SOP-高效液相色谱仪操作标准

1、 高效液相色谱仪标准操作规程一、目 的：制定高效液相色谱仪标准操作规程，以规范其操作。二、范 围：中心化验室使用的高效液相色谱仪。三、责任人：qc主管、qc人员对实施本sop负责。四、内 容1. 定义1.1高效液相色谱法是将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂，缓冲液为流动相，用高压泵将流动相压入装有填充剂的色谱柱，注入供试品，经流动相带入柱内，在填充剂上分离后，各组份先后进入检测器，进行数据处理，得到测定结果。1.2除另有规定外，都应按现行版中国药典附录“高效液相色谱”的要求测定。2.组成 ：hp1200高效液相色谱仪主要由四元泵、标准型自动进样器、柱温箱、 vwd检测器等组成。（详见

2、图一） 详见图一1 流动相a b c d 2 真空脱气装置 3、6、9、11 电缆4 输液泵 5 自动进样器（无） 7 柱温箱 8 检测器（dad） 10 数据接收处理控制系统（计算机） 12 打印机3. 操作步骤3.1准备工作：将配制好的对照品溶液、样品溶液放入进样器中；将流动相试剂放置在真空脱气装置。3.2开机3.2.1打开计算机，进入windowsxp画面。3.2.2打开各部分电源，脱气装置、输液泵、柱温控制、检测器的指示灯变黄。3.3工作站操作3.3.1打开工作站：在电脑桌面上，双击“仪器1联机”图标，或点击屏幕左下角的“开始”，选择“程序”，选择“agilent chemstatio

3、n”,选择“仪器1联机”，化学工作站自动与lc通讯，进入的工作站画面。此时，各单元指示灯变绿，在工具条的view中选择界面为runcontrol。3.3.2调用方法：在第一个小窗口中利用下拉菜单，选择显示界面为method and run control（方法和运行控制）；在第二个小窗口中选择已设定的使用方法（若是旧用户则有记录），新用户先编辑实验方法，然后选工具栏中methodsave method as。3.3.3溶剂的设置：在输液泵图标上按鼠标左键，在出现的小菜单中选setup pump，在solvents栏中输入a、b、c、d溶剂名称；点溶剂瓶图标，在solvent bottles f

4、illing中输入a、b、c、d各溶剂的实际体积数。点ok确定并退出。3.3.4设置泵的参数：点输液泵图标，选setup pump，出现流速控制界面。设定流速flow rate（一般ods柱为1ml/min）；设定a、b、c、d各溶剂比例，其中b、c、d可设置。ok。点输液泵图标，选pump control，点on打开泵，ok，泵即开始工作，图标亦变为绿色。泵压一般不要超过150bar。若要设置各种淋洗变换程序如梯度洗脱，点输液泵图标，在此界面下面的空栏中，用append添加一栏，依次输入时间、浓度、流速。可用cut删去某一行或多行。设定好后，点ok退出本界面。其压力及时间程序过程在图标上的指

5、示框里显示。3.3.5设定柱温：在柱子图标上按鼠标左键，选setup column thermostat设置柱温，可在室温以下10度至80度稳定控制，精度达到0.1度。设定后点ok退出，再点此图标，选control打开恒温器。但若设定温度后直接点ok，则出现一英文对话框，询问是否打开温控，按yes钮即可。一般温度设置在3050度之间。若不需控温，则在setup column thermostat窗口中选not control。3.3.6检测器参数设定注意：为了延长氘灯和钨灯的使用寿命，在开始分析前进行预平衡时（每次分析前最好用待用流动相平衡20个柱体积以上）或所有分析完成后淋洗色谱柱时，不需打

6、开检测器，仅在分析样品前10分钟左右打开即可。因此，在检测器的control窗口中，一定不要选at power on ,turnuv/vis tamp on。在检测器图标中按鼠标左键，选setup dad signals，出现检测器参数设定窗口，在此设定存储及检测信号：每一谱图可选5个通道（a、b、c、d、e）检测。若需某个波长的信号，则在任一通道的小方框中打上x，然后设定检测波长及参比波长。其它参数如波长范围、时间、灯开关等，基本都不用变化，若需变化请与工作人员联系。完成后点ok退出。3.3.7积分仪的设定：在此项中可以设定各积分参数，选择积分开始及关闭的时间，峰宽（peak width），

7、最小面积（area reject），最小高度（height reject）等，可以象在word的表格里一样，插入、删除一行，选择不同时间开始不同值等，完成后按out图标并选择存盘。3.3.8进行定量分析时，选calibration项设置.3.3.9报告格式窗口（specify report）：定义计算的参数显示方式（默认为screen），其中信号设置（signal set up）部分要检查修改，一般在range中选autoscale，但多个样品要互相比较时，建议第二个样品时改为use range（这些处理可在data analysis中进行，即在完成分析后处理数据时进行）。完成后ok退出。 全

8、部设定完成后，在工具栏下method/save method as，将本方法存入指定位置，其中路径选择方法：c：hpchemhp1methods专业名（analytical、inorganic、organic、physical、polymer）文件名.序号。文件名为操作者姓名缩写（不要超过八个字符）。至此完成方法编辑。3.3.10输入样品信息：在工具条上选runcontrolsample info，输入操作者姓名及样品的有关信息。其中：data file一栏为数据文件的保存路径和文件名，要求在subdirectory中输入自己的专业（统一为analytical、inorganic、organi

