第二章 药物分析基础知识.ppt

1、Pharmaceutical Analysis,药物分析,广西大学生命科学与技术学院 卢洁,第二章 药物分析基础知识,第一节、 药品检验的基本程序 第二节、 常用物理常数测定法 第三节、 药物含量测定方法 第四节、 分析方法验证的效能指标 第五节、 误差与数据处理,小结,一般程序,取样,鉴别,含量测定,检查,提取,化学原料药检验程序,化学药物制剂检验程序,第一节 药品检验的基本程序,一、取样 二、检验（包括性状、鉴别、检查、含量测定） 三、出报告 国家食品药品监督管理局发布药品检验所实验室质量管理规范（试行）2001年1月1日实施。规定了人员要求；检品收检、检验、留样制度；检验记录与核验报告书

2、的书写规则。,一、取样（Sample）,要考虑取样的科学性、真实性与代表性 基本原则 均匀、合理 特殊装置 如固体原料药用取样探子取样 取样量 设样品总件数为x：,我国对进口药品抽样检验规定,相同批号药品，依其运输包装数量，确定抽样件数。,1.抽样数量,除特殊规定与要求外，一般为检验用量的3倍，贵重药品为2倍量。1公斤以下的药品包装应原装抽样。检验后剩余样品除留样备查外，退回报验单位。,2.抽样方法,1）抽样启封前，应核对外包装号或合同编号。启封后应核对小包装品名、厂名和批号等。 2）原料药包装开启后，于不同部位分别取样，使总量达到抽样数量，直接倾入样品瓶内、混匀。 3）抽样后，在包装内放入抽

3、样标记，将开启之包装封固，并在包装上注明抽样数量及日期。,3.抽样注意事项,1）抽样环境清洁卫生，抽样工具必须清洁干燥 2）抽样应迅速，以防止药品吸潮、风化、氧化而变质。 3）液体样品需先摇匀后再取样；含有结晶者，在不影响品质的情况下，应使之溶化后抽取。 4）有毒性、腐蚀性及爆炸性药品，在抽样时需戴用防护手套及衣服，小心搬运、取样。且在样品瓶外标以“危险品”标志，以避免发生危险。 5）爆炸性药品应勿震动近热。 6）腐蚀性药品避免用金属制的抽样工具取样。 7）遇光易变质药品，应避光取样，样品用有色瓶装，必要时应加套黑纸。 8）需作无菌、热原试验、卫生学检查或需抽真空、充氮气的原料药，应将原包装运

4、送药检所，按无菌操作或特殊要求取样。,二、检验,包括性状、鉴别、检查、含量测定 鉴别用来判定药物的真伪. 检查和含量测定可判定药物的优劣,1.性状,性状项下记述药品的外观、臭、味和一般的稳定性情况，溶解度以及物理常数等 1. 外观、臭、味和稳定性 2. 溶解度；粘稠度 3. 物理常数包括相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、吸收系数、碘值、皂化值和酸值等；测定结果不仅对药品具有鉴别意义，也反映药品的纯度，是评价药品质量的主要指标之一。构成法定药品质量标准。,例：苯甲酸 性状 本品为白色有丝光的鳞片或针状结晶或结晶性粉末；质轻；无臭或微臭；在热空气中微有挥发性；水溶液显酸性反应。 本

5、品在乙醇、氯仿或乙醚中易溶，在沸水中溶解，在水中微溶。 熔点 本品的熔点（附录 C）为121124.5。,2.鉴别,药物的鉴别是利用其分子结构所表现的特殊化学行为或光谱、色谱特征，来判断药品的真伪。当进行药物分析时，首先应对供试品进行鉴别，必须在鉴别无误后，再进行检查、含量测定等分析，否则是没有意义的。 鉴别方法必须准确、灵敏、简便、快速，能准确无误地做出结论。,例：苯甲酸 鉴别 （1）取本品约0.2g，加4%氢氧化钠溶液15ml，振摇，滤过，滤液中加三氯化铁试液2滴，即生成赭色沉淀。 （2）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集233图)一致。,（2）在维生素C的分子中具有烯二醇的结构，

