特定蛋白的免疫测定及临床意义ppt课件

1、1、特定蛋白的免疫检测和临床意义，卫生部临床检测中心李金明，2、特定蛋白的免疫检测方法，基本原理：免疫沉淀反应免疫透过率浊免疫散射比浊，3、免疫沉淀反应的发展历史，1897年，Kraus将细菌培养液和相应的抗血清混合后，出现肉眼可见的沉淀反应，1902年1905年Bechhold在动物胶中掺入抗体，加入相应的特异抗原，抗原抗体的特异结合在动物胶中沉淀。 1946年Oudin报道了试管的单向式免疫扩散试验。 1965年Mancini提出了平板单向免疫扩散试验。 Grabar和Williams于1953年报道了免疫阳离子电泳。 (对流免疫阳离子电泳、火箭免疫阳离子电泳和免疫固定阳离子电泳)上述为经

2、典免疫沉淀试验的发展阶段，测定范围窄(10 100 g/ml )，灵敏度低，麻烦费时，不能自动化。4、免疫沉淀反应的发展历史，1959年，Schultze等人报道了渗透混浊法(Transmission turbidimetry )。 1967年，Ritchie等人报道了散射比浊法(nephelometry )。 1977年，Sternberg等人进一步发展确立了速度散射比浊法(ratenephemonitry )。 免疫比浊测定方法与免疫沉淀方法相比，灵敏度高、重现性好、测定范围广、用于临床体液特定蛋白含量的测定，目前许多自动检测器已应用于临床检查，特别是免疫散射比浊测定。 免疫透过率混浊，基

3、本原理：一定波长的光线通过抗原抗体反应混合液，会被其中的免疫复合体(IC )反射、阻断、吸收而变弱。 在一定范围内，透射光的吸收量与免疫复合物的量成正比，后者与对应的抗原和抗体的量成函数关系。 抗体的量是一定的，从定标曲线可以知道抗原的量。 由于抗原抗体复合物的数量要求为一盏茶，粒子要求一盏茶大(35100nm )，因此本法的测定灵敏度和精度比较低。6、免疫散射比浊、基本原理：光通过检测溶液时，其中所含的抗原抗体复合体发生部分折射，产生散射光。 根据瑞利散射式，在一定条件下透射光与微粒子浓度成正比，散射光与微粒子浓度成反比。 散射比浊分为终点和速度散射比浊两种。 光源荧光：高压水银灯发射，入射

4、光波长() 355nm，散射角度()为9.0激光：氦原子霓虹灯，=663nm，=1535碘元素钨丝灯，=400500nm，=70，7，影响免疫比浊测定的要因，抗原，抗体比率和浊度关系：抗原过剩，乐队现象 由于抗体过剩，IC形成在抗原量增加到抗原抗体的最佳比例时会达到顶峰。 抗体必须过量，但必须适量，抗体浓度是测定的关键。 影响免疫比浊测定的因素，抗体质量：专一性、效价、亲和力、r型抗体高亲和力抗体的抗原结合点和抗原抗原表位空间定位非常适合，两者结合牢固，不易解离。 相反，由低亲和性抗体和抗原组成的复合体容易解离。 r型抗体以家兔免疫血清为代表，抗原抗体适宜比例范围广，抗原过量时，容易出现可溶性

5、免疫复合物，大多数动物免疫血就是这种类型。 h型抗体以马免疫血清为代表，抗原和抗体的适宜比例范围狭窄，抗原和抗体过多，可形成可溶性免疫复合物。 人和许多动物的抗血清都是h型。 影响免疫比浊测定的因素有： pH6.58.5、适当浓度的电解质(中和抗原抗体复合体表面电荷，促进凝聚)、离子力(大、IC形成快)。 一般来说磷酸盐缓冲液是常用的。 增浊剂：聚乙烯管二醇(PEG )、吐温-20等非离子亲水剂以PEG6000为最佳，浓度一般为3%4%。 浓度过高会引起非特异性沉淀。、1.0、特定蛋白测定质量控制、室内质量管理室间素质测评、1.1、特定蛋白测定临床意义、血液中包含多种功能蛋白，如运载体蛋白、免

6、疫球蛋白(抗体)、酶催化剂、凝血因子等，其含量变化与多种疾病密切相关。 c反应蛋白(CRP )、免疫球蛋白和亚类、补体C3和C4、抗链球溶血素O (ASO )、类风湿因子(RF )、白蛋白蛋白(Albumin )、白蛋白(Albumin )、微白蛋白(2微球蛋白)、1抗胰蛋白青铜蛋白(Caeruloplasmin )、结合珠蛋白(Haptoglobin )、转铁蛋白(Transferrin )、脂蛋白A (APO-A1)、脂蛋白B (APO-B )等。1.2、c反应蛋白(CRP )是由肝细胞合成的急性时相反应蛋白，是炎症和组织坏死病急性期出现在患者血清中的糖蛋白，由于与肺炎奈瑟氏菌的荚膜成分c

