课题3 分解纤维素的微生物的分离

1、1、判断选择性培养基是否发挥了选择性作用所必需的对照是： () a未接种的选择性培养基b未接种的牛肉糊膏胨()培养基c接种的牛肉糊膏胨()培养基d接种的选择性培养基，c，以上的资料，如果有机锡长期被污染，_会降低探讨海洋底泥中是否存在降解三丁基锡的细菌，如果想用于今后的生态修复，目标菌株的培养基成分是胨、NaCl、水和琼脂。 2、(2011广东大学入学考试)人们把含有三丁基锡、三苯基锡等有机锡化合物的油漆涂在船、海洋建筑物等上，有效地防止了海洋生物的附着生长，但是近年的研究发现涂料中的有机锡排放到海里，污染了很多生物。 关于这个污染物的部分研究如下，回答：三丁基锡，生物多样性，稳定性，2011

2、深圳二型16分钟)以下是开展土壤微生物探索活动的三个案例，请在相应的空白中回答。 1 )事例：调查落叶是否会被土壤微生物腐烂(分解)。 设计构想：对照组实验组处理情况未处理过落叶土壤的落叶土壤，应该用编号相同的塑料袋分别包住相同量的落叶土壤，埋在深度5cm的土壤中处理实验组土壤，尽可能排除其作用。 土壤微生物的作用、灭菌，3，案例：探讨土壤微生物对淀粉的分解作用。 实验顺序：把从田地里取出的土壤作为土壤浸出液，放入烧杯中静置一会儿。 取两个烧杯，按编号a、b，加入等量的淀粉糊。 在a烧杯中加入30mL土壤浸出液，放入b烧杯中。 在室温条件下放置7天后，从a烧杯中取20mL溶液，分别加入A1和A

3、2两个试管，从b烧杯中取20mL溶液，分别加入B1和B2的试管，在A1和B1中加入碘液，加入A2和B2中进行处理。 观察各试管，记录实验结果。 (3)案例：调查土壤微生物中是否含有分解纤维素的细菌。 在实验过程中，将土壤浸出液接种到唯一碳源培养基上，用(试剂)进行鉴别。 蒸馏水(无菌水) 30mL，(等量)菲林试剂，颜色变化，水浴加热，纤维素，刚果红，课题3分解纤维素的微生物的分离，(一)纤维素和纤维素酶，纤维素：葡萄糖首尾相连的高分子化合物，广泛存在于植物的根、茎、叶等器官中地球上最丰富的多糖。 纤维素酶：微生物分泌的复合酶，含有C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，通过它们的协同作用，最终将纤维素分

4、解成葡萄糖。 纤维素、纤维二糖、葡萄糖、刚果红染色法、刚果红与纤维素形成红复合体，水解后的纤维二糖和葡萄糖不发生这种反应。 (二)纤维素分解菌的筛选，在加入了刚果红的纤维素培养基中培养微生物时，培养基中出现以菌落为中心的透明环时，该菌落已经被刚果红染色的纤维素分解，因此可以说明是纤维素分解菌。 一、实验设计请根据实验流程图和提供的三个资料和“操作提示”，在考虑问题的基础上，设计详细的实验方案。 本实验的流程与课题2的实验流程有什么区别？ 本实验流程和课题2流程的不同如下。 课题2是将用土样制成的菌悬浊液直接涂在以尿素为唯一氮源的选择性培养基上，直接分离菌落。 本课题是通过选择培养使纤维素分解菌

5、增殖后，把菌液涂在选择培养基上。 其他步骤几乎一致。2 .为什么在纤维素丰富的环境中寻找纤维素分解菌？ 由于生物和环境的相互依存关系，在纤维素丰富的环境中，纤维素分解菌的含量相对较高，因此从这种土样品中得到目标微生物的概率比普通环境高。 3 .把滤纸埋在土壤里有什么作用？你认为纸应该埋多深？把纸埋在土壤里，纤维素分解菌就会相对聚集，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的合适环境。 一般来说，纸必须埋在深度约10 cm左右的腐植土壤中。 阅读和思考，阅读教材第2829页的“资料1”、“资料3”，思考相关的问题。 问题1 :液体培养基。 因为没有添加琼脂。 问题2 :因为培养基中的碳源是纤维素，该培养

6、基只能生长能分泌纤维素酶的纤维素分解菌。 问题3 :“资料3”的两种方法各有优缺点。 你打算选择哪一种方法？方法1是传统的方法，缺点是操作麻烦，加入刚果红溶液会在菌落之间发生拥挤，其优点是这样显示的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。 方法2的优点是操作简便，没有菌落拥挤问题，缺点是纤维素和琼脂、土豆汁中含有淀粉类，能对能产生淀粉酶的微生物发生假阳性反应。 但是，只产生这种淀粉酶的微生物产生的透明圈很模糊，培养基中的纤维素占主要地位，因此可以与产生纤维素酶的透明圈区别开来。 方法2的另一个缺点是，一些微生物有分解色素的能力，在长期培养过程中分解刚果红形成明显的透明环，难以与纤维素分解菌区分。

