实验室常用仪器设备的使用和维护

1、实验室常用仪器设备的使用和维护,卫生部肠道病原微生物重点实验室江苏省疾病预防控制中心210009唐震2010-07-28,Telmail：,工欲善其事必先利其器,常用仪器设备,加样器,基因扩增实验室应备有4套连续可调加样器，分别用于试剂准备、样本处理、扩增和产物检测四个试验区。,加样器,加样器的类型P型移液器的型号和取液范围加样器的使用P型移液器的应用范围加样器的校准,加样器的类型,单道连续可调式移液器多通道连续可调式移液器单道连续移液器单道移液管配合使用的移液器,P型移液器的型号和取液范围,型号所用量程范围（L）GILSONeppendorfP20.12P100.

2、5100.510P20220220P1002010010100P2003020020200P100020010001001000,加样器的使用,加样器的使用,1、前进式,2、后退式,吸液的位置,把按钮压至第一停点垂直握持移液器，使吸嘴浸入液样中，浸入液体深度视型号而定：P2和P101mmP20和P1002-3mmP200和P10002-4mmP50003-6mmP10ML5-7mm,设定容量值,P型移液器的应用范围,P2，P10:超微量计量及移液，应用于DNA定序及酶分析等。P20，P100，P200和P1000:应用于一般水溶液、酸、碱的计量和移液。P5000和P10ML:大体积移液和计量。

3、,加样器的校准,校准方式计量局厂家自较时间视使用频率定（6个月-1年）,加样器-注意事项,根据所需取液量选择相应的移液器及吸头，基因扩增实验要求使用带滤芯的吸头，防止交叉污染。,吸取液体时应缓慢匀速吸取，避免液体溅到移液器头上；打出液体后拇指不应松开按钮，将吸液嘴压掉后再将拇指松开，避免液体回吸。在调整取液量的旋钮时，不要用力过猛，并应注意计数器显示的数值不要超过其可调范围。连续可调式移液器不可在无吸头时使用，吸头有液体时不可平放或倒置。,加样器-注意事项,注意事项,操作时要慢和稳，吸嘴浸入液体深度要合适，吸液过程尽量保持不变；改吸不同液体、样品或试剂前要换新吸嘴；发现吸嘴内有残液时必须更换；

4、新吸嘴使用前应先预测。为防止液体进入移液器套筒内，注意以下几点：压放按钮时保持平稳；移液器不得倒转；吸嘴中有液体时不可将移液器平放；P5000及P10ML移液器一定要加过滤芯。切勿用油脂等润滑活塞或密封圈。使用了酸或有腐蚀蒸气的溶液后，最好拆下套筒，用蒸馏水清洗活塞及密封圈。,注意事项,连续可调式移液器在取样加样过程中应注意移液嘴不能触及其他物品，以免被污染；移液嘴盒（架子）、废液瓶、所取试剂及加样的样品管应摆放合理，以方便操作过程、避免污染为原则。连续可调式移液器在使用完毕后应置于以液器架上，远离潮湿及腐蚀性物质。在取液之前，所取液体应在室温（15-25C）平衡；液体温度与室温有异时，将吸嘴

5、预洗多次再用；移液温度不得超过70。,加样器-维护,加样器应根据使用频率进行维护，但至少应每3个月进行一次，具体方法如下：1一般维护可用中性洗涤剂（如洗餐具用的洗涤灵）清洁，或者用60%的异丙醇，然后用蒸馏水反复洗涤，去除洗涤剂或异丙醇，晾干。清洁后活塞处可使用一定量的润滑剂。2如果有液体进入加样器内的严重污染，可以将加样器拆开后进行清洁，具体拆开步骤参照加样器说明书（不同的加样器的拆开方式有所不同）。3高压消毒，有的加样器的吸管部分可高压消毒（121及1巴压力下消毒20分钟），如Eppendor的Research单道可调加样器。但消毒时不可超温超时，也不能挤压放置，以免造成变型。4各区（试剂

6、准备、样本提取、扩增和产物检测）的加样器应有各自的标识，清洁和消毒时，应分别处理。,常用仪器设备,（一）高速（冷冻）离心机,电机转速最低转速最高转速转头消毒方式标准配件系统噪音,标本制备区,高速（冷冻）离心机-使用方法,离心机应放置在水平坚固的地板或平台上，并力求使机器处于水平位置以免离心时造成机器震动。打开电源开关，按要求装上所需的转头，将预先平衡好的样品放置于转头样品架上（离心筒须与样品同时平衡），关闭机盖。按功能选择键，设置各项要求：温度、速度、时间、加速度及减速度，带电脑控制的机器还需按储存键，以便记忆输入的各项信息。待离心机完全停止转动时打开机盖，取出离心样品，用柔软干净的布擦净转头