6、这个结构具有很强的还原性,可以和一些氧化剂作用.,（3）红外光谱与对照图谱一致.,例1.维生素C的鉴别,3.检查,包括有效性、均一性、纯度要求及安全性四个方面。 药物在不影响疗效及人体健康的原则下,可以允许生产过程和贮藏期间引入的微量杂质的存在. 检查是判断药品纯度是否符合限量规定的要求。即药物的杂质检查，亦称限度检查、纯度检查。,例：药典中规定阿斯匹林中： 游离水杨酸不得超过0.1%,4.含量测定,药物在通过鉴别无误、检查合格的基础上，进行有效成分含量测定。 判断药物的质量是否符合要求，必须全面考虑鉴别、检查与含量测定三者的检验结果应符合规定，否则该药品为不合格品。,5.检验原始记录,上述检

7、验及其结果必须有完整的原始记录，实验数据必须真实，不得涂改。 药品检验记录必须真实、完整、科学检验记录包括：供试品名称、批号、数量、来源（送检或抽检单位）、取样方法、包装情况、外观性状、检验目的、检验依据、收到日期、报告日期等逐一写清楚。 在检验过程中应将观察到的现象、 操作步骤、检验数据、结果、结论、处理意见等完整书写，不得涂改。如果记录写错，应将错处划出（用钢笔划），并在其旁边改正。 记录本应妥善保存规定时间（至少3年），以供备查。,张三,2,张三,05,张三,3,6.涂改方式,划两条细线，在右上角写正确数字，并签名,检验记录(省略上半页),检查溶液颜色 = 0.02,符合规定,炽灼残渣

8、6# 16.5572g + 样1.0124g 700放置4517.5693g,符合规定,鉴别 样0.2g + 1滴NaoH T.S.黑色,符合规定,性状 白色粉末,符合规定,含量测定,碘液0.1026mol/L,符合规定,0.00 22.95ml,三、检验报告,全部检验完毕后，应写出检验报告，并根据检验结果作出明确的结论。 检验报告应完整、无破损缺页，字迹清楚，文字简洁，意思全面。报告内容包括：所有记录内容及检验结果和结论。 对于不符合规定的药品，除以上涉及的内容外，还应提出处理意见，供有关部门参考。 最后，检验记录、报告应由检验人员、复核人员及有关负责人签名或盖章，及检验单位盖章。,1.检验

9、报告内容,a 供试品的名称、批号、规格、数量、 来源；取样方法、取样日期；外观 性状、包装情况. b 检验目的、项目、方法与依据；检验数据. c 结论及处理意见； d 检验者签名盖章、复核者签名盖章.,品名 包装规格 批号 厂牌来源 数量 取样日期 取样数量 报告日期 检验依据 检验记录 结论 复核人 检验人,2.检验结论,判断一个药物的质量是否合格要以药品的鉴别、检查、含量测定等各项的检查结果综合评价。,全面检验均符合质量标准,如：本品为维生素C；符合中国药典（2000年版）的规定。,检验后有个别项目不符合规定,如：本品为葡萄糖；检查“乙醇溶液的澄清度”不符合规定，其他各项检验均符合中国药典

10、（2000年版）葡萄糖项下的规定。建议可改作口服用葡萄糖，不得供制备注射剂用。,全面检验后不合药用者，或虽未全面检验、但主要项目不合规定,可作不得供药用处理 如： 本品为葡萄糖注射液，其热原检查不符合中国药典（2000年版）葡萄糖注射液的规定，不得供药用。,可根据送检者要求仅作个别项目检验,如：本品（维生素B12注射液）的pH值为5.5，pH值符合中国药典（2000年版）维生素B12注射液的相关规定pH值（应为4.06.0）。,检验报告书(省略上半页),例,溶液颜色 0.07 =0.02 符合规定,负责人 王五 复核人 李四 检验人 张三,结论 本品经检验符合（中国药典2005年版）规定,含量

