人类染色体标本的制备及G显带核型分析.ppt

1、a，1。安徽医科大学基础医学院生物系人类染色体标本的制备及G显带核型分析，a，2。目标和要求。1.掌握染色体标本的制备方法和G显带技术。2.熟悉人外周血淋巴细胞的培养方法和G显带染色体的核型分析技术。实验原理，染色体作为细胞遗传信息的载体，出现在有丝分裂中。用于制备人类染色体标本的材料可以是骨髓细胞、外周血淋巴细胞、绒毛细胞、羊水细胞等。最简单的方法之一是取少量外周静脉血进行短期培养，然后用秋水仙碱处理(秋水仙碱可以阻断有丝分裂细胞中微管的聚集，使纺锤体不能形成，从而使有丝分裂停滞在中期，此时染色体具有最典型的形态)，然后用低渗透性和固定性处理它以获得更多的中期相用于核型分析。4、染色体显带是

2、经过特殊处理后，每条染色体上沿纵轴有一定数量的不同着色程度和不同宽度的水平条纹。染色体带是染色体固有的稳定特征。染色体G显带是众多显带技术之一。染色体标本用胰蛋白酶处理，然后用姬姆萨染料溶液染色。g显带技术因其方法简单、重复性好、显带清晰、可长期保存而被广泛应用。核型是指体细胞中期的所有染色体，这些染色体按其大小和形态特征排列。每个体细胞包含两组相同的染色体，用2n表示。核型分析是细胞遗传学中一种重要的研究方法，在染色体疾病、白血病和肿瘤等临床疾病的诊断和研究中具有重要意义。a，5，人类体细胞的正常核型，a组，b组，c组，d组，e组，f组，亚着丝粒染色体，45，亚着丝粒染色体，无伴侣，612，

3、x，亚着丝粒染色体，1315，近着丝粒染色体，伴侣，亚着丝粒染色体近着丝粒染色体带卫星，Y染色体稍大，长臂平行延伸，无卫星，基因组和核型，基因组：生物体的单倍体染色体组成称为生物体基因组，它代表所有储存的遗传信息，a，6，显带染色体：321，1234，和特殊染色方法被用来使染色体显示沿其长轴交替明暗或不同染色深度的条纹。正常男性：46，XY，正常女性：46，XX，正常人细胞染色体带型，a，7，实验用品，1仪器：采血仪，洁净工作台，培养瓶，恒温培养箱，恒温水浴罐，10毫升刻度离心机，低速离心机，量筒，载玻片，托盘天平，光学显微镜，染缸，电材料：人外周静脉血。试剂3: RPMI-1640培养基、小

4、牛血清、肝素、植物血凝素(PHA)、秋水仙碱(20g/ml)、0.075mol/L氯化钾低渗溶液、0.85%生理盐水、固定液(目前使用的甲醇3360冰醋酸=:1)、姬姆沙原液，以及，a，8，实验步骤，(1)制备人外周血染色体标本，收集1ml人外周静脉血，将其迅速与适量肝素混合进行抗凝。2.在干净的工作台上向RPMI-1640培养基中加入抗凝剂，每瓶加入0.30.5毫升全血。轻轻搅拌均匀。3.37让培养箱静置约72小时(24小时后水平摇动烧瓶一次，以悬浮和混合血细胞)。4.培养6872小时(即培养结束前24小时)，向每个瓶中加入秋水仙碱(20g/ml)，直至最终浓度为0.10.2g/ml，轻轻摇

5、动烧瓶并充分混合，继续培养24小时。5。停止培养，吹气并均匀混合培养物，将其转移到10毫升玻璃离心管中，平衡，并以1800转/分钟的速度离心6分钟。a，9，6。低渗上清液。加入8毫升在37预热的0.075毫升/升氯化钾，轻轻吹气，与秸秆混合，在37低渗处理20分钟。7.预固定，加入1毫升新制备的固定溶液(甲醇：冰醋酸=:1)，轻轻混合，以1800rpm离心6分钟。8.固定：弃去上清液，加入8毫升上述新鲜固定液，轻轻混合，室温静置固定20分钟。9.丢弃上清液并再次固定。10.弃去上清液，根据沉淀量加入适量的新鲜固定液，轻轻混合制成磨砂悬浮液。11.压片：取12滴上述混悬液，滴在干净的沾有冰水的载

6、玻片上或干燥，吹走，用火吹干。12.37放置在培养箱中34天或在70烘烤2小时进行老化处理，以便为条带分析做准备。a，10，实验方法和步骤，1。预处理：实验前3-4小时，取健康小鼠，每只腹腔注射001秋水仙碱03-04毫升。小心不要损伤内脏。2.取股骨：用一只手的拇指和食指握住老鼠的头，用另一只手拉它的尾巴，并向后拉它的颈椎。被杀死后，立即用剪刀剪掉后腿的毛，取出老鼠的股骨，去掉上面的肌肉，然后清洗。人类1号染色体g显带。胰蛋白酶的制备：在含有45毫升0.85%生理盐水的染缸中加入3毫升0.25%的胰蛋白酶溶液，调节酸碱度至6.87.2，并将其置于37水浴中预热。2.胰蛋白酶消化处理：将老化后

7、的样品放入胰蛋白酶溶液中23分钟，不断摇动载玻片，确保效果均匀充分。3.冲洗：用0.85%的生理盐水快速冲洗，以停止胰蛋白酶的作用。4.染色：用吉姆萨工作液染色1015分钟。5.冲洗并干燥：用缓慢流动的自来水冲洗载玻片，然后用空气或吹风机吹干。6.显微镜检查：在光学显微镜下观察和分析核型。核型分析，a，11，(3) G显带1。选择染色体分布均匀、长度适中的G显带核型照片，先进行计数，然后剪去每条染色体。2.配对：同源染色体具有相同的形状和带型；根据这一原则，46条染色体根据它们的大小、形状、着丝粒位置、卫星存在和G显带模式分成23对。3.染色体排列：按大小顺序排列23对染色体，末端有一对性染色

8、体，将排列好的23对染色体分组附在实验报告纸上。这样，通过剪切和粘贴匹配的正常人染色体图是正常人染色体组型图，可以写成46，XX或46，XY。a，12，正常男性染色体G显带核型，a，13，人类染色体G显带特征公式：一个光头，两条蛇，三只蝴蝶，四个鞭炮，五个黑腰6号是一张小白脸，七个上，八个下，九个苗条，十个长臂，近十一个低，十二个高，十三个四十五，中间，十六个q2疤痕，十七个带脚镣的长臂，十八个小肚，十九个十一个腰和二十个头重，其中，低渗时间非常重要。如果处理时间过长，细胞膜会过早破裂，导致染色体丢失。如果处理时间不够，染色体离散度会很差，不利于计数分析。2.G显带过程中的关键因素包括胰蛋白酶的作用时间、温度和pH值。胰蛋白酶溶液应在37下充分预热，溶液的酸碱度应保持在6.87.2，以