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文档简介

1、实验四 微生物显微镜下 的直接计数,一 血球计数板测定微生物细胞的数量,1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 4 实验方法步骤 5 实验报告,1 实验目的,掌握血球计数板测定微生物细胞数量的原理。 学习用血球计数板测定微生物细胞数量的方法。,2 实验原理,利用血球计数板在显微镜下直接计数，是将菌悬液放入血球计数板与盖玻片之间的计数室中，然后在显微镜下计数，因为计数室容积一定，所以可根据测定值推算出菌悬液单位体积所含微生物的总数量。,血球计数板的结构,它是特制的厚载玻片，中央区域有四条凹槽而形成三个平台，中间平台较宽，它又被一短横槽分隔为两部分，每一部分均有一个方格网，每一方格网可分为九个大

2、方格，中央大方格就是计数室。大方格分为16个中方格，每个中方格又可分为25个小方格。每个大方格共含有400个小方格。计数室大方格边长为1mm，底面积为1mm2，高0.1mm,所以每个计数室固定容积为0.1mm3。,计数方法,在计数时，用含16个中方格的计数板，要按对角线方位计数左上、左下、右上、右下等四个中方格（100个小方格）所含有的菌数；由此可计算得出每个小方格所含有的菌数的平均值， 计数室每个小方格容积为： 0.110-34001410-6 (ml) 每ml含的小方格数1/（ 1410-6）= 4106 = K 计算公式：每ml菌液含菌数 = N K d (N：每个小方格含菌数平均值；

3、d：菌液稀释倍数； K=4106),3 实验材料,稀释100倍的酵母菌菌悬液,即 d=100,实验步骤,1 镜检计数室：对计数室进行镜检，若内有污物，清洗后才能计数。 2 加样液：先在血球计数板两个计数室部位加盖玻片，再用无菌玻棒或滴管沾取待测菌悬液稀释液（已摇匀），从盖玻片边缘滴加，使菌液沿缝隙靠毛细作用自行进入计数室内。静置5min。 3 显微镜计数：将血球计数板置于载物台上，先用低倍镜观察，后换高倍镜观察计数。位于格线上菌体只计上边线和左边线上的，如果出芽酵母芽体大小达到母细胞一半时，可计作两个菌体。选择五个视野，在每个视野内任意选择五个小方格计数，求出每个小方格菌体数量平均值。 4 根据公式计算每ml菌液含菌数。 5 测量完毕后，取下盖玻片用水冲

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