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文档简介
1、精选,介绍药敏试验方法,精选,耐药性菌的问题日益严重。 “目前,药物失去作用的速度几乎等于科学家发现新药物的速度”WHO的报告显示,精选、精选、一、抗菌药物敏感性试验(Aho )在抗微生物治疗面临的困境、耐药性问题上,没有出现细菌总是获得新的耐药性机制的传统耐药性措施的效果预测抗菌治疗效果发现或提示指导抗菌药临床应用的细菌耐药性机制的存在,指导合理用药,监视细菌的耐药性不发生和恶化,分析耐药性菌的变迁,掌握耐药性菌感染的流行病学,控制耐药性菌感染的发生和流行精选,(1)抗菌药的选择在我国主要是按照临床实验室标准化委员会(clinicalandlaboratorystantdardsinstit
2、ute )制定的抗菌药选择原则a组:对特定菌群进行常规检测报告的药物b组:常规检测, 可以选择性报告的药物c组:替代性或补充性药物u组:仅泌尿感染的抗菌药、精选、葡萄球菌属抗菌药敏感性试验推荐组、精选、肠杆菌科抗菌药敏感性试验推荐组、精选、假单胞菌属抗菌药敏感性推荐组、精选不动杆菌属抗菌药敏感性试验推荐组、精选, 肠球菌属抗菌药敏试验推荐组、精选、肺炎链球菌抗菌药敏试验推荐组、精选、药敏试验要点也按照每年最新公布的CLSI标准进行,分为敏感(s )、耐药性(r )和中介(I )。 精选、敏感:分离菌株能在检测药中使用推荐剂量时,受感染部位通常可达到的抗菌药浓度的抑制;分离菌株不受检测药通常剂量
3、可达到的药物浓度的抑制; 分离株可能存在特定抗性机制的治疗研究表明,对药物分离株的临床疗效不可靠,耐药性治疗无效的敏感治疗有效,精选,二,抗菌药的种类和作用机制,精选,三,药敏试验方法学,纸片扩散法(K-B法)稀释法(MIC法) 肉汤稀释法定数量稀释法琼脂稀释法E-test法,1 .手工试验,精选,2 .自动器械药敏系统,精选,纸片扩散法(K-B法)原理:细菌抑制环的大小反映了对测定药的敏感度,该药与检验菌MIC呈负相关。精选,、 选择孵化1624小时的纯菌落,放入生理盐水管中振荡混合后,将浓度修正为0.5麦氏的标准,精选,用无菌棉擦子涂上菌液,在试管内壁旋转挤出多菌液,在MH琼脂表面均匀涂布
4、接种3次,每次使平板旋转60度, 最后沿平板内缘涂一周的平板在室温下干燥35min,用无菌镊子或商品化的纸片分配器使含药纸片紧贴琼脂表面,精选,35孵化1624小时,根据测定抗菌环直径的抗菌环直径,以CLSI标准进行判断,报告敏感、中介、耐药性。 精选,2020/7/4,2020/7/4,23,CLSI对K-B法的标准化规定纸的药物含量,细菌接种浓度,培养基,皿厚,孵化时间,环境,判定标准,质量控制方法等常规测试,报告的抗生素。 不同药物判定标准不同的菌的判定标准不同。精选,扩散法药物敏感性影响因素,培养基pH值7.2-7.4营养程度(肠球菌能力生长)厚度抗生素拮抗剂含量(用29212监测)钙
5、镁离子含量,锌离子含量(用27853氨基糖苷类和酰亚胺配能结果监测)菌悬浊液浓度高的抗菌环缩小(用29212监测) 浓度低则扩大(假敏感),细菌纯度气体环境的一般细菌释放CO2时由于碳酸的影响,药物的活性受到影响,形成假敏感或假抗性的焦养菌,假敏感培养时间的黏液性绿需要48小时的测定方法,精选,2020/7/4, 稀释法用含有一定浓度的抗菌药和被检菌的培养基以一系列倍数稀释(通常是两倍稀释),培养1624h后,观察细菌的生长现象,测定药物对被检菌的最低抗菌浓度(MIC )。 精选、稀释法(MIC法)、MIC法:常数法和微量法定数法:肉汁稀释法,琼脂稀释法微量法:微量肉汁稀释法简化了二浓度变点法
