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文档简介

1、磁珠分选技术,磁珠分选技术,免疫学+细胞生物学+磁力学 基于抗体对抗原的特异性识别：免疫磁珠 磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连：抗体偶联磁珠、二抗磁珠、生物素磁珠、Oligo dT磁珠 在高强度、梯度磁场中达到磁性分离的目的：分离细胞、蛋白、核酸、细菌等,磁珠 磁力架 分离柱或分离试管 MACS，Dynal，BD，StemCell，R Dynal d=4.5um2.8um1um，多聚材料包被的氧化铁超顺磁微球；均一性好；也适用于细胞活化； BD d200nm，超顺磁化微粒；包被了高质量的BD抗体； StemCell 管式；柱式; R 再加入链酶亲和素标记的磁珠,应用去除法分选人

2、外周血中的B细胞,先去除非目的细胞，再进行阳性分选。 非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原；要分选非常稀有细胞，先去除非目的细胞再行阳性分选，可获得高纯度的目的细胞。,标记去除非目的细胞,标记目的细胞,洗脱目的细胞,应用：分选人外周血中的CD4+CD25+ T细胞,分选前,去除分选后,阳性分选后的阴性组分,阳性分选后的阳性组分,洗脱目标细胞,用标记1标记目标细胞,用标记2标记目标细胞,去除磁珠标记,洗脱目标细胞,进行多次连续阳性分选，进行新标记前先去除原来的磁珠标记。 可进行多参数分选。,应用：分选人外周血中的CD3+CD56+ T细胞,分选前,第一次阳选,第二次阳选,优点：操作简单，高效快捷，无菌和细胞状态更有保证，回收率、纯度高。 缺点：不能在分选的同时进行分析，分选过程中很难去除死细胞团块的干扰，难于同时进行多种标记物的分选。,分选前标本处理 密度梯度离心(Ficoll, Percoll) （根据情况）溶血(溶解红细胞) 过滤(单个细胞) 分选标本：不含有死细胞或者碎片的单细胞悬液 骨髓、外周血、脐带血提取的单个核细胞 处理的组织细

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