残留溶剂检查法.ppt

1、残留溶剂检查法 浙江省药品检验所： 王建,药物中的残留溶剂系指在药品生产过程中使用，但在工艺过程中未能完全去除的有机挥发性化合物。药品中常见的残留溶剂见表1，除另有规定外，第一、二、三类溶剂的残留量应符合表中的规定；对第四类溶剂，应根据生产工艺的特点，制定相应的限度，使其符合产品规范、GMP或其它基本的质量要求。,表1 药品中常见的残留溶剂及限度,第一类溶剂（应该避免使用） 溶剂名称英文名 限度（ppm) 苯Benzene 2 四氯化碳Carbon tetrachloride 4 1，2二氯乙烷1,2-Dicloroethane5 1，1-二氯乙烯1,1-Dichloroethene8 1，1

2、，1三氯乙烷1,1,1-Trichloroethane1500,第二类溶剂（应该限制使用）,溶剂名称英文名浓度限度（ppm) 乙腈Acetonitrile410 氯苯Chlorobenzene360 氯仿Chloroform60 环己烷Cyclohexane3880 1，2二氯乙烯1,2-Dichloroethene1870 二氯甲烷Dichloromethane600 1，2二甲氧基乙烷1,2-Dimethoxyethane 100,第二类溶剂（应该限制使用）,N,N-二甲氧基乙酰胺N,N-Dimethylacetamide1090 N,N-二甲氧基甲酰胺N,N-Dimethylformam

3、ide880 1，4二氧六环1,4-Dioxane380 2乙氧基乙醇2-Ethoxyethanol160 乙二醇Ethyleneglycol62 甲酰胺Formamide220 正己烷Hexane290 甲醇Methanol3000 2甲氧基乙醇2-Methoxyethanol50 甲基丁基酮Methylbutyl ketone50 甲基环己烷Methylcyclohexane1180,第二类溶剂（应该限制使用）,N-甲基吡咯烷酮N-Methylpyrrolidone4840 硝基甲烷Nitromethane50 吡啶Pyridine200 四氢噻砜Sulfolane160 四氢化萘Tetr

4、alin100 四氢呋喃Tetrahydrofuran720 甲苯Toluene890 1，1，2三氯乙烯1,1,2-Trichloroethene80 二甲苯Xylene2170 通常含有60间二甲苯，14对二甲苯，9邻二甲苯和17乙苯,第三类溶剂（GMP或其它质控要求限制使用）,溶剂名称英文名浓度限度（ppm) 乙酸Acetic acid5000 丙酮Acetone5000 甲氧基苯Anisole5000 正丁醇1-Butanol5000 仲丁醇2-Butanol5000 乙酸丁酯Butyl acetate5000 叔丁基甲基醚tert-Butylmethyl ether5000 异丙基苯

5、Cumene5000 二甲亚砜Dimethyl sulfoxide5000 乙醇Ethanol5000 乙酸乙酯Ethyl acetate5000 乙醚Ethyl ether5000 甲酸乙酯Ethyl formate5000,第三类溶剂（GMP或其它质控要求限制使用）,甲酸Formic acid5000 正庚烷Heptane5000 乙酸异丁酯Isobutyl acetate5000 乙酸异丙酯Isopropyl acetate5000 乙酸甲酯Methyl acetate5000 3甲基1丁醇3-Methyl-1-butanol5000 丁酮Methylethyl ketone5000 甲

6、基异丁基酮Methylidobutyl ketone5000 异丁醇2-Methyl-1-propanol5000 正戊烷Pentane5000 正戊醇1-Pentanol5000 正丙醇1-Propanol5000 异丙醇2-Propanol5000 乙酸丙酯Propyl acetate5000,第四类溶剂（尚无足够毒理学资料）,溶剂名称英文名 1，1二乙氧基丙烷1，1Diethoxypropane 1，1二甲氧基甲烷1,1-Dimethoxymethane 2，2二甲氧基丙烷2,2-Dimethoxypropane 异辛烷Isooctane 异丙醚Isopropyl ether 甲基异丙基

7、酮Methylisopropyl ketone 甲基四氢呋喃Methyltetrahydrofuran 石油醚Petroleum ether 三氯乙酸Trichloroacetic acid 三氟乙酸Trifluoroacetic acid,进样方法,本法照气相色谱法（附录V E）测定。较理想的色谱系统为毛细管色谱柱-顶空进样系统；也可以使用普通的填充柱，采用溶液直接进样法测定。,顶空进样系统,不污染仪器系统,色谱图干净,精密度好。 供试品溶液基质与对照品溶液基质不同会产生基质效应。 顶空瓶温度过高易产生热降解产物。 高沸点残留溶剂如甲酰胺、乙二醇等不宜用顶空进样方式测定。,溶液直接进样法,污