6、ATB药感受性,通常浓度分布MIC法BD,德灵药感受性计算MIC法VITEK32,VITEK2药感受性,精选,肉汁稀释法,不生长=抗生素精选、常数稀释法、药敏试验参考方法:将标准接种物放入含有对倍稀释抗生素的MH肉汤管中,一夜培养. MIC为含有能抑制细菌生长的最低抗生素浓度管显示的浓度值(琼脂稀释法将对倍稀释的抗生素溶解,加入50 mha,倾斜平盘,接种物为一定大小的斑点说明标准(SorR )设定为体内能达到的抗生素浓度水平,精选、微量肉汁稀释法、精选、精选、精选、接种后必须充分混合,但产生气泡而得不到静置培养温度的35种气体环境:所有细菌(包括焦养菌) 放置于大气环境的厌氧菌放置于厌氧环境
7、的微好氧菌放置于微好氧环境的淋菌琼脂稀释法的CO2培养时间: 18小时,精选,2020/7/4,药物敏感性结果的报告与MIC(g/ml )或CLSI标准对照,可以用s、r和I报告。 关于稀释法的批量试验,有时需要MIC50、MIC90的报告。 精选,稀释法药敏影响因素,培养基7.2-7.4营养程度抗生素拮抗剂含量钙镁离子含量(钙10-25; 镁10-12.5g/ml )菌悬浊液(5104CFU/ml )接种效果浓度高,MIC上升浓度低,MIC下降,细菌纯度气体环境的所有好氧细菌都排放到普通的大气环境中。 释放CO2后,由于碳酸的影响,药物活性受到影响,形成假药敏感性或假药耐性培养时间真菌需要4
8、8小时的奴隶菌,精选2020/7/4,E-test法结合稀释法和扩散法的原理,直接测定药物对受试菌的MIC。 精选,MIC值为试验片的光面,Etest试验片,毛面贴在MHA上,按照精选,Etest操作顺序,扩散法的标准操作涂布接种,粘贴试验片培养15-18小时,读取抗菌浓度按标准说明,精选,2020/7/4, 阅读细菌生长区,e试验片,细菌生长抑制区,25612880.16,MIC精选,肺炎链球菌青霉素MIC=3g/ml,结果读取,精选,精选,BDPhoenixTM-100凤凰全自动细菌鉴定/药敏检测系统, 最大样品容量:对100个样品同时进行了鉴定和药敏检测,精选、精选、精选、鉴定部: 51
9、孔鉴定实验改良古典实验显色荧光检测不需要附加实验和试剂,药敏感性部: 85孔药敏实验比浊氧化还原(专利) 实测倍比稀释MIC值药剂种类和浓度梯度最多的耐药性机制检测同步进行,密闭设计,无安全泄漏,先进的鉴定/药敏复合板设计,精选PhoenixTM100检定板革兰氏阳性板,革兰氏阴性板生化反应组合,革兰氏阳性菌检定板,革兰氏阴性菌检定板, 检定部分: 51孔检定实验,改良经典实验显色荧光检定,无需附加实验和试剂,精选、精选、检定实验方法,检定实验方法是在研究了100种反应基质的基础上,选择了45种反应基质。检查板每20分钟检查一次,精选一次。 Phoenix的工作流程是从夜晚纯培养的新鲜平板中选
10、择菌落,精选。 Phoenix的工作流程是用ID肉汤做成标准浊度(0.50.6麦氏单位)的菌悬浊液,精选,向AST肉汤滴入AST指示剂。 Phoenix的工作流程精选,从ID肉汤管正确吸上25L菌悬浊液,并加入AST肉汤。 Phoenix的工作流程精选,把肉汤注入检查板,盖上盖。 检查板准备好了,可以登机检查了。Phoenix工作流、巧妙的重力采样技术、精选、扫描板、资料输入、Phoenix工作流、精选、检查板设备(自由位置)、Phoenix工作流、精选、克染色,板的种类都很齐全:银试剂常温保存、成套试剂、精选、强大的软件支持: BDXpert微生物专家系统,为了解释和监视检查结果,可以分别导