7、和机腔内壁，待离心机腔内温度与室温平衡后方可盖上机盖。,机体应始终处于水平位置，外接电源系统的电压要匹配，并要求有良好的接地线。开机前应检查转头按装是否牢固，机腔有无异物掉入。离心机运行时，离心机周围30cm范围内不能有人和危险物品。挥发性或腐蚀性液体离心时，应使用带盖的离心管，并确保液体不外漏以免腐蚀机腔或造成事故。,高速（冷冻）离心机-使用方法,易燃易爆以及易与其他物质发生反应的物质不能离心。在没有相应的防护措施时，不能离心有毒的、放射性的物质或病原微生物。离心机运行时不可人为地打开盖子。如果转头和盖子有可见的腐蚀或磨损的痕迹，则应立即停止使用。使用的玻璃或塑料离心管应能承受相应的离心力并

8、大小合适。非金属转头不可用紫外照射。,高速（冷冻）离心机-使用方法,高速（冷冻）离心机-维护和保养,转头应定期清洗和消毒。擦拭离心机腔时动作要轻，以免损坏机腔内温度感应器。使用消毒液处理时，温度不可超过25，时间不可超过规定时间。可以用高压消毒的转头，应在清洗后，121消毒20分钟，转头务必平放，并不受挤压，以免变形。每次操作完毕；应作好使用情况记录，并定期对机器各项性能进行检修。离心过程中若发现异常现象，应立即关闭电源，报请有关技术人员检修。,（二）全自动样本处理系统,全自动样本处理系统,全自动样本处理系统,全自动样本处理系统,清洁和维护（日常）1、每周都用不掉毛的布蘸上去离子水擦拭仪器的表

9、面（包括恒温箱周围区域和清洗区）。如果发生了试剂泼洒，用70%的乙醇清洗。在清洁仪器前要关闭电源，拔下电源插头。2、分析仪的可移动内部部件如试剂载盘，样本载盘等要用不掉毛的布并蘸上70%的乙醇来清洗。3、要定期检查仪器的周围，以确保良好的通风环境，书本，纸张或其它物品有没有干扰仪器的通风。4、如果样本或其它有生物危害的物质泼洒到仪器或任何系统载盘上，首先用10%（v/v）的漂白粉溶液（0.5%次氯酸钠）擦拭，然后用70%的乙醇彻底擦洗改区域或载盘。,全自动样本处理系统,清洁和维护（定期）加强与供应商的联系，定期做维护保养工作。,常用仪器设备,扩增区（基于PCR扩增的仪器）,普通PCR仪实时荧光

10、PCR仪Luminex分析系统,实时PCR仪的发展历史,1993年第一篇文章发表1996年罗氏的LightCycler注册1997年ABIPrism7700，第一个高通量的实时荧光PCR仪1999年Bio-RadiCycler2000年更多质优价廉的仪器进入市场。,PCR扩增仪的原理及发展状况（1）梯度水浴法,变性:如94C,退火:如55C,延伸:如72C,（2）空气驱动循环恒温装置,本系统力求降低部件的成本，用空气作为热传导媒介。装置包括机箱（外壳）、热源、冷空气源、控制器和辅助电器元件等部分。优点：不用金属的精密加工，成本降低。整个系统没有液体流动，不用致冷液，因而安全程度高。恒温精度可达

11、1。缺点：单纯靠外部空气制冷，受环境温度影响。,（3）变温金属块作恒温装置,加热方式有电热发热、半导体发热，制冷方式有半导体制冷和压缩机制冷等多种方式。国外产品的特点是产品质量和性能较稳定。机型：适用，建议8*12孔的模式。,PCR仪-检测原理（Taqman探针）,PCR扩增时，在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针。该探针为一直线型的寡核苷酸，两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，PCR仪检测不到荧光信号；PCR扩增时（在延伸阶段），Taq酶的53外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接

12、收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。,PCR仪-检测原理（Taqman探针）,其它荧光探针分子信标水解探针。,PCR仪-检测原理,PCR仪-使用,PCR仪应放在临床基因扩增实验室的第三区。仪器应放置水平台上，电源电压需与仪器要求电压相一致，并连接可靠的地线。仪器远离水源，明火及腐蚀性物质。工作室温要求：15-25接稳压电源。尤其是半导体升温降温的设备。每次实验时，最好能将扩增仪内的孔位全部放置样品管，若样品管少时可用空管代替，以保证实验的一致性和重复性。,PCR仪-清洁与维护,实验结束后应及时擦干孔内的水分，盖上机盖。应定期校

