中药制剂的鉴别.ppt

1、第二章 中药制剂的鉴别,药物分析教研室,第二章 中药制剂的鉴别,1、概念： 中药制剂的鉴别 是利用一定的方法来确定中药制剂中原料药的组成，从而判断该制剂的真伪。 中药制剂鉴别主要内容 包括性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别等方面，有时在性状鉴别中还应作相应物理常数的测定。 本章重点论述显微鉴别和理化鉴别。,第一节 性状鉴别,中药制剂的性状是指除去包装后的性状。 中药制剂性状鉴别包括大小、色泽、表面特征、质地、气味等方面。,性状鉴别内容及描述方法: 一、性状鉴别的内容： 颜色：从单一色到组合色不等，如红色、深褐色，黄棕色等。 形态：如液体可分黏稠液体、液体、澄清液体、澄明液体等。 形状：如栓剂可分为球

2、形、鱼雷形、圆锥形、卵形、鸭嘴形等。 气：可分为香、芳香、清香、腥、臭、特异、气微、芳香浓郁等。 味：可分为甜、酸、苦、涩、辛、凉、咸、辣、麻等。 其他：光泽感、滑腻感等。,第一节 性状鉴别,第一节 性状鉴别,二、各种剂型的性状描述 在中药制剂不同剂型，其性状描述不一定相同。但在描述制剂性状特征时，应以中医药理论为指导。 例如： 水丸 六味地黄丸：本品为灰棕色至黄棕色的水丸；气香，味微甜、苦。 牛黄解毒片：本品为素片或包衣片，素片或除去包衣后的片芯显棕黄色；有冰片香气，味微苦、辛。 糖浆剂 急支糖浆：本品为棕红色的粘稠液体；气香，味甜、微苦、凉。 难点提示：中药制剂性状鉴别的描述应注意以传统中

3、医药术语来描述。,三、物理常数测定 一些中药制剂，还测定一些物理常数（如折光率、旋光度、比旋度、凝点、熔点、相对密度等）。测定这些物理常数可以作为定性鉴别的一种手段。,第一节 性状鉴别,第二节 显微鉴别,中药制剂的显微鉴别:利用显微镜来观察中药制剂中原药材的组织碎片、细胞或内含物等特征，从而鉴别制剂的处方组成。 凡以药材粉碎成细粉后直接制成制剂或添加有部分药材粉末的制剂，由于其在制作过程中原药材的显微特征仍保留到制剂中去，因此均可用显微定性鉴别法进行鉴别。,第二节 显微鉴别,特点及制片方法： 特点： 中药制剂一般多由二味以上中药材制备而成，制剂中各原药材和辅料的显微特征会产生相互影响或干扰。

4、由于制备工艺不同，有些药材本身原有的组织结构特征已不存在。 在选择制剂的显微鉴别指标时，要对处方中各药味逐一分析比较，考虑选用能相互区别，互不干扰，能表明该药味存在的显微特征作为鉴别依据。 如：“蛇胆川贝散”中，川贝母仅用淀粉粒作为指标。“牛黄解毒片”中大黄用草酸钙簇晶作为鉴别特征。 黄芩、甘草、桔梗系经过水煎、过滤、浓缩至稠膏投料，因为它们的显微特征已不存在，故药典没有规定它们的显微特征作为该制剂的鉴别特征。,制片方法： 中药制剂与中药材粉末相比较在显微鉴别时，制片的方法也不尽相同。为了便于显微观察，制剂必须按不同剂型经过适当预处理，然后按药材粉末的方法装片进行观察。 散剂、胶囊剂：取粉末少

5、量，选用适当的试液处理后直接进行显微观察。 片剂：切开，刮取少量样品，观察；粉末及粗则先研细；糖衣片除去糖衣再研细。 水丸、颗粒剂：于乳钵内研成粉末后观察。 蜜丸：可取1丸从正中切开后，刮取少量样品进行观察,第二节 显微鉴别,但由于蜂蜜粘结药材粉末的细胞和组织，难于观察，故一般可采用下面几种方法使粘结组织解离后再进行观察： 氢氧化钾法：取蜜丸切开后，取适量于试管中，加5氢氧化钾溶液适量，加热至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去碱液，加水洗涤后，取出少量置载玻片上，用解剖针撕开，再加适当的试液处理后观察。 硝铬酸法：取适量样品于试管中，加硝铬酸试液适量，放置，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗

6、涤后，照1法装置。 氯酸钾法：取适量样品于试管中，加硝酸溶液（12）及氯酸钾少量，缓缓加热，待产生的气泡渐少时，再及时加氯酸钾少量，以维持气泡稳定地发生，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照1法操作装置。 水溶法：把蜜丸切碎后，加水搅拌、洗涤后，放置在离心管中离心分离沉淀，经过多次反复处理把蜂蜜除尽后再装片观察。,第二节 显微鉴别,第二节 显微鉴别,难点提示： 在本法鉴别中，只有药材原有组织结构特征能保留到制剂中，才有意义。故一般全部由溶剂提取的制剂，不用此法进行鉴别。 不同剂型其制片方法不同。 应选择在该制剂中没有干扰又能表明该味药存在的显微特征作为鉴别依据。,第三节 理化鉴别

7、,概念： 中药制剂的理化鉴别： 利用物理的、化学的或物理化学的方法对制剂中所含的化学成分进行定性鉴别，从而判断制剂的真伪。 中药制剂的理化定性鉴别方法： 有一般化学反应法、升华法、光谱法和色谱法等。其中以薄层色谱法最常用。,一、化学反应法： 样品提取： 1、以50%-70%乙醇回流提取：提取出多数化学成分； 2、以酸性乙醇回流提取：检验酚类、有机酸、生物碱等； 3、以水提取：室温浸泡：检验氨基酸、蛋白质。 60热水提取：检验单糖、多糖、皂苷、鞣质及其 化苷类。 4、以乙醚提取：滤液检验酯、内酯、苷元； 药渣挥去乙醚，甲醇回流提取：检验各种苷类。 5、以升化法提取：升华的成分，如游离蒽醌苷元等。

8、 6、以水蒸气蒸馏法提取：挥了性成分。,第三节 理化鉴别,为了提高一般化学反应法用于中药制剂鉴别的可靠性，改善其专属性，应该注意以下几点： 应慎重使用专属性不好的化学反应，如泡沫生成反应、三氯化铁显色反应等，因为中药材中蛋白质、含酚羟基等类似成分的存在较为普遍。 在分析前对样品进行分离、精制，除去干扰鉴别反应的物质，借以改善鉴别方法的专属性。具体的分离精制方法要与被鉴别成分的性质、干扰成分的性质和理化反应对反应条件的要求相适应等。 采用阴性对照和阳性对照的方式，对拟定的鉴别方法进行反复验证，防止出现假阳性。,第三节 理化鉴别,二、升华法 利用升华法来进行鉴别中药制剂中某些具有升华性质的化学成分

9、。 这些成分，在一定温度下能升华与其他成分分离，取升华物 显微镜下观察有一定形状， 在可见光下观察有一定颜色， 在紫外光下观察显出不同颜色荧光， 或者加一定试剂处理后显出不同颜色或荧光。,第三节 理化鉴别,操作方法：取金属片，安放在圆孔（直径约2cm）的石棉板上，在金属片上放一小金属圈（内径约1.5cm，高约0.8cm），对准石棉板上的圆孔，圈内放入预先研细成粉末的中药制剂一薄层，圈上放一载玻片。在石棉板下圆孔处用酒精灯小心慢慢加热，火焰距离石棉板约4cm，加热至粉开开始变焦，即去火冷却，可见有升华物附着于载玻片上，将载玻片取下反转，在显微镜下观察其结晶形状或者加适当试剂观察其颜色反应。 除此

10、外，尚可用其他装置进行鉴别。,第三节 理化鉴别,三、光谱法 利用光谱法对中药制剂进行定性鉴别，主要有荧光鉴别法，可见紫外分光光度法、红外分光光度法，而其它的鉴别法较少应用。 （一）荧光法 （二）可见紫外分光光度法 （三）红外光光度法定性鉴别,第三节 理化鉴别,荧光法 1、适用范围：组成中药制剂的中药材中含有能产生荧光的化学成分。 2、操作方法：取制剂的提取液点在滤纸上或试纸上，置紫外光灯下（365nm或254nm）观察，或加一定试剂后再进行观察。,第三节 理化鉴别,第三节 理化鉴别,可见紫外分光光度法 中药材中有些化学成分在可见紫外光区有选择性吸收，显示特征吸收光谱曲线，不同的药材所含的成分不