11、入LIS系统、BDEpicenter数据管理系统和打印机,可以进行各种各样的统计学分析精选鉴定能力革兰氏阳性菌鉴定180种革兰氏阳性球菌革兰氏阳性菌200种革兰氏阴性发酵菌革兰氏阴性非发酵菌时, 没有必要附加实验的95-96%的正确性,规定时间minimum 1:26 HR maximum 12336325 HR average :24 hrmedian 2336026 HR 95 thc 33636 HR,优异的鉴定性能,精选反应孔内:微生物成长成小粒或团块的氧化还原作用(BD专利技术):用药敏实验指示剂的颜色变化测定微生物的新陈代谢浊度和氧化还原的变化用红、蓝、绿光每20分钟测定一次。 精
12、选药物敏感性的种类和时间葡萄球菌属链球菌属肠杆菌属其他革兰阴性杆菌GN-90%in5HrsGP-80%in6Hrs药物敏感性的特征是对倍稀释药物浓度真正的MIC检测延迟耐性检测的急救报告迅速完成了耐药性检测附加板条18种耐药性机构产超宽谱内酰胺检测(ESBL )耐甲氧西林葡萄球菌检测(MRS )链霉素抗性菌株检测(HLGR )耐庆霉素菌株检测(HLGR )耐万古霉素肠球菌检测将反应结果与上次的判定结果进行比较。 如果两次结果没有差异,反应就结束。 内置的算法:颜色比率的变化随时间变化的数据库: 2、3、4、6、12小时,根据每个测试周期的读影结果生成“百分比图”,得到充分的信息后得出判定结果。
13、 显示标准菌量、可靠性90、结果。精选、BDXpert微生物专家系统、鉴定实验、BDXpert专家系统-NCCLS-DIN-SFM-BDRules,报告-ID-MI-RulesetSIR-BDXpertSIR-特殊信息、药感受性实验、精选、BDXpert微生物专家系统的目的、药感受性结果的解释和修正确保药感受性实验的结果确实,指导在临床上正确进行抗感染治疗的专家的规则已确定标准(NCCLS、DIN、SFM )的药剂开发部门的文献资料被广泛接受的文献资料和经验不断更新和精选,BDXpert微生物专家系统规则的应用,SIR结果的解释由专家系统规则的设定NCCLS, 来源于SFM的Custom药物分
14、级规则天然耐性和天然敏感规则耐性标记规则肠杆菌科: ESBL葡萄球菌: MRS,beta-内酰胺酶(GPBL )肠球菌: VRE,HLGR,HLGR,精选,例如SIR解释肠杆菌科细菌ampicillin breakpoints 3 r 32参考表2 a (ncclsm 100-S12, 2002 ),Phoenix表示被检菌为肠杆菌科细菌,药物为ampicillilin,MIC=2时标为“s”,BDXpert微生物专家系统规则的应用,严选,例如天然耐药性, 规则规定规则:在C.freundii体内ampicillin和amoxicillin的天然耐药性Ref:Brown.et、al.1989J.Antimicrob.Chemother .Phoenix, 如果被检菌为C.freundii,amis“s”or“I”或amx“s”or“I”的情况下,将AMorAMX结果变更为“r”,报告被检菌对抗生素的天然耐性的检测结果和检查对象菌是否纯粹,BDXpert微生物专家的Shi 结果为检定结果(用户可修改) MIC值为标准的解释BDXpert专家系统SIR结果的最终结果(用户可修改),鉴定和药物敏感性结果的显示,精选,中文报告系统,精选,TCP/IP以太网, EpiCenter工作站PhoenixID/AST、bact ec9000
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