第九章-血脂及血浆脂蛋白检验.ppt

1、第九章 血脂及血浆脂蛋白检验,脂类：是生物体内不溶于水或微溶于水而溶于非极性有机溶剂的一大类物质的总称，包括脂肪和类脂。,脂肪 (fat)： 三脂酰甘油 (triacylglycerols,TAG)也称为甘油三酯 (triglyceride, TG),类脂(lipoid)： 胆固醇TC 胆固醇酯 CE 磷脂 PL 糖脂,第一节 概 述,脂肪的消化与吸收 1、脂肪：占体重10%-20%，分布在皮下、大网膜、肠系膜、肾周围-脂库；易受营养状况和活动量等因素等影响而变动，称可变脂 2、类脂：占体重5%，分布在各组织和器官中，含量恒定，称恒定脂或基本脂,血脂 ：血浆中所含脂类的总称，主要包括甘油三酯、

2、磷脂、胆固醇、胆固醇酯及游离脂肪酸等。,体内合成的脂类,血脂来源和去路：,食物脂类的消化吸收,脂库动员释放,一、血脂及血浆脂蛋白,血脂,氧化供能,进入脂库储存,构成生物膜,转化成其他物质,血浆脂蛋白：脂类与载脂蛋白组成的颗粒，是脂类在血浆中的存在和转运形式；,（一）.血浆脂蛋白的分类和命名：,CM,前,血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳图谱,（1）电泳分类法：可分离出脂蛋白、前脂蛋白、 脂蛋白和乳糜微粒.,按密度大小依次为：,乳糜微粒（CM）,极低密度脂蛋白（VLDL),低密度脂蛋白 (LDL),高密度脂蛋白 (HDL ),密 度,血浆脂蛋白的分类,颗 粒,（2）超速离心分类法,电泳法和超速离心法分离的

3、脂蛋白对应关系为： 脂蛋白相当于HDL、前脂蛋白相当于VLDL、 脂蛋相当于LDL,（1）脂类：甘油三酯、磷脂、胆固醇和胆固醇酯，其含量和比例在各类脂蛋白中差别极大。,（二）、血浆脂蛋白的组成 脂类和载脂蛋白组成,（2）载脂蛋白（apo）：是指血浆脂蛋白中蛋白质成分，分为apoA、apoB、apoC、apoD、apoE，其主要功能是结合和转运脂类，此外不同载脂蛋白还有其特殊功能。,脂蛋白的结构,9.1 脂类的概述,血浆脂蛋白的结构,血 浆 脂 蛋 白 的 组 成 特 点,在结合和转运脂质及稳定脂蛋白的结构上发挥主要作用 调节脂蛋白代谢关键酶(如LPL、LCAT、HL)活性 LCAT：卵磷脂胆固

4、醇脂酰转移酶（血浆中） 参与脂蛋白受体的识别 如HDL受体、LDLR或称为ApoB/E受体、清道夫受体、ApoE受体（即LRP：LDL受体相关蛋白 ）,载脂蛋白的功能,二、 脂蛋白代谢紊乱,空腹血浆中的脂类水平高于参考值上限者称为高脂血症。临床常见的有高胆固醇血症、高甘油三酯血症等。,又称高脂蛋白血症，临床上通常将空腹血浆中一种或几种LP含量明显升高称高脂蛋白血症。,返回,继发性高脂蛋白血症：指某些原发病在病理演变过程中造成脂蛋白代谢紊乱，而继发出现高脂蛋白血症。如糖尿病、肾病综合征、甲状腺功能减退症等。 原发性高脂蛋白血症：指在排除了继发性高脂血症后，即可诊断为原发性高脂血症。已知部分原发性

