免疫比浊法检测免疫球蛋白.ppt

1、a，1，免疫比浊法是免疫球蛋白、免疫系统、a，2、实验原理、免疫浊度法是可溶性抗原，抗体在液相中特异性结合，产生一定大小的复合物，形成光的折射和吸收，测定该折射和吸收后的透射光和散射光作为计算单位。a、3、免疫比浊法分类，一条光线通过溶液受到光散射和光吸收两个因素的影响而减弱光强度后，透射率浊法：是在光源光路方向(00 )上测定透射光强度与被检测溶液微粒浓度的关系的方法。 散射比浊法：是在光源光路方向(50-960 )角的方向上测定透射光强度和被测溶液中的微粒浓度的关系的方法.a，4，透射率浊法和散射比浊法的光路，检测器a，检测器b，IC，I0，I，透射率浊法，散射比浊法，a，5，(1)基本原

2、理是极其简单的方法。 抗原过剩时，与检测样品中的对应Ig发生抗原抗体反应，形成可溶性复合体，改变反应介质的浊度。 测定方法用分光光度计测定吸收的量。 读取值由吸收单位(a )或OD值表示，a值反映了入射光和透射光的比率。 测量对象物中的Ig含量可以根据标准曲线计算出来。 所测样品中抗原的含量与吸光度成正比，与透射光成反比。 在PEG的作用下，反应会加速复合体的形成。免疫透过率浊法、a、6、透过率浊法的测定原理、诱导剂、a、7、透过率浊法的测定原理、a、8、透过率浊法的缺陷：(1)溶液中存在的抗原抗体复合体分子足够大，分子太小的话无法阻止光线通过。 (2)溶液中抗原抗体复合体的数量足够多。 数量

3、太小，溶液浊度的变化太小，对光束的影响不大。 (3)透过率浑浊是根据透过光变弱的原理进行定量的，所以只能测定抗原抗体反应的第二阶段，检测需要抗原抗体温度培养反应时间，检测时间很长。 光束是每单位时间到达、离开或通过曲面的光能，以a、9、原理、散射比浊法、入射光的某一角度检测来自粒子的散射光，散射光的强度与IC的含量成比例。a，10，散射比浊法测定原理，诱导剂，a，11，散射光测定，a，12，速度散射比浊法(1)的基本原理是测定抗原抗体结合反应的动态过程。 速度是抗原抗体在单位时间内结合形成复合体的速度。 将各单位时间内形成复合体的速度和测定的散射信号连接起来，即动态的速度比浊分析。 如果测量在

4、某个时间内形成的速度的下降，则出现速度的峰值，该峰值的高低表示所测量的抗原的量。 方法评价：灵敏度高(不需要平衡)的抗原抗体键的动态测定，理论上不受背景散射信号的影响，可以检测微量样品，a、15、原理、2 .终点散射比浊法，使抗原抗体作用一定时间进行平衡IC的浊度不再受时间的影响，但在反应IC聚合产生棉状沉淀之前进行了浊度测定。 a、16、散射比浊法的缺陷是，(1)一次测定光吸收值，因此没有考虑所测定的每个样品的吸收和散射效果，测定结果不正确(2)测定的是抗原抗体反应的第二阶段，不适合迅速测定。 (3)终点法存在反应背景，测定样品含量越低，背景比例越大，因此微量测定时，背景干扰是影响正确测定的

5、重要因素。 a、17、影响免疫比浊测定的因素，1、抗原抗体比率2、抗体质量抗体的特异性、有效值、亲和力3、反应溶液4、增浊剂的使用、a、18、1，透过率浊操作简便，适用于普通的自动生化分析器和普通的分光光度计，可在大部分实验室展开。 不足的灵敏度和精度都不理想，需要的抗血清量多，检查周期长。 2、散射比浊的优点是灵敏度、精度高、检测快。 其缺点是需要特定的分析仪器，试剂价格很高。比较透射率浊法和散射比浊法的优缺点，a、19，免疫浊度法测定中应注意的问题1，假浊度的影响假浊度形成原因复杂，主要是抗血清中含有非特异性交叉反应性杂抗体成分的增稠剂浓度和反应时间掌握不适当的样品自身浊度处理不适当的试剂

6、的污染和变质器材，特别是比色卡2、非特异性散射光的影响免疫浊度法很好地受到内源性光散射的影响，为了避免这些非特异性光散射的影响，应用透射率浊法必须保证抗体成分在3以下，散射比浊法在0.5以下。 a、20，本实验使用的聚乙二醇生理特性聚乙二醇是一种中性、无毒、独特的理化性质和良好的生物相容性的高分子聚合物，聚乙二醇PEG具有高亲水性，水溶液中有大的水动力学体积，无免疫原性。 薮结合在药物分子或药物表面时，可以给予其优良性质的药物分子，改变其在水溶液中的生物分配行为和溶解性，在该修饰药物周围形成空间屏障，减少药物的酶解，防止肾脏代谢立即消除，使药物被免疫系统的细胞认识、a、21、材料、1 .免疫球蛋白试剂a、m、G 2.免疫球