13、准（增强与供应商之间的联系）扩增温度光路定期清洁热盖和反应孔95%乙醇,常见的扩增（检测）系统介绍,ABIprism7000光源：卤素灯检测：四色荧光（CCD）可以检测：SYBR-Green，FAM,HEX,TET,TANRAVIC样本量：96,常见的扩增（检测）系统介绍,ROTORGene3000光源：发光二极管（LED）检测：光电倍增管-四色荧光（PMT）可以检测：SYBR-Green，FAM,HEX,TET,TANRAVIC样本量：36/72,常见的扩增（检测）系统介绍,MJOption2光源：发光二极管（LED）检测：2（523-543nm，540-570nm，PMT）可以检测：SYB

14、R-Green，FAM,HEX,TET,TANRAVIC样本量：96,常见的扩增（检测）系统介绍,ROCHELightCycler光源：发光二极管（LED）检测：6（荧光计）可以检测：SYBR-Green，FAM,HEX,VIC，LightCycler红色染料样本量：32,PCR仪-使用注意事项,影响测定结果的因素光路维护加样的准确性和反应体系的均一性反应管中是否有气泡反应管不符合荧光检测要求或疏水性差反应管或反应槽被荧光物质污染需强调的是：加强与供应商之间的联系,Luminex系统,Luminex是多功能的液相芯片分析平台，适用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析等研究。有色微

15、球激光技术应用流体学高速数字信号处理器,优点1、多元分析，可节约试剂、时间和精力；2、操作简单，减少实验误差，具有更好的稳定性、更好的重复性与更小的批间差；3、对样本量的要求少，非常适合分析稀有样本；4、开放性的实验平台，同一个仪器可以用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析等多种研究工作，增加实验的灵活性；5、液相反应体系，更快地达到平衡点，缩短实验时间。,Luminex系统,常用仪器设备,常规电泳系统,电泳仪将电泳槽两个电极与电泳仪的直流输出端联接，注意极性不要接反；接通电源，缓缓旋转电压调节钮直到达到的所需电压为止，设定终止时间，此时电泳即开始进行。完毕后，应将各旋钮、开关旋

16、至零位或关闭状态，并拨出电泳插头；,缓冲系统：在没有离子存在时，电导率最小，DNA不迁移，或迁移极慢，在高离子强度的缓冲液中，电导很高并产热，可能导致DNA变性，因此应注意缓冲液的使用是否正确。长时间高压电泳时，常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶解的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。倒入板中的凝胶应避免出现气泡，影响电泳结果。样品加入量：一般情况下，0.5cm宽的梳子可加0.5ug的DNA量，加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中

17、片段的数量和大小而定，过多的量会造成加样孔超载，从而导致拖尾和弥散，对于较大的DNA此现象更明显。,琼脂糖凝胶电泳-注意事项,电泳系统的变化会影响DNA的迁移，加入DNA标准参照物进行判定是必要的。DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。采用不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的DNA分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。小片段的DNA电泳应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳以提高分辨。电泳指示剂：核酸电泳常用的指示剂有两种，溴酚蓝呈蓝紫色；二甲苯晴呈蓝色，它携带的电荷量比溴酚蓝少，

18、在凝胶中的的迁移率比溴酚蓝慢。,琼脂糖凝胶电泳-注意事项,常规电泳系统,如果输出端接多个电泳槽，则仪器显示的电流数值为各槽电流之和，此时应选择稳压输出，以减小各槽的相互影响。注意保持仪器的清洁，不要遮挡仪器后方进风通道。严禁将电泳槽放在仪器顶部，避免缓冲液洒进仪器内部。本仪器输出电压较高，使用中应避免接触输出回路及电泳槽内部，以免发生危险。长期不用仪器，应放置在干燥通风的清洁环境中保存。,常规电泳系统,特别注意：溴化乙锭（EB）：为致癌剂，用含EB的溶液进行浸泡时应戴手套，浸泡后转移至拍照过程中应放在容器内或者保鲜膜上，严禁在转移过程中出现滴水现象，尽量减少地面与台面污染。建议使用荧光染料。琼脂糖胶严禁倒入水池，以免产生堵塞。,1.开启总电源。2.开启电脑，WINDOWS处于正常工作状态。3.打开仪器主机电源开关。4.双击桌面上的软件图标，进入软件。5.拍摄：a.打开拍摄界面b把胶置于灯台上c打开相应灯源的电源开关（请勿肉眼无防护直接观察）d经电脑控制进行拍摄、保存图像e拍摄完毕请立即关闭灯源电源6.工作完毕，关闭软件窗口。7.关闭主机电源。8.关闭电脑。（注意