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文档简介
1、实验九 姐妹染色单体差别染色,实验用品 1、器材:水浴锅、紫外灯、温度计、擦镜纸、 显微镜、滴管 2、试剂: 2SSC缓冲液、Giemsa染液、 PH6.8 PBS、 3、材料:人外周血淋巴细胞染色体标本片,1、姐妹染色单体差别染色 A、将标本片放入培养皿中,加2SSC数滴于玻片上,盖一张擦镜纸,以湿润擦镜纸为宜,并在培养皿中加入2SSC使之浸在玻片底面。 B、把培养皿置于预温75水浴锅平板上,距30W紫外灯管5cm,照射30分钟,其间滴加数次2SSC,勿使擦镜纸干燥。 C、用Giemsa染液染色10分钟,自来水冲洗、晾干即为SCE标本。,实验步骤,2、SCE观察计数 镜下(油镜)观察中期分裂
2、相时,注意区分各细胞周期分裂相的染色特点:染色体的两个单体均为深染的细胞记为第一周期的细胞;染色体的两个单体染色一深一浅的细胞为第二周期细胞;部分染色体的两个单体染色都为浅色的细胞为第三周期的细胞。,第二周期细胞,选择染色体分散良好、长度适中、轮廓清晰、数目完整、分化良好的的第二周期的分裂相进行计数。人体姐妹染色单体交换(SCE)的计数方法: 凡是在染色单体端部出现互换,记为1次交换; 在染色单体中间出现互换,记为2次交换; 如果在着丝粒处发生交换,需判明是否为扭转,不是扭转的为着丝粒部位交换,记为1次交换。每一份标本至少需要计数2050个细胞的染色体,计算SCE平均交换频率。 SCE平均交换频率(次/细胞)= 交换总次数 / 细胞数,作业,完成此次实验报告(包含实验原理、实验药品、实验步骤),染色体识别要求: 1、 B组一对 2、 C组的8号、9号、10号任选取1对
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