消毒与灭菌PPT课件.ppt

1、第四章 消毒与灭菌技术,教学情境： 医院消毒水气味 注射前皮肤消毒 晒被子 熏蒸食醋预防感冒 等生活经历,1,第四章 消毒与灭菌技术 P19,灭菌：利用物理和化学方法杀灭或除去物料及设备中所有微生物的过程，包括繁殖体和芽孢。 消毒：用物理或化学方法杀死物料、容器、环境中的一切病原微生物，一般只能杀死营养细胞而不能杀死芽孢。 消毒不一定能达到杀菌的要求，而灭菌能达到消毒的要求。 思考：消毒与灭菌的概念及区别,2,第一节 化学灭菌方法P19,原理：某些化学药剂能与微生物细胞物质发生反应而具有杀菌作用。如甲醛、氯（或次氯酸钠）、高锰酸钾、环氧乙烷、季铵盐（如新洁尔灭）等。 适用范围：化学药剂适于接种

2、室、培养室等环境的灭菌，接种操作前小型器具的灭菌等。 化学药品的灭菌使用方法，根据灭菌对象的不同有浸泡、添加、擦拭、喷洒、气态熏蒸等。,3,1醇：70-75酒精溶液 75酒精溶液的杀菌作用在于使细胞脱水，引起蛋白质凝固变性。对营养细胞、病毒、霉菌孢子均有杀死作用，但对细菌的芽孢杀死作用较差。常用于皮肤和器具表面杀菌。苯氧乙醇2%水溶液 2酸： 乳酸（丙醇酸、乙羟基丙酸)，乙酸，过氧乙酸 过氧乙酸是强氧化剂，它是广谱、高效、速效的化学杀菌剂，对营养细胞、细菌芽孢、真菌孢子和病毒都有杀灭作用。 3碱：石灰水 （熟石灰的水溶液） 4酚类：苯酚（石炭酸、C6H6O）毒性较大，易污染环境，且水溶性差，使

3、应用受到限制，而酚类衍生物的使用，扩大了作为消毒剂的使用范围。来苏儿（甲酚皂溶液）,4,5醛：甲醛 甲醛(HCHO)是强还原剂，它能与蛋白质的氨基结合，使蛋白质变性，对氨基和蛋白质的变性有较强活性，这是用甲醛作为灭菌剂的根据。使用时可以以2份37甲醛溶液与1份KMnO4混合，或者将37甲醛溶液直接加热，产生气态甲醛用于灭菌。甲醛灭菌的缺点是穿透力差。 福尔马林（甲醛30-40%水溶液） 戊二醛 在酸性条件下，不具有杀死芽孢的能力，只有在碱性条件下，才具有杀死芽孢的能力，常用2的溶液，常用于器具、仪器和工具等灭菌。,5,6氧化剂： 高锰酸钾 高锰酸钾溶液的灭菌作用是使蛋白质、氨基酸氧化，使微生物

4、死亡，一般用0.10.25的溶液。 氯气 Cl2+H2O HClO+HCl 次氯酸 盐酸 过氧化氢，环氧乙烷，漂白粉（含氯消毒剂）， 漂白粉：（次氯酸钠、氯化钙、氢氧化钠的混合物） 漂白粉的化学名称是次氯酸盐(次氯酸钠，NaOCl)，它是强氧化剂，也是廉价易得的灭菌剂。它的杀菌作用是次氯酸钠分解为次亚氯酸，后者不稳定，在水溶液中分解为新生态氧和氯，使细菌受强烈氧化作用而导致死亡，对杀死细菌和噬菌体均有效。 臭氧：原理（常温常压下）O3=O2+O(单个氧原子）。特点：不存在任何有毒残留物，称为无污染消毒剂。适用：环境消毒,6,去垢剂：新洁尔灭 （苯扎溴铵、溴化苄烷铵） 新洁尔灭是表面活性剂类洁净

5、消毒剂。它在水溶液中以阳离子形式与菌体表面结合，引起菌体外膜损伤和蛋白变性。10 min能杀死营养细胞，但对细菌芽孢几乎没有杀灭作用。一般用于器具和生产环境的消毒，不能与合成洗涤剂合用，不能接触铝制品。,7,8,第二节 物理灭菌的方法P13,（一）干热灭菌法 进行干热灭菌时，微生物细胞发生氧化，微生物体内蛋白质变性和电解质浓缩引起中毒等作用，其中氧化作用导致微生物死亡是主要依据。 由于微生物对干热的耐受力比对湿热强得多，故干热灭菌所需的温度要高，时间要长，一般160170 ，11.5 h。 实际应用时，对一些要求保持干燥的实验器具和材料可以采用干热灭菌法,9,（一）干热灭菌法,是一种极端的手段