11、同，在一定条件下利用这些吸收光谱的特征，以鉴别制剂中的某些成分。,常见的鉴别方法有： 1、规定吸收波长法：（最常用）样品经适当处理后，测定其吸收光谱，在一定波长处有最大吸收； 2、对照品对比法：取对照品或对照药材及供试品经处理后，制成对照品溶及供试品溶液，分别测定吸收光谱，比较二者吸收光谱的一致性； 3、规定吸收波长和吸收度法：取样品经处理后，测定吸收光谱，在吸收光谱的规定波长下应有若干个吸收峰，并有相应的吸收度值； 4、规定吸收波长和吸收度比值法：样品在一定波长下应产生相应的吸收峰，并且吸收度与对照峰的吸收度比值应在一定的范围之内，此法的条件是要有对照品或参照物； 5、多溶剂光谱法：选用不同

12、极性的溶剂按一定次序提取样品，将样品为分若干个溶剂组，然后测定各组的吸收光谱，根据所得到的特征吸收光谱或导数光谱进行鉴别。,可见紫外分光光度法,（三）红外光光度法定性鉴别 1、在4000-400cm-1范围间测定中药制剂样品红外吸收光谱。 2、制样方法：取样品直接制样，或经溶剂提取后制样。 3、该法具有取样少、快速、简便、准确等特点，但目前用于中药制剂的鉴别报道不多。,四、色谱法 纸色谱法 薄层色谱法 薄层扫描法 气相色谱法 高效液相色谱法,第三节 理化鉴别,（一）纸色谱法,纸色谱法系以纸为载体，以纸上所含水或其他物质为固定相，用展开剂进行展开的分配色谱。 用比移值（Rf）表示各组成成分的位置

13、，但由于影响比移值的因素较多，因而一般采用在相同实验条件下与对照物质对比以确定其异同。,（二）薄层色谱法,薄层色谱法，系将适宜的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法在同板上所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用以进行中药制剂品的鉴别方法。 在中药制剂的鉴别，薄层色谱法为最常用的方法。 为了提高试验的重要性及分离度，因此薄层色谱有必要进行规范化的操作。,样品供试液的制备 薄层色谱法使用的材料 操作方法 薄层色谱图记录与保存 影响薄层色谱分析的主要因素 对照品选择,（二）薄层色谱法,1样品供试液的制备 1)样品供试液的的制备： 提取方

14、法见第一章。 2)净化方法： 单一溶剂萃取法 分段萃取法 液液萃取法 固液萃取法,（二）薄层色谱法,（二）薄层色谱法,2薄层色谱法使用的材料 薄层板 涂布器： 点样器材： 展开箱（层析缸） 显色与检测仪器,规格： 用10cm10cm，10cm15cm，20cm10cm或20cm20cm的规格，要求光滑平整，洗净后不附水珠，晾干。 可用手工自制板可预制板，最好使用厚度为12mm的优质平板玻璃，普通窗玻璃一般不宜用于制作薄层板。,薄层板,吸附剂或载体： 常用的有硅胶G、硅胶GF254， 硅胶H、硅胶HF254， 其次有硅藻土、硅藻土G，氧化铝，氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。

15、其颗粒大小一般要求直径为1040m。,薄层板,最常用的吸附剂： 加有石膏作粘合剂的商品硅胶G， 加有荧光剂的硅胶GF254， 有的另加其他粘合剂如羧甲基纤维素钠以加固薄层板面； 有的品种要求使用加有酸（如硼酸），碱（如氢氧化钠）或缓冲溶液等薄层板。,薄层板,涂布器：,应能使吸附剂在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 商品有手工、半自动薄层板涂布器，涂布的厚度有固定厚度（如25m）或可以调节的两种。,点样器材：,最常用也最方便的是定量点样毛细管（微升毛细管），规格有0.5l、1.0l、2.0l、3.0l、4.0l、5.0l及l0l等。要求是标示容量准确，管端平整光滑，管壁洁净，液流通畅，无

