酶活性的影响因素

1、酶反应条件的选择,www.SucaiF,主要内容,www.SucaiF,知识背景,酶的化学本质是蛋白质，与一般催化剂一样，只能催化热力学允许的化学反应，但又具有不同于一般催化剂催化反应的特点和反应机制 酶具有不稳定性，酶促反应的速率受酶浓度、底物浓度、pH、温度、抑制剂及激活剂有关。,www.SucaiF,实验原理,一、温度,实验原理： 一、尿素在酸、碱、酶作用下（酸、碱需加热）能水解成氨和二氧化碳 新鲜大豆中含有较高活性的尿素酶，可以水解尿素生成NH3 CO(NH2)2 + H2O -2NH3 + CO2 尿素养在尿素酶作用下，在中性或酸性环境下生成碳酸胺，在NaOH环境下生成Na2CO3和

2、NH3、NH3与纳氏试剂作用，生成棕黄色碘化双汞胺,www.SucaiF,尿素酶 CO(NH2)2 + H2O - ( NH4 )2CO3 - NH3 NH3 + 纳氏试剂(HgI2.2KI) - NH2.Hg2I3 (棕黄色),www.SucaiF,NaOH,二、pH,淀粉水解产物与碘液反应生成不同的颜色反应 淀粉+碘生成蓝色 糊精+碘根据水解程度，由紫色到橙色，水解越彻底，颜色越浅，直到生成无色糊精（碘不显色） 麦芽糖、葡萄糖遇碘不显色,www.SucaiF,三、激活剂和抑制剂,尿素酶为巯基酶，重金属离子可与其巯基结合而使尿素酶的活性丧失。 氯化钠为唾液淀粉酶的激活剂，硫酸铜为其抑制剂。唾

3、液淀粉酶可催化淀粉生成各种不同大小的糊精及麦芽糖。不同大小的糊精遇碘呈现不同颜色，可用颜色淀粉水解程度，从而研究激活剂和抑制剂的影响。,www.SucaiF,实验材料,器材： 控温水浴锅（每个实验室3个） 制冰机 电磁灶 不锈钢锅 白瓷板 试管、滴管、移液管（1-2ml） 烧杯,www.SucaiF,试剂： 蒸馏水 1%淀粉液 1%蔗糖液 0.1%尿素液、大豆尿素酶溶液 0.1%CuSO4、0.1%HgCl2、0.1%NaCl 1M NaOH、0.5M H2SO4 纳氏试剂 碘液 各种pH缓冲液：5.0；6.8；8.0,www.SucaiF,1、唾液淀粉酶应用液的制备,（1）每人取一个干净的饮

4、水杯，装上蒸馏水。 （2）先用蒸馏水漱口，将口腔内的食物残渣清理干净。 （3）口含约20mL蒸馏水，做咀嚼动作1-2min，以分泌较多的唾液。然后将口腔中的唾液吐入一个干净的小烧杯中。,www.SucaiF,2温度对酶活性的影响,（1）取3支试管，按表4-2进行实验。 （2）按上述表格进行试验，实验完成后，比较各试管中黄红色的深浅。 取尿素液 与尿素酶液,www.SucaiF,3pH对酶活性的影响,www.SucaiF,（1）取3支试管，按表4-3编号后进行实验。 取淀粉与唾液淀粉酶,摇匀后，将各管置37水浴中处理。 （2）每隔1min从pH6.8的试管中取1滴反应液滴于白瓷板上，随后滴加稀碘液1滴，观察颜色变化。 （3）待颜色呈棕色时，向各管中加稀碘液3滴。观察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度。,www.SucaiF,4、唾液淀粉酶的激活剂和抑制剂,www.SucaiF,（1）取3支试管，按下表编号后进行实验。,（2）将各管摇匀后，一起放入37水浴保温。 （3）每隔1min从第2支试管中取出1滴反应液滴于白瓷板上，滴加稀碘液1滴，观察其颜色变化。 （3）待颜色呈棕色时，向各管中加稀碘液1-3滴。观察各