5、高脂血症是由于先天性基因缺陷所致。,高脂蛋白血症的分型,按病因分型,15,高脂蛋白血症的Lewis分型法（1976年）,高脂蛋白血症的WHO分类,脂蛋白血症的分型及特征,型高脂蛋白血症,表现：TG升高，TC正常，CM、VLDL含量增高，LDL和HDL降低，又称高CM血症 原因：LPL活性降低，使CM中的TG不能水解为CM残粒，无法被LDL受体识别进行代谢,a型高脂蛋白血症,表现：血清TG、B、LDL和TC含量明显增高，电泳可发现浓染的脂蛋白带，又称高脂蛋白血症 原因：LDL受体缺陷或活性降低，使LDL无法被识别和降解，导致血中LDL升高。,b型高脂蛋白血症,表现：Tc和TG 增高， LDL和V

6、LDl增高 电泳时除有高脂蛋白带外，还有前脂蛋白带，但二者不融合，称混合型高脂血症 原因：LDL受体正常，但VLDL合成旺盛，B合成旺盛，但VLDL代谢未加强。造成VLDL在血中储积。,型高脂蛋白血症,表现：TC和TG增高，电泳可发现阔脂蛋白带，（ 脂蛋白带和前脂蛋白带融合），也称高VLDL血症 原因：罕见的遗传病，患者早年即可发生冠心病,型高脂蛋白血症,表现：高TG，LDL正常，HDL降低，又称高TG血症 原因：病因尚不完全清楚，为显性遗传疾病，VLDL合成亢进，VLDL代谢速度减慢,型高脂蛋白血症,表现：TG增高，CM和VLDL增高，电泳表现为高CM和高前脂蛋白血症共存的混合性高脂血症，4

7、放置血清可呈“奶油样”。 原因：LPL活性低下，导致TG不能降解和VLDL生成过多，引起血中淤积。,高脂蛋白血症的WHO分类,动脉粥样硬化（AS）概述,AS是动脉内膜的脂质、血液成分的淤积和纤维蛋白的增生并伴有钙化和坏死及炎症病变的一类慢性进行性病理过程。目前是人类第一发病率高的疾病，但对其发病机理尚不完全清楚，共同的观点认为：血脂的改变、纤溶系统亢进、高血压和血管内膜炎症是AS的重要病因,脂蛋白代谢与AS的关系,血脂与AS的关系 （1）血脂的异常增高是产生AS的重要因素 （2）血管内皮炎症、氧化型LDL在血管内膜中淤积和产生泡沫细胞是形成As的主要原因 （3）高脂血症引起的血粘度的改变，进而

8、改变凝血系统和纤溶系统的各种因子的表达和功能，可促进血栓的形成，加速As的形成和发展,目前对AS研究的新观点,（1）脂蛋白的氧化 oxLDL的形成是炎症分子强有力的诱导物 （2）血栓素和前列腺素平衡失常 血小板的聚集可释放血栓素导致血栓发生 （3）内皮细胞损伤和钙化 内皮细胞损伤激活纤维蛋白激活剂如组织因子，血小板激活因子，IL1等促血凝物质，导致血管钙化，加剧血栓形成。,高脂血症的防治,合理饮食 加强锻炼 控制体重 食疗和药物治疗相结合,国外血脂标准化工作的回顾和现状,70年代中期，血脂与冠心病关系确立后，血脂测定工作和质量控制日益受到重视，美国西北临床脂质研究中心（LRC）进行了实验室间的

9、血脂评价，发现CV值差距相当大。 1985年，美国CDC提出TC和TG测定的标准化计划，并与WHO合作，当时有800多实验室参加，由CDC提供标准血清，目的摸清实验室间TC和TG测定的准确度和精密性，提高血脂测定水平。, 1985年，美国卫生研究院（NIH）提出胆固醇教育计划（NCEP），成立NCEP委员会，并投入大量资金，动员所有相关组织，成立了四个专家组（LSP），领导TC标准化工作。1990年，NCEP提出了胆固醇测定的方法学建议，并在1995年又提出了LDL、HDL和TG测定的建议，并对几项脂类测定的现状、变异来源、分析目标、医学决定水平及方法学、制造商和机构提出了具体的建议，被称为美