7、粗多糖蛋白发生反应，所以被称为c反应蛋白。 活化补体，有促进粒细胞和宏命令噬菌体吞噬的作用。 正常值为800-8000g/L。 CRP是急性时相反应极其敏锐的指标，血浆中CRP浓度在急性心肌梗死、创伤、感染、炎症、外科手术、肿瘤浸润时显着升高，可达到正常水平的2000倍。 结合临床病史，有助于随访经过。 特别是在炎症过程中，CRP可作为风湿病、系统性红斑狼疮、白血病等随访指标。 细菌与细小病毒感染的鉴别、细菌感染急性期一般较高，细小病毒感染多数没有变化。 国外有研究表明，CRP是引起心脏病的最强危险因素，其危险度是血液中过剩胆固醇的2倍。 CRP含量高的人高血压的危险率是胆固醇高的人的1倍。

8、炎症和过高的胆固醇在云同步出现，心脏病和脑血管意外的危险性是普通人的9倍。 由此可见，CRP含量高与心脏病呈正相关。 并且，最近的研究表明，血药高浓度的CRP是大肠癌发病的危险因素，CRP可能是大肠癌的早期标志物。1.3、免疫球蛋白和亚类浓度随年龄而异，在某种疾病中，这些个指标浓度升高或降低，有诊断疾病的价值。 IgG :正常情况下，脐血7.617gL，新生儿7.014.8gL，0.56月310.0gL，6月2岁512gL，2.6岁513gL，612岁716.5gL，1216岁715.5gL，成人616gL。 慢性肝病、亚急性或慢性感染、结缔组织疾病、骨髓瘤、无症状单克隆病等，增加的遗传性或获

9、得性抗体缺乏症、混合性免疫缺乏综合征、选择性缺乏症、蛋白丧失性肠病、肾病综合征、强直性肌营养不良、免疫抑制剂治疗等下降。1.4、免疫球蛋白及亚类，IgA :正常情况下，脐血050mgL、新生儿022mgL、0.56月3820mgL、7月2岁1405250mgl、2.6岁2301900mgL、612岁2902700mgL、1216岁8102320mgL、成人慢性肝病、亚急性或慢性感染性疾病(结核、真菌感染等)、自身免疫性疾病(如类风湿性关节炎)、囊性纤维化、家族性中性白血球减少症、乳腺癌、肾病、骨髓瘤等时增加的遗传性或获得性抗体缺乏症、免疫缺乏病、选择性缺乏症、球蛋白血症、蛋白丧失性肠病、烧伤等

10、。 在抗抗体现象、免疫抑制剂治疗、宫内孕后期等降低。 1.5、免疫球蛋白及亚类，IgM :正常情况下，脐血40240mgL，新生儿50300mgL，0.56月1501090mgL，6月2岁4302390mgL，2.6岁5001990mgL，612岁5002600mgL，1216岁4502400mgL 因胎儿宫内感染、新生儿疾病、慢性或亚急性感染、疟疾、传染性单核细胞病、支原体肺炎、肝病、结缔组织疾病、巨球蛋白血症、无症状性单爱沙尼亚克朗病等增加。遗传性或获得性抗体缺乏症、混合性免疫缺乏综合征、选择性缺乏症、蛋白丢失性肠病、烧伤、抗抗体综合征(混合性冷球蛋白血症)、免疫抑制剂治疗等下降。1.6、

11、IgG和IgA亚类，IgG有4种亚类，IgA有2种亚类。 每个亚类都有不同的功能，其含量过低或过高，缺陷会导致相应的免疫功能下降，导致相应疾病的发生。 小盆友常见的反复呼吸机感染、拉肚子、发育迟缓等症状和多种常见呼吸道疾病，如中耳炎、鼻旁窦炎、肺炎、支气管炎、慢性阻塞性肺病、支气管扩张与哮喘等，与IgG和IggA类缺陷有关。1.7、补体C3和C4，正常情况下C3(1C-球蛋白) 8001550mgL、C4(1E-球蛋白) 130370mgL，血液补体的含量和活性度在很多病理情况下有变化。 因此，必须在临床上动态观察补体水平的变化。 补体含量的降低不一定代表免疫功能故障和免疫缺陷。 缺血、凝固性

12、坏死和中毒性坏死时，组织释放出大量蛋白分解酶催化剂，导致补体溶血活性度和补体成分降低。 血补体浓度升高：见于各种炎症性疾病和梗阻性黄疸、急性心肌梗死、溃疡性结肠炎、糖尿病、急性痛风、急性和急性甲状腺炎、急性风湿热、皮肌炎、多发性肌炎、混合性结缔组织病、结节性动脉周围炎等。1.8、抗链球菌溶血素O (ASO )、a群溶血性链球菌代谢产物刺激机体产生的抗体。 ASO升高见于a组溶血性链球菌感染和感染后的免疫应答所引起的疾病，如感染性心内膜炎、扁桃体炎、风湿热、链球菌感染后的急性血管球肾炎。 ASO在溶血性链球菌感染后1周开始上升，在4.6周达到顶峰，由于持续了几个月，ASO上升提示存在溶血性链球菌