9、c、physical、polymer）；文件名输入方式选prefix/counter，在prefix中输入操作人姓名缩写，在counter中输入自己文件的顺序号。顺序号会自动累加，连续测样时，只要输入第一个样品的顺序号即可。注意path：c：hpchem1data不须更改。在sample parameters一栏中只要输入sample name，其它不要改。在comment中输入流动相组分、比例等信息。输入完毕后，点ok退出。 3.3.10进样：选择合适的进样方式，设置进样体积与洗瓶位置。“标准进样”只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“洗针进样”可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式从样品瓶抽完

10、样品后，会在洗瓶中洗针。“使用进样器程序”可以点击“编辑”按钮进行进样程序编辑。以上设置完毕后，点击“确定”，进入下一画面。3.3.11数据处理在第一个下拉菜单窗口，选择data analysis，点load signal图标，选择并打开文件。graphics signal options，可以根据需要选择作图选项；integrationintegration events，可以设定积分条件，点保存图标后，仪器将自动根据积分条件显示出最新积分结果；spectraselect peak apex spectra，然后用光标点一下色谱图上某个峰，即显示该峰光谱图。spectraselect spe

11、ctrum，显示任一点处的光谱图reportprint report，在屏幕上显示报告预览，若合适，点print即打印。在不开仪器主机情况下，可进入start/program/hp chemstation/instrument 1 offline进行数据的处理，其窗口与图标，非常形象，可根据需要选择进行分析后打印。五关机分析测试完成后，对于ods柱，应用100%色谱纯甲醇清洗柱子20分钟（1ml/min）；将进样注射器洗净并放好。将显示屏上各色谱单元的图标（泵、柱温箱、检测器等）关闭，关闭各程序窗口后关闭计算机，然后再关闭仪器各色谱单元的电源开关。通知实验室人员检查后，登记、交费。废液及溶剂瓶

12、中剩余溶剂请自己带走。保护环境，请勿乱倒废液！第三个小窗口中显示lc操作条件。3.3点击“泵”图标，点击“设置泵”选项，进入泵编辑画面。3.8设流速：3-5ml/min，点击“确定”。3.9点击“泵”图标，点击“控制”选项，选中“启动”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止（一般每个通道排气泡5分钟为宜）。3.10点击“泵”图标，点击“控制”选项，选中“关闭”，点击“确定”，关泵，手动旋紧冲洗阀。3.11点击“泵”图标，点击“设置泵”选项，设流速：1.0ml/min。3.12点击泵下面的瓶图标，选择“溶剂瓶添冲量”

13、图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积，点击“确定”。4.数据采集方法编辑:4.1开始编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，选中除“数据分析”外的三项，点击“确定”，进入下一个画面。4.2方法信息：在“方法注释”中加入方法的信息。点击“确定”，进入下一画面。4.3泵参数设定：在“流速”处输入流量，停止时间。在“溶剂b”处输入溶剂百分比（a=100-b-c-d）,也可“插入”一行“时间表”，编辑梯度。在“压力限”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。以上设置完毕后，点击“确定”，进入下一画面。4.4自动进样器参数设定：选择合适的进样方式，设置进样体积与洗瓶位置。“标准

14、进样”只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“洗针进样”可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“使用进样器程序”可以点击“编辑”按钮进行进样程序编辑。以上设置完毕后，点击“确定”，进入下一画面。4.5柱温箱参数设定:在“温度”下面的空白方框内输入所需温度，并选中它，点击“更多信息”键，选中“与左侧相同”，使柱温箱的温度左右一致，以上设置完毕后，点击“确定”，进入下一画面。4.6检测器参数设定4.6.1在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长，在“峰宽（响应时间）”下方点击下拉式箭头，选择合适的响应时间。4.6.2在“时间表”中可以“插入”一行，输入随时间切换的波长

15、，点击“确定”，进入下一个画面。4.6.3在“运行时选项表”中，选中“数据采集”，点击“确定”。4.6.4从“方法”菜单，选中“方法另存为”，输入一方法名，点击“确定”。4.6.5从菜单“视图”中选中“在线信号”，选中“信号窗口1”，然后点击“改变”，将所要绘图的信号移到右边的框中，点击“确定”。4.6.6从“运行控制”菜单中，选择“样品信息”选项，输入相关信息，在“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”，点击“确定”。4.6.7从“仪器”菜单选择“启动系统”。等仪器准备号，基线平稳，从“运行控制”菜单中选择“运行方法”，进样。5.数据分析方法编辑5.1从“视图”菜单中，点击“数据分析”进

16、入数据分析画面。5.2从“文件”菜单选择“调用信号”，选中你的数据文件名，点击“确定”，则数据被调出。5.3图谱优化:从“图形”菜单中选择“信号选项”，从“范围”中选择“满量程”或“自动量程”及合适的时间范围或选择“自定义量程”调整。反复进行，直到图的比例合适为止。点击“确定”。5.4积分：从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，选择合适的“斜率灵敏度”，“峰宽”，“最小峰面积”，“最小峰高”。从“积分”菜单中选择“积分”选项，则数据被积分。如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。点击左边“”图标，将积分参数存入方法。5.5打印报告：从“报告”菜单中选择“设定报告”选项，进入下个画面。点击“定量结果”框中“计算”右侧的黑三角，选中“面积百分比”，其他选项不变，点击“确定”。从“报告”菜单中选择“打印报告”，则报告结果将打印到屏幕上，如果想输出到打印机上，则点击“报告”底部的“打印