10、国脂类测定的纲领性文件,1981年，国际免疫学会联盟的脂类载脂蛋白委员会和美国CDC提供了有ApoA和B的质控血清，分别在83年和87年进行了室间质量控制。 1989年，国际临床化学联合会（IFCC）召开了载脂蛋白免疫化学测定的标准化会议，整理了一个统一的标准化计划，并提出了一个草案，于1989年7月讨论实施。,目前国际脂类标准化体系和组成（美国）,美国脂类测定的标准化体系,1.对各项脂类测定提出分析目标 脂类测定分析目标(NCEP 1994),美国脂类测定的标准化体系,建立了脂质研究的实验室网络和国家胆固醇参考方法实验室网络 有专门的机构提供标准化血清和标准化指导服务,(包括优秀方法的研究和

11、推荐,参考材料和质控材料的研究和提供),并定期做质量调查,我国脂类测定的标准化现状,至今，我国尚无全国性的脂类标准化体系，但有区域性的调查和行业标准化，已做了大量的基础性工作。 （1）调查摸底 1987年江浙和1992年京津沪医院实验室Tc测定调查 （2）参考物的研制 老年所研制了胆固醇纯度标准物质（GBW092030）和血清胆固醇标准物（GBW09138），1994年国家技术监督局批准作为国家一级标准，达到了美国标准物同等水平，纯度99.8，最近又制备了APOA和B的定值血清，得到WHO的认可,我国脂类测定的标准化现状,（3）参考方法的研究 老年所提出了HLPC法为TC的参考方法其各项技术指

12、标达到了美国ALBK法的要求 （4）推荐常规测定方法 1994年全国脂类测定研讨会提出了TC、TG、HDL和LDL的推荐方法，2003年又发表了临床血脂测定建议,血清脂质的测定,血浆中的脂质随年龄增长而变化，并与多种因素有关系，因此，研究分析前的变异是血脂标准化测定的基础，也是必要的考虑因素。,第二节 血清总胆固醇测定,（1）化学法 （ALBK法）皂化、提取、显色、比色。美国参考方法 （2）高效液相法 我国的参考方法 （3）酶法 临床常规测定方法,酶法测定血脂的原理,胆固醇酯酶（CEH） 胆固醇酯 游离胆固醇 脂肪酸 胆固醇氧化酶（COD） 游离胆固醇 4 胆甾烯酮 H2O2 H2O2酶 H2

13、O2 4氨基安替吡啉 萘酚 红色醌亚胺 H2O,临床意义,病理性血清胆固醇增高：脂肪肝、肝脏肿瘤、甲状腺功能减退、严重糖尿病、动脉粥样硬化 病理性血清胆固醇降低：肝脏疾病、肝脏肿瘤、甲状腺功能亢进，恶性贫血,第三节 血清三脂酰甘油的测定,目前尚无统一的参考方法，美国CDC的参考方法为二氯甲烷硫酸变色酸法，卫生部老年所拟推我国的TG参考方法为HLPC法 TG又称中性脂肪，由于其甘油骨架上分别结合了3分子脂肪酸，2分子脂肪酸和1分子脂肪酸,TG的测定方法,（1）化学法 提取、分离、皂化、甘油糖的氧化和显色 （2）酶法 氧化酶法推荐常规方法,酶氧化法测定TG的原理,脂肪酶（LPC） 甘油三酯 甘油 游离 脂肪酸 甘油激酶（GK） 甘油 ATP 甘油3磷酸 ADP 甘油3磷酸氧化酶 甘油3磷酸 磷酸二羟丙酮 H2O2 H2O2酶 H2O2 4氨基安替吡啉 萘酚 红色醌亚胺 H2O,第四节 HDL的测定,1.超速离心法 美国参考方法 要求： a .离心率4000r/min,18.5h,去除富含