抗狂犬病血清生产工艺及检查#优质严制

1、抗狂犬病毒血清：从狂犬病毒固定毒免疫马中获得的血浆由胃酶消化纯化。生产流程：1.原液：从免疫马(单血浆术)中获得免疫原血浆，分离血浆(血浆片剂：去除杂蛋白) (适合防腐剂)，进行杀菌检查，使用原料的血浆(狂犬病效价为80 iu/ml)；不得低于)；免疫血浆稀释，适当量的胃酶(用生理氯化钠溶液制造胃酶1mg/ml溶液)，血型a型量测定(一般3415，血凝抑制法)，必要时添加适当量的甲苯，调整适当的PH值，然后在适当温度下消化(胃酶消化：去除Fc末端)加热、硫酸铵盐析、明矾吸附精制；浓缩在超滤法或硫酸铵沉淀法中，添加适量防腐剂汞或m-甲酚，然后净化，过滤丰口惠后获得原液。2.半成品：合格的原液按照

2、成品规格稀释成灭菌死水，调整效价、蛋白质浓度、pH值及氯化钠含量，进行菌剂去除过滤。成品：批、分配、包装。原液半成品成品1.抗体效价第一方法鼠标中和试验方法(仲裁法) (一般规则3512)无菌检查(一般规则1101)热源检查(一般规则1142)无菌检查(一般规则1101)1.识别(1)动物中和实验(一般规则3512)(2)免疫双重扩散法(一般规则3403)或酶联免疫吸附法(一般规则3418)2.物理检查(1)外观(2)渗透压摩尔浓度(一般0632)(3)装货(一般规则0102)化学验证(1)pH值(一般规则0631)(2)蛋白质含量(一般规则0731第一法)(3)氯化钠含量(一般规则3107)

3、(4)硫酸铵含量(一般规则3104)(5)防腐剂含量(thimerosal通则3115，gam cresol通则3114)(6)甲苯残留(一般规则0861)4.纯度(1)白蛋白检测(一般规则0541第三法)(2)F(ab)2含量，SDS-PAGE(一般规则0541第5法)抗体效价(一般规则3512)无菌检查(一般规则1101)热源检查(一般规则1142)异常毒性检查(一般规则1141)a类开发#F (ab) 2: fragment antigen-binding是抗原结合片段。抗体免疫球蛋白IgG由胃酶处理，去除pFc段，纯化所得F(ab)2。图1胃蛋白酶消化的抗体生成两个片段F(ab)2片段

4、和pFc片段。免疫双重扩散法：抗原和抗体在同一凝胶内全部扩散，徐璐相遇后形成特定的沉淀线；抗原和抗体分别添加到与同一凝胶板间隔一定的两个小孔中，徐璐扩散，当抗原浓度的比例合适时徐璐相遇，形成一条白色圆弧沉淀线。enzyme-linked immuno sorbent assay(以下简称ELISA):这是酶免疫分析中使用最广泛的技术。其基本方法是将已知抗原或抗体吸附到高相载体(聚苯乙烯未反应板)表面，在高商标面进行酶标记的抗原抗体反应，并用清洗法清洗液体的自由成分。一般的ELISA方法有用于检测大分子抗原的双抗体夹心法和用于测量特定抗体的间接方法。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳原理聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺(Acr)和交联剂N，N 一亚甲基双丙烯酰胺(Bis)在催化下的硫酸铵(AP)、N，N ，N 四甲基乙二胺(TEMED)的作用下聚合交联形成聚丙烯酰胺凝胶电泳根据蛋白质分子携带的电荷的差异和分子大小不同，根据不同的迁移率将蛋白质分成多个带，如果分离和精制的样品只包含相同的蛋白质，那么在蛋白质样品电泳后只需分离一个带。SDS使负离子表面活性剂干扰蛋白质的氢键和疏水结合，按一定比例与蛋白质分子结合，使蛋白质具有远超过原电荷的负电荷，从而掩盖了各种蛋白质分子之间的自然电荷差异。因此在电泳