分子诊断在移植配型中的应用ppt课件

1、1、分子生物学检测技术在移植健身中的应用2、第一节分子生物学检测移植健身中的应用HLA的分子生物学分类3、有两个在某医院行了肾移植手术的患者：一个是张某，女，5.2岁，另一个是李某，男，2.5岁，手术前是接受透析治疗健康状态良好的尿毒症患者，张某的移植其中一个HLA基因的分类检测结果显示，张某与供应者HLA不相符的李某与母亲HLA拟合点有4点相符，2点不相符，血型系统相符。 但是，由于肾源不足，张某家族移植手术意志坚强，张某和李某同样进行了移植手术.4、张某术后2周出现移植区胀痛、小便，血液尿素氮升高，补体水平降低，血小板减少，医生给予适当免疫抑制剂缓解李某术后移植肾功能良好，上述一年后，张某

2、多次发生上述移植移植排斥反应导致肾功能完全丧失死亡，李某移植肾功能正常，身体状况良好。5、以上在脏器移植中介绍了受试者HLA基因相容性影响术后移植移植排斥反应发生和成活率的典型病例，医师在进行脏器移植手术前要慎重决定是否要根据HLA相容性进行移植手术。 双方HLA相容性良好，且受者为直系来源，移植手术成功率高，移植排斥反应轻或不发生，受者成活率高。6、移植(transplantation):是指用自身或异体的正常细胞、组织或器官置换病变或功能不全的细胞球、组织和器官，维持和重建机体生理机能的治疗方法。 移植物(graft )捐赠者(donor )受体(recipient )移植移植排斥反应(g

3、raft rejection )，一、关于移植的概念，七、移植的细胞球、组织、器官被称为移植物(graft )，移植物的捐赠者被称为捐赠者(donor )。 移植物的收货人称为收货人或者宿主(recipient or host )。 移植物是否被接受者接受，与供给、接受者的遗传背景密切相关。 如果两者的遗传背景不同，移植的移植物一般会发生炎症反应和坏死，被称为移植移植排斥反应(graft rejection )。8、目的治疗晚期器官衰竭、恶性血液病、肿瘤、遗传病。 要求：使移植物能在接纳体中生存或确保暂时的时间。 问题：移植排斥反应。 移植的目的和要求9、早期脏器移植尝试与研究、1.0、移植类

4、型、1.1、自体移植：移植物取自受者自身。 同种同型移植：指基因型完全相同或基本相似的个体之间的移植。 同种异型移植：也称为同种异基因移植(allogeneic transplantation )的同种内基因在不同个体之间的脏器移植，临床移植多为这一类型。 异种移植：指不同种类个体之间的移植。1.2、2、移植移植排斥反应发生的反应历程移植移植排斥反应本质是特异性免疫应答，引起移植移植排斥反应的抗原称为移植抗原或组织相容性抗原。 在实质脏器移植中，宿主对供体器官的免疫移植排斥反应被称为宿主抗移植物反应(host versus graft reaction，HVGR )，而在骨髓、造血干细胞移植中

5、，移植物中的淋巴细胞识别宿主抗原，并进一步攻击宿主靶组织引起移植排斥反应被称为移植物抗宿主反应(graff .1.3、异种移植无例外失败相同系统内无关个体间移植往往失败自身移植总是成功同种异体的接纳体对第一次移植物排斥时间长，但一旦再次接受相同供体的移植物，被排斥的接纳体和供体之间的血缘关系越接近，移植就越有可能成功(1)移植移植排斥反应规律、1.4、移植排斥反应研究、1.5，首次植皮第5天首次植皮1.2第5天再次植皮，1.6、宿主抗移植物反应(HVGR )是一般脏器移植中常见的超急性、急性、 包括慢性移植排斥反应在内的移植物抗宿主反应(hraft-versus-host Reaction，G

6、VHR )，主要发生在移植骨髓和其他免疫细胞球移植中，所谓同种异型移植排斥的分类和效果机制，1.7超急性排斥反应(hyperacute rejection )， 移植脏器和接受者的血管连接后或者1.2日内发生的移植排斥反应的发生时间从移植脏器和接受者的血管连接后几分钟到1.2日内发生，1 .超急性排斥反应、1.8、病理变化血管内的血液凝固缺血， 变性和坏死的发生反应历程是在以体液免疫为主的受试者体内保存的捐献者抗体抗ABO血型系统抗原的抗体抗HLA抗原的抗体抗VEC (血管内皮细胞)抗原的抗体、19，急性排斥反应(acute rejection )是移植后数日到2周左右出现的免疫排斥反应， 进

