基因表达干扰技术Microsoft PowerPoint 演示文稿

1、1、基因表达干扰技术，2、基因表达干扰技术，2、核糖酶和脱氧核糖酶，3、小干扰RNA，4、微RNA，1、反义核酸技术，3，1、反义核酸技术，概念：反义核酸3360是基于碱基互补原理设计的、反义核酸技术：是一种基于碱的互补原理，用人工合成或生物体内合成的特定互补DNA或RNA片段来抑制或封闭基因表达的技术类型：反义DNA反义RNA源：人工合成的生物合成，5， (1)反义寡核苷酸(反义DNA)(ASON )技术反义DNA:用于以与人工合成的封闭基因的某些部分互补的正常或化学修饰的DNA片段，抑制或封闭该基因的表达。 6、1 .反义低聚核苷酸的作用机制(抑制mRNA的翻译) (2)抑制复制或转录(3

2、)抑制蛋白质的加工、修饰、功能表达，7 )，分解反义核酸目标核酸二聚体的空间阻碍，2 .反义低聚核苷酸的给药途径直接作用于培养细胞(直接进入细胞) (2)结合l -赖氨酸和脂质体进入细胞(通过载体进入细胞) (3)动物模型通过静脉、腹腔、皮下、肌肉、肿瘤内注射和雾吸入等途径，(10 )反义RNA技术，反义RNA是mRNA 11、1 .反义RNA的作用机制(1)抑制DNA复制：与引物RNA结合，抑制复制(2)目的mRNA的成熟和向细胞内运输和mRNA的互补结合的影响帽，捻接和尾随(3)抑制mRNA翻译和5端SD序列影响翻译的(4)mrna被核酸酶识别，容易分解；12 2.反义RNA的设计与ASO

3、N相比，反义RNA的设计比较简单；PCR反义载体重组反义基因细胞反义RNA，13，(3)反义1 .基因分析2 .作为探针进行原位杂交，可以分析基因表达3 .病毒病、肿瘤及遗传性疾病的治疗，14，2，核酶和脱氧核酶，(1)核酶是具有催化作用的RNA分子，基质RNA和15，1 .核糖酶的分类(1)大分子核糖酶： (2)小分子核糖酶：16，2 .核糖酶的结构(1)锤状核糖酶：二级结构有三个螺旋环结构区和一个催化剂中心，(17 )，(2)发夹状核糖酶：各结构区为螺旋环3 .核糖酶的设计和修饰设计：核糖酶的核心和结合臂的设计在基质RNA中选择最适合的剪切部位进行修饰：防止核酸酶分解，19，4 .核糖酶的

4、转移方法核糖酶进入细胞内才发挥功能方法：外源性转移，20， 5 .应用核糖酶病毒性疾病治疗乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒HIV肿瘤，(2)脱氧核糖酶具有催化作用的DNA (人工合成)，23，1 .脱氧核糖酶的结构种类和特征(1)10-23型脱氧核糖酶：24，(2)8-17 25 .脱氧核酶的催化特性(1)RNA切断活性(2)DNA连接酶活性(3)卟啉金属化酶和过氧化酶活性(4)DNA切断活性(5)N-糖基化酶活性(6)DNA激酶活性(7)DNA大帽活性，26， 3 .脱氧核酶的应用为治疗RNA病毒感染症提供了新的方法：在特定的小分子单链RNA和mRNA的互补区域发生碱基对，阻碍该mRNA的表达。该小

5、分子的RNA为小干扰RNA(siRNA )，28，(一)一般研究途径，29，(二) RNAi的作用机制1 .初期阶段2 .效果阶段3 .倍增阶段，30，31，(三) siRNA的导入1 .脂质体和穿孔2 .病毒为3 .细胞贯通肽(4) (RNAi的应用1 .基因功能的研究2 .基因切除3 .基因治疗4 .细胞信号转导通路分析5 .药物开发，33，4，RNA(miRNA )是一个短组，一般由2024个碱基构成，其本身没有开放阅读的框架，具有高度的保守性，时间序列34，miR-#(#表示数字) miRNAmir-#(#表示对应的编码基因，(miRNA命名，35 (二) ) miRNA的作用机制1 .初始阶段：细胞内源性基因单链一次转录产物2 .成熟阶段：单链一次转录产物70核苷酸前体miRNA细胞质21核苷酸的miRNA3.功能阶段： miRNA蛋白质核酶复合体， 抑制(Pri-miRNA )、(pre-mirna)mrna的翻译，调节基因表达，36， 37 (三) siRNA和microRNA的区别在于由22个左右的核苷酸组成的Dicer酶的产物，由于Argonate家族蛋白的存在与RISC形成复合物发生干扰，调节作用转录后，在翻