8、染仪器系统,色谱图中对残留溶剂测定易产生干扰,精密度较差。 不会产生基质效应。 不产生热降解产物。 高沸点残留溶剂可以用直接进样方式测定。,系统适用性试验,除另有规定外， （1）用待测物的色谱峰计算的理论板数毛细管色谱柱应不低于5000；填充柱应不低于1000。 （2）色谱图中，待测物色谱法与其相邻的色谱峰的分离度应大于1.5； （3）以内标法测定时，连续进样对照品溶液数次，所得待测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差(RSD)应不大于5；若以外标法测定，所得待测物峰面积的相对标准偏差(RSD)应不大于10。,供试品溶液的制备,（1）顶空进样系统 精密称取供试品适量；对水溶性药品，通常以水为溶剂

9、；当药品不溶于水，但可溶解于一定浓度的酸或碱液中时，可采用酸或碱液为溶剂；对于非水溶性药物，可采用N,N-二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基甲砜（DMSO）或其他适宜的溶剂为溶剂；选择的溶剂应不干扰待测溶剂的测定。根据药品中残留溶剂的残留量，稀释使其浓度满足系统定量测定的需要。 （2）溶液直接进样系统 精密称取供试品适量，用水或合适的溶剂使溶解；根据药品中残留溶剂的残留量，稀释使其浓度满足系统定量测定的需要。,采用与制备供试品溶液相同的方法和溶剂制备对照品溶液。 （1）限度实验：根据残留溶剂的限度确定对照品溶液的浓度。 （2）定量测定：为保证定量结果的准确性，应根据供试品中残留溶剂的残留量确定对照

10、品溶液的浓度；通常对照品溶液的色谱峰面积与供试品溶液中对应的残留溶剂的色谱峰面积不应相差2倍，且最大不应相差5倍。,对照品溶液的制备,色谱柱,1毛细管柱 （1）非极性色谱柱 固定液为100的二甲基聚硅氧烷的毛细管柱，如SPB-1、HP-1、DB-1、AT-1、BP-1等。 （2）极性色谱柱 固定液为聚乙二醇（PEG-20M）的毛细管柱，如HP-FFAP、HP-20M、DB-WAX、AT-WAX、BP-20、Supelco wax 10等。 （3）中极性色谱柱 如DB-624、HP-624、DB1301、DB-17、OV-17、DB-35、HP-35、HP-50+等。 2填充柱 以直径为0.25

11、-0.18mm的乙二烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为固定相。,测定法：第一法（毛细管柱顶空进样系统等温法）,色谱条件 柱温为40100；以氮气为载气，流速为1.0-2.0ml/min；顶空瓶温度为7085,顶空时间3060min；进样口温度为200；如采用FID检测器，温度为250。 测定法 取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。 在上述条件下诸常见的有机溶剂的保留值见表2：,表2 诸有机溶剂等温法测定的保留值,非极性色谱柱系统1极性色谱柱系统2 溶剂TR（min）相对TR溶剂TR(min)相对TR 柱温40 柱温60 甲醇2.2280.540 正戊烷2.3

12、170.562 乙醇2.5360.615 正己烷2.3970.581 乙腈2.6380.640 乙醚2.4310.589 丙酮2.7540.668 异丙醚2.4980.605 异丙醇2.8470.691叔丁基甲基醚2.5450.617 乙醚2.9980.727 环己烷2.6700.647 甲酸乙酯3.0350.736异辛烷2.7110.657 正戊烷3.0450.739正庚烷2.7750.673 乙酸甲酯3.2170.780甲基环己烷2.8330.687 二氯甲烷3.2360.785二甲氧基甲烷2.9340.711 硝基甲烷3.3760.819丙酮3.0960.750,表2 诸有机溶剂等温法测

13、定的保留值,正丙醇3.5840.869乙酸甲酯3.1520.764 叔丁基甲基醚3.884 0.942甲酸乙酯3.3880.821 丁酮4.1231.000甲醇3.7030.897 仲丁醇4.3911.065四氢呋喃3.7530.910 异丙醚4.6471.127甲基四氢呋喃3.7810.916 正己烷4.6601.130四氯化碳3.8480.933 乙酸乙酯 4.6621.131乙酸乙酯3.9120.948 氯仿4.7961.163乙酸异丙酯4.0150.973 四氢呋喃 5.0801.232丁酮4.1261.000 异丁醇5.0971.236异丙醇4.3271.049 甲基异丙基酮 5.9