7、展迅速出现在移植后数日至2周左右，80%发生在移植后一个月内，伴有以急性排斥反应、2.0、病理变化急性体液性移植排斥反应血管内皮细胞损伤为主要表现的急性血管炎急性细胞球性移植排斥反应坏死和大量淋巴细胞、m浸润， 2.1发生机制：对以细胞免疫为主的移植物血管损伤血管内皮细胞表面的同种异型抗原，通过IgG抗体补体依赖细胞球毒作用薄壁细胞障碍CD4 Th1介导的迟发型超敏感反应CD8 Tc直接杀伤表达同种异型抗原的移植物细胞，所谓慢性排斥反应(chronic rejection )，是指移植后几周、几个月， 进而在三年五载免疫移植排斥反应发生时间在移植后数周、数个月，甚至三年五载之间发生病理变化间质

8、纤维化，移植物内血管平滑肌细胞增殖，血管硬化，3 .发生慢性移植排斥反应，2.3发生机制：体液免疫与细胞免疫的共同作用(具体并不完全清楚) 急性排斥反应细胞球坏死的继续和结果炎症性CD4 T细胞球/M相关的慢性炎症非免疫学因素诱发组织器官退行性变化，2.4、2.5、移植物抗宿主反应(Graft-versus-host reaction GVHR )， 如果作为移植物中抗原特异性淋巴细胞识别宿主组织抗原而产生的移植排斥反应的发生条件的、宿主和移植物间的组织适应性不匹配的移植物中所含的免疫细胞球宿主处于免疫缺乏或免疫功能的严重缺陷状态，则移植物抵抗宿主病，4 .移植物抵抗宿主病，2.6、移植物抵抗

9、宿主病， 2.7、移植物抗宿主病，28 GVHR发生情况一般难以逆转，导致移植失败，严重伤害患者，领便当主要为移植骨髓(主)、胸腺移植、脾移植、新生儿大量输血，2.9、MHC(HLA )适宜性和移植移植排斥反应、编目，3.0、移植适宜性的基本原理是一系列检查移植适合性(也称为HLA适合性/组织适合性) :和脏器移植中提供者之间移植抗原(HLA )是否一致的措施。 目前主要检测出ABO抗原系统和HLA抗原系统。 供体、受体之间的等位基因差异所形成的多态性产物作为组织相容性抗原，有可能对机体诱导免疫应答，去除“外来”移植器官，引起移植移植排斥反应。 因此，移植术前必须进行一系列的检查。 引起3.1

10、、移植移植排斥反应的抗原主要是人的主要组织相容性抗原(majorhistococompatibilitycomplex，MHC )、二次组织相容性抗原、血型系统抗原和组织特异性抗原。 目前主要检测出ABO抗原系统和HLA抗原系统。 人白细胞分化抗原(human leukocyte antigen，HLA )是最重要的人类主要组织相容性抗原，本质上供体与受体之间HLA型的差异是急性移植移植排斥反应的主要原因。因此，在捐赠者的选择中科学应用移植拟合技术提高捐赠者、受体之间的HLA位点匹配率，是提高受体长期成活率的重要因素。3.2、第二节在分子生物学检测移植拟合中应用HLA的分子生物学分类，一、HL

11、A遗传学基础Human leucocyte antigen人白血病抗原，3.3，一、HLA和脏器移植，基本概念组织相容性(histocompatibility ) 器官和组织移植时，供应者和接受的程度，非适合性地出现了移植排斥反应(rejection )，诱导移植排斥反应的抗原被称为组织相容性抗原，移植抗原也被称为。3.4、主要组织相容性抗原(MHA )主要组织相容性抗原majorcompatibilityantigen亚组织相容性抗原人类白细胞抗原HLA Human leukocyte antigen中，与移植排斥有关的主要是HLA类和类抗原。3.5、主要组织相容性复合物(MHC )查询密码

