化妆品的微生物学检查

1、1,第八章化妆品的微生物学检查,2,化妆品的卫生标准 化妆品微生物学检查基础知识 化妆品中微生物总数检查 化妆品中控制菌检查,3,一、2007版“化妆品卫生规范”,4,5,二、检查的必备知识,1.采样 采样应具有代表性。从两个包装单位以上的样品中共取10g 或10mL作为检验量。 样品应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染。 接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。及时检验的样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。,6,二、检查的必备知识,1.采样 若样品需同时做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品做细菌检验，再将剩余样品

2、做其它分析。 在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行，或在相应条件下，按无菌操作规定进行。,7,二、检查的必备知识,1.采样 如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出之日起该菌种及被检样品应保存一个月。,8,二、检查的必备知识,2.供检样品（供试品）的制备 水溶性液体样品,样品,10mL,90mL生理盐水,1:10供试液,9,二、检查的必备知识,2.供检样品（供试品）的制备 油性液体样品,5mL灭菌液体石蜡,1:10供试液,均质器,10mL灭菌吐温80,4044,10mL样品,混匀,10min,75mL 4

3、044灭菌生理盐水,4044,乳化,10,二、检查的必备知识,2.供检样品（供试品）的制备 亲水性半固体（膏、霜、乳剂）样品,振荡,90mL生理盐水,上清液作为1:10供试液,10g样品,15min,11,二、检查的必备知识,2.供检样品（供试品）的制备 疏水性半固体样品,10mL灭菌液体石蜡,1:10供试液,均质器,10mL灭菌吐温80,4044,10g样品,混匀,10min,70mL 4044灭菌生理盐水,4044,乳化,12,二、检查的必备知识,2.供检样品（供试品）的制备 固体样品,振荡,90mL生理盐水,上清液作为1:10供试液,10g样品,15min,13,三、细菌、真菌总数检查,

4、1.意义 测定总数主要是作为判定化妆品被细菌、霉菌及酵母菌污染程度的标记，也可以观察化妆品中细菌、霉菌及酵母菌的性质和在化妆品中的繁殖动态，以便对样品进行卫生学评价时提供科学依据。,14,三、细菌、真菌总数检查,2.培养基、培养温度和时间,15,三、细菌、真菌总数检查,16,17,三、细菌、真菌总数检查,18,三、细菌、真菌总数检查,19,三、细菌、真菌总数检查,20,三、细菌、真菌总数检查,宜选取细菌、酵母菌平均菌落数30300之间、霉菌平均菌落数550之间的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。 （1）当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数; （2）

5、若有两个稀释度，其平均菌落数均在30 个300 个之间，则应求出两菌落总数之比值来决定，若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于 2 则报告其中稀释度较低的平皿的菌落数,21,三、细菌、真菌总数检查,（3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300 个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之; （4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30 个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之; （5）若所有稀释度的平均菌落数均不在30 300 个之间，其中一个稀释度大于300 个，而相邻的另一稀释度小于30 个时，则以接近30 或300 的平均菌落数乘以稀释倍数报告之； （6）若所有的稀释度均

6、无菌生长，报告数为每g 或每mL 小于10CFU;,22,23,四、控制菌检查检查项目,（1）阴性对照试验：应无菌生长。 （2）阳性对照试验：供试品+阳性对照菌，应检出相应的阳性对照菌。 （3）供试品控制菌检查：依相应的检查方法进行。,24,四、控制菌检查检查流程,25,四、控制菌检查检查流程,26,四、控制菌检查检查流程,27,四、控制菌检查检查流程,28,四、控制菌检查检查流程,29,四、控制菌检查检查流程,30,四、控制菌检查粪大肠菌群检查,粪大肠菌群,31,四、控制菌检查粪大肠菌群检查,粪大肠菌群检查意义,粪大肠菌群主要存在于温血动物粪便中，随粪便排出体外后可直接污染化妆品，若产品中检

7、出该菌群，表明该产品受到粪便污染，可能存在肠道致病菌并引起疾病，是评价化妆品卫生质量的重要指标之一。,32,四、控制菌检查粪大肠菌群检查,粪大肠菌群检查流程图,33,双倍乳糖胆盐培养基,EMB琼脂培养基,靛基质试验,气泡，培养基呈黄色,紫黑色金属光泽,玫瑰红色液面,34,四、控制菌检查粪大肠菌群检查,粪大肠菌群检查结果报告,根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中检出粪大肠菌群。,35,四、控制菌检查铜绿假单胞菌检查,铜绿假单胞菌,36,四、控制菌检查铜绿假单胞菌检查,铜绿假单胞菌检查意义,37,四、控制菌检查铜绿假单胞菌检查,最终

8、结果判断,增菌培养,供试液的制备,书写检验 记录单,分离纯化,无菌落或无特征菌落,配培养基和稀释液,铜绿假单胞菌检查流程图,361,1824h,361,1824h,38,十六烷三甲基溴化铵平板,SCDLP培养基,黄绿色菌膜,灰白色湿润,氧化酶试验,粉红/紫红色,39,绿脓菌素试验,盐酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色,硝酸盐还原产气试验,N2,明胶液化试验,明胶培养基（高层）,明胶液化,40,四、控制菌检查铜绿假单胞菌检查,铜绿假单胞菌检查结果报告,被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。,41,四、控制菌检查金黄色葡萄球菌检查,金黄色葡萄球菌,42,四、控制菌检查金黄色葡萄球菌检查,金黄色葡萄球菌检查意义,43,四、控制菌检查金黄色葡萄球菌检查,革兰染色、镜检 生化试验:血浆凝固酶试验 甘露醇发酵试验,最终结果判断,增菌培养,供试品的处理,书写检验 记录单,分离纯化,