13、感染，但并不一定是最近感染的。 链球菌感染后ASO动态升高，CRP升高与血沈阳性结合，有助于风湿热的诊断。 多发胆固醇高血症、巨球蛋白血症、骨髓瘤的患者，ASO也会上升。 1.9、类风湿因子(RF )、RF是以改性IgG为靶抗原的自身抗体，RF可分为IgM、IgG、IgA、IgE种。 类风湿性关节炎(RA )患者阳性率7080，其中病变特别广泛，病情严重，病程长，有活动期和关节外病变者阳性率高，滴度高，长期存在。 除类风湿性关节炎外，在健康人及其他疾病，如健康人尤其是老年人中也常见，阳性率占乙肝、结核病、亚急性细菌性心内膜炎、慢性支气管炎等感染性疾病结缔组织病，如红斑狼疮、干燥综合征、皮肌炎、

14、血管炎、硬皮病、免疫策略后及某些恶性疾病。 在这些个疾病中，阳性率可以达到。 因此，在RA的诊断中，认为RF只是参考价值，没有特异性的诊断价值。2.0、前白蛋白(Prealbumin )是肝内合成的糖蛋白，因其血半寿命极短，可用于营养不良的诊断、检查及肝病的诊断。 早期肝功能操作的指示，比ALT特异，比白蛋白敏感。 正常标准值范围：成年男女为250-400mg/L儿童125-200mg/L PA为负急性时相蛋白。 在炎症和恶病质(罹患癌症等)，CRP和酸性糖蛋白上升，PA就会急速下降。 如果前白蛋白继续维持低水平或进一步降低，则表示预后不良。 肠道和肾脏的消耗性病变时，血清PA浓度也随之降低。

15、 何杰金氏和青春发育期的少年血清PA浓度的上升显着。2.1、白蛋白(Albumin )、正常值： 35-55g/L高：脱水和血液浓缩。 白蛋白合成障碍：营养不良、肝脏疾病、慢性消化道疾病。 白蛋白消耗和丢失过多：消耗性疾病、恶病质、肾病综合征、急性大出血、重度烧伤、腹水形成等。 其他：宫内孕晚期，无遗传性白蛋白血症。、2.2、2微计程仪球蛋白、2微计程仪球蛋白是体内有核细胞球所产生的小分子球蛋白。 健康人血液中的2微计程仪球蛋白浓度较低。 血液中上升：血管球过滤功能下降。 炎症和肿瘤。 尿中上升：肾小管受损，2 -微计程仪球蛋白2 -微计程仪球蛋白重吸收减少，尿中2 -微计程仪球蛋白排出增加，

16、在测量时上升。2.3、1抗胰蛋白酶(1AT )、1抗胰蛋白酶是特异性抑制丝氨酸蛋白水解作用酶催化剂的蛋白酶抑制物。 血液中正常值： 23g/L。 缺陷通常有遗传原因。 浓度低于正常水平的30-40%时，有关肝脏和肺部疾病的临床表现(肝硬化、支气管扩张、胰脏纤维化)可以变得明确。 小盆友通常受肝病的影响，成人多为肺部疾病。 血中1AT减少，如DIC、甲状腺机能亢进、十二指肠溃疡等。 上升多由感染和炎症的急性期反应引起。 这种情况下，1抗胰蛋白酶浓度上升到正常情况下的3倍。 宫内孕和口服避孕药后，1-抗胰蛋白酶也上升。2.4、青铜蛋白(Caeruloplasmin，CER )为双糖蛋白，是铁元素氧

17、化还原酶，又称铁元素氧化酶催化剂，由肝脏合成，含6.8铜原子呈蓝色，曾用名是青铜蛋白。 上升者有服用宫内孕、雌性激素和甲状腺激素者、坏死、感染(最近感染的指标)。 如罹患癌症、矽肺等。 CER是尘肺最敏感的早期诊断指标，比肺部x线摄影图片变化快。 下降者有肾病综合征、低蛋白血症(营养不良、胃肠患者)、急性肝炎、重症肝损伤、多发性硬化等。 Wilson病(肝窦状核变性为遗传性病变) CRE明显减少。2.5、转铁蛋白(Transferrin，Tf )和Tf是可结合三价铁元素糖蛋白。 是血浆中的主要铁元素蛋白，代表着生物铁元素的储量。 负责输送消化道吸收的铁元素和从血红细胞释放的铁元素。 正常值：成人2.20-4.0g/L新生儿1.30-2.75g/L下降见于以下疾病：急性肝炎后)肝病(重型肝炎肝硬化慢性肝慢性迁肝急性肝)、肾病综合征、蛋白丧失症、甲状腺疾病。 高度为：宫内孕，铁缺乏性贫血，见于急性肝早期。2.6、珠蛋白(Haptoglobin )、珠蛋白的结合也被称为珠蛋白，主要由肝脏合成。 降低：血管内溶血时，结合珠蛋白与血红细胞溶解释放出的血色素结合，结合珠蛋白/血色素复合物即刻从血中去除，导致结合珠蛋白浓度降低，严重溶血消耗光结合珠蛋白，各种溶血时血清结合珠蛋白降低，血管内溶血时最显着，无法测定。 儿童结合珠蛋白血清