14、20 1.4361，2二甲氧基甲烷4.3831.062 1，2-二甲氧基乙烷6.038 1.464二氯甲烷4.4291.073 乙酸异丙酯 6.2741.522乙醇4.4311.074 正丁醇6.3191.533氯仿4.4711.084 苯6.4321.560甲基异丙基酮 4.5151.094 甲基四氢呋喃 6.623 1.606苯4.7031.140 四氯化碳 6.6381.610乙酸丙酯5.1861.257 环己烷6.6591.615三氯乙烯5.5371.342,表2 诸有机溶剂等温法测定的保留值,异辛烷8.1411.975 甲基异丁基酮5.9811.450 三氯乙烯8.1991.989乙

15、酸异丁酯5.9891.452 乙酸丙酯8.7712.127乙腈6.0971.478 正庚烷8.7982.134 仲丁醇6.1361.487 甲基环己烷10.1482.461正丙醇6.5991.599 甲基异丁基酮10.2522.487甲苯6.8511.660 3-甲基-1-丁醇10.3762.517乙酸丁酯6.8821.668 甲苯13.3873.247 二氧六环7.6711.859 正戊醇13.6363.307 1，2-二氯乙烷7.7071.868 柱温70 异丙基苯12.2462.968 乙酸丁酯5.322吡啶13.7283.327 甲基丁基酮5.655柱温80 乙酸异丁酯6.536氯苯8

16、.141 氯苯8.104 正戊醇8.989 异丙基苯13.338异丁醇4.589 柱温90 正丁醇5.626 1，2-二氯乙烷2.550硝基甲烷6.250 二氧六环2.9303-甲基-1-丁醇7.295 吡啶3.280 柱温90 甲氧基苯6.590甲氧基苯10.320 柱温100 柱温100 四氢萘17.784 四氢萘16.106,第二法（毛细管柱顶空进样系统程序升温法）,色谱条件 如为非极性色谱系统，柱温先在30维持7min,再以8/min的速度升至120,维持15min；如为极性色谱系统，柱温先在60维持6min；再以8/min的速度升温速率升至100，维持20 min；以氮气为载气，流速

17、为2.0ml/min；顶空瓶温度7085,顶空时间3060min；进样口温度为200；如采用FID检测器，温度为250。 测定法 取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。 诸有机溶剂标准物质混合进样，其色谱图分别见图1和图2，各溶剂的保留值见表3和表4。,表3：诸有机溶剂在非极性色谱柱系统中程序升温法测定的保留值,顺序溶剂TR (min)相对TR顺序溶剂TR (min)相对TR 1甲醇3.9860.47025乙酸异丙酯 11.251 1.327 2乙醇4.7410.55926苯11.2511.327 3乙腈4.8660.57427正丁醇11.3221.336 4丙

18、酮4.9670.58628四氯化碳11.4241.348 5异丙醇5.2310.61729二氧六环11.4241.348 6乙醚5.5160.65130环己烷11.4241.348 7甲酸乙酯5.870.69231甲基四氢呋喃 11.424 1.348 8正戊烷6.1520.72632异辛烷12.5351.479 9二氯甲烷6.3150.74533三氯乙烯12.5351.479 10乙酸甲酯6.630.78234吡啶12.6061.487 11硝基甲烷6.8490.80835乙酸丙酯12.911.523,表3：诸有机溶剂在非极性色谱柱系统中程序升温法测定的保留值,12正丙醇7.430.8763

19、6正庚烷12.911.523 13叔丁基甲基醚 8.0080.94537甲基环己烷13.629 1.608 14丁酮8.4771.00038甲基异丁基酮 13.629 1.608 15仲丁醇8.9871.060393-甲基-1-丁醇 13.629 1.608 161,2-二氯乙烷 9.3971.10940乙酸丁酯14.667 1.730 17异丙醚9.9341.17241甲基丁基酮15.3181.807 18正己烷9.9341.17242甲苯15.7821.862 19氯仿9.9341.17243正戊醇15.7821.862 20乙酸乙酯9.9341.17244乙酸异丁酯16.7251.973

20、 21四氢呋喃10.051.18645氯苯16.7251.973 22异丁醇10.051.18646甲氧基苯18.3052.159 231,2-二甲氧基乙烷 10.383 1.22547异丙基苯18.711 2.207 24甲基异丙基酮 10.9071.28748四氢萘27.535 3.248,表4：诸有机溶剂在极性色谱柱系统中程序升温法测定的保留值,顺序溶剂TR (min)相对TR顺序溶剂TR (min)相对TR 1正戊烷2.3170.61125氯仿4.1581.088 2正己烷2.3970.63026甲基异丙基酮 4.158 1.100 3乙醚2.4320.64027苯4.3541.146