6、，温度高、时间长。 原理：氧化作用是干热灭菌的主要根据。 160-170持续2h或170-180持续1h； 18045min, 180持续2h或25045min； 140持续3h； 160保温1 h。自然降温至60才能开启箱门取出材料。 主要针对必须保持干燥的实验器具或材料（培养皿、接种针、固定化细胞用的载体材料等）。,10,（二）火焰灭菌法 利用火焰直接杀死微生物的灭菌法称为火焰灭菌法。该法方法对设备要求低，操作简单，灭菌彻底，但使用范围有限，仅适用于接种针、玻璃棒、三角瓶口等的灭菌。,11,（三） 湿热灭菌技术P11,湿热蒸汽比干热空气穿透力大，易使菌体蛋白变性而使微生物死亡。利用饱和蒸汽

7、进行灭菌的方法称为湿热灭菌法。 1流通蒸汽法。只能杀死营养体而不能杀死芽孢 2间歇蒸汽灭菌法。适用于不耐高温的物品，可达到完全灭菌的目的。 3高压蒸汽灭菌法。彻底迅速的灭菌方法，最常用。,12,（三） 湿热灭菌技术P11,1流通蒸汽法。将材料置于蒸锅或蒸锅的笼屉上，盖好盖，待有蒸汽均匀冒出后，持续15min。只能杀死营养体而不能杀死芽孢。 简易消毒法，适用与消毒餐具、衣裤等的消毒,13,（三） 湿热灭菌技术P11,2间歇蒸汽灭菌法。 100流通蒸汽加热30min，培养箱内常温过夜或24h后芽孢萌发成营养体，再用蒸汽灭菌。反复三次即可。可达到完全灭菌的目的。 适用于不耐高温的物品，如血清培养基的

8、灭菌。,14,（三） 湿热灭菌技术P11,3高压蒸汽灭菌法。一般我们所说的湿热灭菌法指的就是高温蒸汽灭菌法。常用高压蒸汽灭菌器。条件为121 ，101KPa，1530 min，因为蒸汽穿透能力强，灭菌效果好，所以湿热灭菌为最基本的灭菌方法。 原理：借助于蒸汽释放的热能使微生物细胞中的蛋白质、酶和核酸分子内部的化学键，特别是氢键受到破坏，引起不可逆的变性，使微生物死亡。,15,（三） 湿热灭菌技术3高压蒸汽灭菌法,由于蒸汽有很强的穿透能力，湿热灭菌对耐热芽孢杆菌来说，温度升高10 时，灭菌速度常数可增加810倍，对营养细胞更高。 蒸汽来源方便，价格低廉，灭菌效果可靠，是目前最为常用的灭菌方法。因

9、此实验室、工厂化生产中广泛采用湿热灭菌。湿热灭菌有经济快速等特点,16,第三节 其他灭菌技术,低温法 巴氏消毒法 煮沸消毒法 辐射法 渗透压法 机械除菌法（过滤除菌）,17,1、煮沸灭菌法 方法：煮沸15-30min,可杀灭营养体； 煮沸1-2h,可杀灭芽孢。加盐（2%碳酸氢钠）可加速芽孢死亡 适用于：金属器械，食具。,18,2、巴氏消毒法 原理：利用病原体不耐热，用适当的温 度与保温时间处理后即可将其全 部杀死。 目的：杀灭营养体 方法: (1)63C，保持30min (2) 74C,保持30s 适用:牛奶，发酵产品,19,3.辐射灭菌法,定义：紫外线、高能电磁波或放射性物质产生的高能粒子能

10、起到灭菌的作用。 种类： 紫外线杀菌 微波消毒 60Co灭菌,20,4.紫外线杀菌,波长为200-300nm的紫外线有杀菌能力。256-266nm杀菌力最强。 原理：使DNA链断裂；抑制DNA正常复制。 紫外线对芽孢和营养细胞都能起作用，但细菌芽孢和霉菌孢子对紫外线的抵抗力强。 紫外线的穿透力低，仅适用于表面灭菌和无菌室、培养间等空间的灭菌，且距照射物不超过1.2 m；对固体物料灭菌不彻底，也不能用于液体物料的灭菌。,21,5.微波消毒： 原理：利用微波（波长短频率高的电磁波）进行加热从而杀菌。 适用：牛奶，包装好的保鲜食品；玻璃器械，敷料。 优点：加热快、均匀，设备简单易操作 缺点：不能对金

11、属器械进行微波消毒；微波穿透力弱；高剂量的微波对人体有害，要防止泄露,22,6.60Co灭菌,60Co照射灭菌，被灭菌的物体温度变化小，仅仅升高5C。 适用于医疗器械、医用塑料制品、外科敷料、污染物、生物组织、生物制品、抗生素、乳糖、动物饲料等。 要求高。要专人操作，专门的防护措施，专门的使用基地等。,23,7.机械除菌法,（1）机械擦拭（略） （2）过滤除菌 定义：利用过滤方法阻拦微生物达到除菌的目的。 此法仅适用于澄清液体和气体的除菌。工业上常用过滤法大量制备无菌空气，供好氧微生物培养过程使用。,24,（2）过滤除菌,常用滤菌器：蔡氏滤菌器；滤烛滤菌器；玻璃滤菌器；滤膜滤菌器。（P16图2-3） 常用滤材：玻璃棉，陶瓷，石棉。细菌过滤器常用直径为0.2-0.45 m的醋酸纤维素滤膜。,2