7、问题4 :为什么选择培养“浓缩”所需的微生物？ 通过选择培养，能够适应该营养条件的微生物迅速繁殖，不适应该营养条件的微生物的繁殖得到抑制，可以发挥“浓缩”的作用。 土壤中纤维素分解菌的分离，1 .土样品采集：土样品采集的方法与本主题课题2相似。 土样的采集选择含有大量纤维素的环境。 这是因为在含有大量纤维素的环境中，会聚集很多分解纤维素的微生物。 如果找不到合适的环境，把滤纸埋在土壤里，一个月左右就能分解纤维素的微生物就会成长。 二、实验例、二.选择性培养：选择性培养所需仪器有： 250 mL玉米瓶、无菌计量瓶、药匙、1 mL和10 mL移液管、天平、摇床、温度计等。 在250 mL的小瓶中放

8、入30 mL的选择培养基，用8层纱布制成小瓶栓，装上小瓶，在小瓶栓外包2层包装纸，用绳子捆上，用121次高压蒸汽灭菌。 选择培养操作：取土样品为20 g，无菌条件下放入装有30 mL培养基的小瓶。 把摇瓶放在摇床上，30次振荡培养12 d，重复上述方法再次培养，直到培养基混浊，然后进行梯度稀释和平板涂布。 3、刚果红染色法分离：纤维素分解菌阶段所需器械为无菌培养皿、编码器、移液管1 mL、装有9mL无菌水的大试管20 mL、温箱等。 培养基的调制是参考教科书横栏的比例调制的。 在500 mL的三角瓶中放入200 mL的培养基，在121下进行20 min的高压蒸汽灭菌。 逆平板操作：溶解灭菌后的

9、固体培养基，根据无菌操作的要求在无菌培养皿中放入1520 mL培养基，凝固后待机。 涂抹平板：分别取稀释度104106的菌悬浊液0.1 mL滴加到平板培养基上，用涂抹器均匀涂抹菌液，翻转培养30次，生长到菌落。 每个稀释度涂3片平板，注意对照。 刚果红染色的具体操作步骤见教科书资料3。 制备菌悬浊液：按照本课题1的稀释操作方法，将培养的培养基等比稀释，从最大倍数稀释到106。、刚果红染色法，方法1 :培养微生物，加入刚果红进行颜色反应，方法2 :打倒平板时加入刚果红，考虑到这两种方法的优缺点，方法1的缺点是操作复杂， 如果加入刚果红溶液，菌落之间就会发生拥挤，这样所示的颜色反应基本上是纤维素分

10、解菌的作用方法，操作简便，没有菌落拥挤问题的缺点是因为培养基中含有淀粉状物质， 对能产生淀粉酶的微生物能产生假阳性反应的缺点2一些微生物具有分解色素的能力，在长期培养过程中分解刚果红，形成明显的透明环，难以与纤维素分解菌区分，3、结果分析和评价，1 .培养基的制作是否合格如果观察到形成透明环的菌落，就有可能分解纤维素得到微生物。 2 .分离结果是否一致，因为土壤中细菌的数量远远多于真菌和放线菌的数量，所以最容易分离的是细菌。 但是，根据采集的土壤一样的环境，不同的同学有可能得到真菌和放线菌等的分离结果。 将土壤采样选择性培养(是否需要该步骤取决于样品中目标菌株的数量)梯度稀释菌悬浊液涂在具有特

11、定选择作用的培养基上，选择单菌落发酵培养，放学后练习2 :2011深圳二型16分钟)以下是开展土壤微生物探索活动的3个案例(1)案例：调查落叶是否被土壤微生物腐烂。 设计思路：对照组实验组处理情况未处理过落叶土壤的落叶土壤，是用有编号的相同塑料袋分别包住相同量的落叶土壤，埋在深度5cm的土壤中处理实验组土壤，尽可能排除的作用。 以上资料显示，有机锡的长期污染降低，生态系统降低。 探讨海洋底泥中是否存在降解三丁基锡的细菌，如果想用于今后的生态修复，目标菌株的培养基成分为胨、NaCl、水和琼脂。 2、(2011广东大学入学考试)人们把含有三丁基锡、三苯基锡等有机锡化合物的涂料涂在船、海洋建筑物等上，有效防止了海洋生物的附着生长，但近年的研究发现涂料中的有机锡排放到海里，污染了很多生物。 对该污染物的部分研究如下：三丁基锡、生物多样性、稳定性、2、案例：探讨土壤微生物对淀粉的分解作用。 实验顺序：把从田地里取出的土壤作为土壤浸出液，放入烧杯中静置一会儿。 取两个烧杯，按编号a、b，加入等量的淀粉糊。 在a烧杯中加入30mL土壤浸出液，放入b烧杯中。 在室温条件下放置7天后，从a烧杯中取20mL溶液，分别加入A1和A2两个试管，从b烧杯中取20mL溶液，分别加入B1和B2的试管，在A1和B1中加入碘液，加入A2和B2中进行处理。 观