21、 4异丙醚2.4970.65728乙酸丙酯4.7691.262 5叔丁基甲基醚 2.5470.67029三氯乙烯5.171 1.356 6环己烷2.6700.70230甲基异丁基酮 5.501 1.3449 7异辛烷2.7040.65731乙酸异丁酯 5.501 1.459 8正庚烷2.7650.67332乙腈5.6151.480 9甲基环己烷 2.8350.74733仲丁醇5.7761.364 10二甲氧基甲烷 3.0980.71134正丙醇6.127 1.628 11丙酮3.1530.81635甲苯6.3951.696,表4：诸有机溶剂在极性色谱柱系统中程序升温法测定的保留值,12乙酸甲酯

22、3.1530.82436乙酸丁酯6.3951.898 13甲酸乙酯3.4520.824371,2-二氯乙烷 7.013 1.857 14甲醇3.4820.97638二氧六环7.0131.888 15四氢呋喃3.5460.90839异丁醇7.0132.102 16甲基四氢呋喃3.5460.91740正丁醇8.510 2.798 17四氯化碳3.6020.86641硝基甲烷9.3863.101 18乙酸乙酯3.6800.94942异丙基苯9.6422.319 19乙酸异丙酯3.6800.97243吡啶9.952 3.215 20丁酮3.7971.000443-甲基-1-丁醇 10.307 3.79

23、1 21异丙醇3.9801.05245氯苯10.6603.893 22 1，2-二甲氧基乙烷4.037 1.06446正戊醇11.251 4.404 23乙醇4.1581.08847甲氧基苯14.0165.536 24二氯甲烷4.1581.07348四氢萘22.5548.204,第三法（溶液直接进样法） 取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于23次，测定待测峰的峰面积。 计算法 （1）限度实验：以内标法测定时，计算单位重量样品中的色谱峰面积与内标峰面积之比；供试品溶液所得的峰面积比的平均值不得大于由对照品溶液所得的峰面积比的平均值。以外标法测定时，供试品溶液所得的单位重量中样品待测物峰的

24、平均面积不得大于由标准溶液所得的待测物峰的平均峰面积。 （2）定量测定：同高效液相色谱法项下规定。,【附注】,（1）由于相同的药品在不同的生产过程中可以使用不同的有机挥发性化合物，故含有的残留溶剂的种类可能不同，实际测定中应根据药品生产工艺的特点，首先确定检测的残留溶剂的种类。如试验前不能确定要检测的残留溶剂的种类，可按以下步骤通过实验判断药品中的残留溶剂种类，再测定其残留量。 药物中残留溶剂种类的确定步骤： A初步判断 采用程序升温法，在非极性和极性2种柱系统条件下，按推荐的程序升温条件测定；将测得的色谱峰的相对保留时间与表3或表4中的相对保留时间比较，初步判定可能存在的残留溶剂种类。 B确

25、定 根据初步判断结果，选择适当的等温色谱系统，在推荐的等温条件下测定；将测得的色谱峰的相对保留时间与表2中的相对保留时间比较，确定药物中残留溶剂的种类。 C验证 在上述等温色谱系统中，通过标准加入法，进一步验证确定的药物中残留溶剂种类的正确性。 D. 必要时，采用气相质谱联用或气相红外光谱联用技术进一步确证。,【附注】,（2）顶空条件的选择 A. 应根据供试品中残留溶剂的沸点选择顶空温度。对沸点较高的残留溶剂，通常选择较高的顶空温度；但此时应兼顾供试品的热分解特性，尽量避免供试品产生的挥发性热分解产物对测定的干扰。 B. 顶空时间一般为3060min，以保证供试品溶液的气-液两相有足够的时间达

26、到平衡。顶空时间通常不宜过长，如超过60min，可能引起顶空瓶的气密性变差,导致定量准确性的降低。 C. 对照品溶液与供试品溶液必须使用相同的顶空条件。,【附注】,(3)色谱分离条件的优化 如果药品中含有多种残留溶剂，在确定了残留溶剂的种类后，可根据柱温(T)与容量因子（）的关系及容量因子与分离度(R)的关系，对柱温进行优化，调节诸色谱峰的分离度，使最难分离物质对的分离度1.5。 （4）定量方法的验证 当采用顶空色谱系统测定时，供试品与对照品处于不完全相同的基质中，故应考虑气液平衡过程中的基质效应。由于标准加入法可以消除供试品溶液基质与对照品溶液基质不同所致的基质效应的影响，故通常采用标准加入法验证定量方法的准确性。当标准加入法与其它定量方法的结果不一致时，应以标准加入法的结果为准。,【附注】,（5）药物中有