16、堵塞，无污染。 微量注射器,展开箱（层析缸）,应当用薄层色谱专用的展开箱，有平底展开箱和双槽展开箱，还有一种水平或展开箱。,显色与检测仪器,喷雾法：喷雾瓶应能在一定压力下使试剂喷成均匀的细雾状。 浸渍法用浸渍槽为特制的浸渍槽，将展开后的薄层板平稳放入有显色剂的浸渍槽中数十秒至1分钟后取出（揩净薄层板背后的残存试剂）显色。,操作方法:,薄层板的制备 点样 展开 检测,薄层板的制备,除另有规定外，一般制备方法为：将1份吸附剂（如硅胶G）加3份左右的水在研钵中用研杵沿一个方向充分研磨，调成均匀糊状物，倒入已准备好的涂布器中，在玻璃板上平稳地以直线方向移动涂布器，使硅胶浆均匀地涂布。薄层厚度一般为0.

17、20.3mm，涂布好的薄层板于室温下在水平台上晾干，再在105110活化约30分钟，置干燥器中备用。,点样,除另有规定外，点样用的定量微升毛细管，按规定吸取溶液后，以垂直方向小心接触板面使成圆点状，点样基线与底边的距离，点样距离底边以1cm为宜，点间距离视情况为1、1.5或2cm，原点直径应不大于3mm；如样品容量较大，或为了改善分离度，也可点宽约23mm不同长度的条带。点样时须注意尽量不要损害薄层表面。,展开,点样后的薄层板置入加有展开剂的薄层展开箱中，密闭，一般采用上行展开，薄层板浸入展开剂浓度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm，展开至规定开距后立即将薄层板取出，晾干，以备检测。多数品种

18、展距79cm已够，需平衡者可在双槽展开箱，如需达到饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿润的滤纸使展开箱易于被蒸气平衡。展开剂要求新鲜配制。,检测,色谱斑点本身有颜色者可直接在日光下观察色谱中的色斑； 本身在紫外光激发下可发射荧光者可直接置紫外光灯下观察荧光色谱； 需加试剂后方能显色或发射荧光者，则可将试剂用喷雾器均匀喷洒于薄层板面（或用浸渍法），再按规定直接观察或加热后观察。,薄层色谱图记录与保存,照相、数码照相、复印、扫描或描画。,影响薄层色谱分析的主要因素,常规薄层色谱因为是一种“敞开系统”的色谱技术，与柱色谱的区别之一是除材料及器材以外，外界环境条件对被分离物质的层析行为影响很大，分离机

19、制也很复杂；操作技巧也明显的影响色谱质量；,样品的预处理及供试液的制备,中药的成分复杂，未知成分多，供试液中溶出的物质较多，其中有欲测成分也有其他“杂质”，常常由于相互干扰或背景污染而难以得到满意的分离效果，故需对样品进行适当提取净化处理。,薄层色谱的点样技术,一般在常规薄层板上原点的直径不大于3mm，高效薄层板要求原点直径不大于2mm； 点样量不宜过大，最好控制在10l以下； 如在一个位置重复多次点样时，须注意尽量不要将原点点成一个空心圈； 选用溶剂沸点不宜太高（如正丁醇）或太低（如乙醚）。,吸附剂的活性与相对湿度的影响,薄层板从干燥器中取出，自开始点样到展开前，薄层板一般是暴露在实验室的大

20、气中，其活性取决于实验室环境的相对湿度； 控制展开时的相对湿度：采用一定浓度的硫酸溶液或其他调节相对湿度的无机盐水溶液控制湿度。,溶剂蒸气在薄层色谱中的作用,溶剂的蒸气相在展开箱中也参与色谱的展开而形成三维的层析过程，从而对薄色谱的层析过程和结果有很大的影响； 可采用预平衡等方法进行控制。,温度的影响,最直观的影响是被分离物质的Rf值和物质的相互分离度以及斑点的扩散等，故试验时应注意温度的控制。,对照品选择,标准品对照：用已知中药制剂某一药材的某一有效成分标准品制成对照液，与样品在同一条件下层析，比较在相同位置上有无同一颜色（或荧光）的斑点，以此来控制制剂中这种有效成分。 阴阳对照：由于中药制剂中许多化学成分和有效成分不明确，有些已明确但又无标准品，可以采用阴阳对照法处理。 采用对照药材和化学标准品同时对照。为了能够准确检验出制剂投料的真实性，有时只投化学标准品无法鉴别出来，如果增加原药材的阳性对照液对照就可以克服这一不足之处。,阳性对照液制