12、MHA (人为HLA )的基因集中分布在染色体上的特定区域，被称为主要组织相容性复合物(majordococompatibilitycomplex，MHC )，MHC查询密码的产物被称为MHC分子、3.6、抗原免疫类抗原肽MHC/分子复合物免疫应答CD4 /CD8 T细胞球(细胞免疫，体液免疫)抗原性异物排除MHC分子为t细胞球分化发育所需的MHC分子为免疫应答的启动和调节所必需的，根据1.2蚊蝇蚊蝇蚊蝇653查询密码分子的功能和分布，确定复合物整体的遗传3.8、HLA基因的分类、分类基因座系基因HLA-A -B -C HLA-E -F -G -H -X系基因HLA-DP -DQ -DR HL

13、A-DN -DO -DM系基因是位于分类基因之间的补体和炎症因子(例如C4A、C4B、C2、Bf等HLA-II类抗原主要在被活化的m、b细胞球、树突细胞等抗原递呈细胞、血管内皮细胞和被活化的t细胞表面上表达。 HLA -主要是补体成分，如C2、C4、Bf等。 4.0、4.1、4.2、4.3、HLA基因的命名方法是HLA连词符() 基因所属座位名亚斯塔风险(* )的数字。 例如，HLA-A*0201表示HLA-A座位0201基因，HLA-DRB1*0101表示HLA-DRB1座位0101基因。 HLA命名法、4.4、HLA血清学命名法是HLA连词符() 基因所属的座位号。 HLA-A3、HLA-

14、DR4等。 血清学命名中的数字编号与基因命名法的数字编号的前两位相对应，例如，与HLA-A3的数字编号相对应的基因命名中的数字0.3，HLA-A座基因的前两位数字为0.3人，其表达产物均为HLA-A3抗原，可与HLA-A3抗体结合。 因此，血清单位型为同一分子，它们的查询密码基因不一定相同。 例如，至少1.7基因(HLA-A*02010217 )的查询密码产物是HLA-A2抗原。 (2) HLA的遗传特征，1倍型遗传haplotype是1个染色体上的HLA的各点的距离非常近，由于同源染色体间的交换少，所以亲代的HLA以单倍型单位将遗传信息传给子代。、a、b、g、h、h、h、(1)、(2)、(3

15、)、(4)，全国的高等医学学校的教材的分子诊断学，4.8，4.9， 2显性遗传显性与某一点的等位基因等同的多数个体的HLA位点是杂交子，但是，如果父亲和母亲在某一位点具有相同的等位基因，则该子代的该位点成为同源结合子。5.0、HLA复合物中各等位基因具有显性，从而使人群中HLA表型多样性大幅增加，达到108多级。因此，除了一卵双生，无关个体间的HLA型完全相同的可能性极小。 HLA molecule :A1、A2、B8、B35、甲、甲、乙、HLA molecule :A2、A10、B40、B16、HLA共显性表达、5.1、3连锁不平衡理论上，一个HLA部位的等位基因和另一个部位或一些部位的等位

16、基因在某一单倍型中出现的频率是其但是，实际上，根据地域和人的不同，伴随某种基因的频率特别高，这种现象被称为连锁不平衡。 发现一些疾病的发生与HLA复合物中的特定等位基因密切相关。5.2、脏器移植拟合标准、最新的HLA命名已包括300多种类和350多种类等位基因，其中经典的HLA-2A、HLA-2B和2DR抗原与造血干细胞移植和脏器移植效果密切相关，被称为“移植抗原”。 目前，国际上通用的脏器移植适配标准为HLA-2A、2B与2DR抗原的错配标准(zero HLA-2A、2B、2DR antigen mismatch，0 Ag MM )。 最佳的HLA适合性是HLA-2A、2B和2DR抗原分型完全一致。在5.3、肾移植中，类抗原主要影响患者的长期成活率，尤其是HLA-B抗原最重要，类抗原对患者的长期成活率和短期成活率产生重大影响，HLA-DR抗原最重要的HLA适配性和移植效果最密切的是移植骨髓， 由于移植物中大量淋巴免疫细胞球识别宿主抗原，进而攻击宿主营销对象组织，引起移植物的抗宿主反应(graft versus host reaction，GVHR )，GVHR不易被免疫抑制剂特罗尔，因此对HLA合身性的要求非常高。 5.4、5.5、移植骨髓需要合适的捐赠者，一般先