接种，菌落生长后，保存在4冰箱中。3 .微生物恒温培养.长期保存：甘油冷冻管藏法.临时保存：32，3 .结果分析和评价.不通过培养基制作的培养基在恒温槽中保温12天后，如果菌落不生长，说明培养基的制备成功，否则有必要重新制备。 接种操作是否满足无菌要求，说明培养基中生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，如果符合大肠杆菌菌落的特征，接种操作就满足要求，说明培养基中出现其他菌落时，在接种中还没有要求无菌操作，分析原因.是否及时进行了周密的观察，与记录培养12h和24h后