11、 99.0 99.8% 符合规定,炽灼残渣 0.1% 0.03% 符合规定,检查,鉴别 应生成黑色 生成黑色 符合规定,性状 应白色粉末 白色粉末 符合规定,检验项目 检验标准 检验结果 检验结论,检验报告,药品检验一般工作程序,第二节 常用物理常数,可一定程度反映药物的真伪（鉴别）和纯度（含量）。 主要测定的物理常数包括溶解度、相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、吸收系数、碘值、皂化值和酸值等。 测定方法收载于药典附录（略）,第三节 药物含量测定方法,药物在通过鉴别无误、杂质检查合格的基础上，进行含量测定。 药典中用于测定药物含量的方法包括理化测定法（称合量测定）和生物学测定（

12、称效价测定）。本书介绍前者，是以分析化学为基础。后者通常放在药理、微生物学课程中学习，现在也有放在生物药物分析课程中学习。 原料药含量测定方法：着眼于方法的准确性。 制剂含量测定方法：重视方法专属性、准确性可稍差。,容 量 分 析 法,经典化学分析,重 量 分 析 法,现代仪器分析技术,光 谱 分 析 法,色 谱 分 析 法,电 化学 分 析 法,药物分析中常用的分析方法,滴定分析,酸碱滴定法,氧化还原滴定法,络合滴定法,沉淀滴定法,非水溶液滴定法,容量分析法,重量分析法,挥发法,沉淀法,萃取法,光谱分析法,紫外分光光度法 UV-Vis,红外分光光度法 IR,原子吸收分光光度法AAS,原子发射

13、分光光度法AES,荧光分析法FS,色谱分析法,高效液相色谱法（HPLC）,薄层色谱法（TLC）,气相色谱法（GC）,电导法,电位法,伏安法,电化学分析法,电解法,极谱法,其他分析法,质谱法（ MS ）,高效毛细管电泳（HPCE）,核磁共振（ NMS ）,气质联用（ GC-MS ）,液质联用（ HPLC-MS）,气红联用（ GC-FTIR ）,重量分析法 酸碱滴定 配位滴定 容量分析法 沉淀滴定 分 氧化还原滴定 纸色谱 析 电化学分析 平面色谱 化 经典色谱 薄层色谱 学 色谱分析 柱色谱 现代色谱 GC *HPLC(包括毛细管电泳) UV-Vis 光谱分析 IR 或波谱分析 NMR MS,药

14、物的常见定量方法,化学分析法,容量分析法 精密度好、准确度高、操作简便、快速。 专属性差。 原料药含量测定首选方法.,重量分析法 精密度好、准确度高、快速。 专属性差、需样品量大 、操作较繁、需时较长。 仅在不能应用容量分析法进行原料药含量测定时再考虑。,光谱分析法,紫外分光光度法UV 可定性定量，用于鉴别和含量测定。 可多组分分析。 灵敏度较高、操作简便、样品用量少。 准确度不如重量法、容量法。 专属性差。 仪器便宜,红外分光光度法 IR 可定性定量，但通常用于鉴别。 样品需纯品。 专属性强。 仪器昂贵。,色谱分析法 （对复杂供试品的分离分析）,高效液相色谱法 分离度高、灵敏度好、样品用量少

15、、重复性好。定量、鉴别同时进行。 准确度不如重量法、容量法。 分析对象占有机物总数近80的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质。 主要用于制剂、复方制剂含量测定、 原料药多组分或杂质干扰含量测定、抗菌素、激素类药物分析。 多是改变载液的浓度和极性来改变分离度。 易收集，制备纯品再定性。 设备费用昂贵，操作严格。,气相色谱法 分离度高、灵敏度好、 样品用量少、重复性好。定量、鉴别同时进行。 准确度不如重量法、容量法 分析对象限易气化或能被衍生化后易气化的样品。沸点较低的化合物仅占有机物总数的20。 主要用于易挥发药物、原料药中残留溶剂和挥发性杂质的检查。 主要是通过改变固定相来改变分离度。

16、回收组分困难。 设备费用较便宜，操作相对简单。,第四节 药物分析方法验证,证明采用的方法适合于相应检测要求。,验证方法的情况,1 研究新药时制定质量标准分析方法。 2 药物生产方法变更、制剂组分变更、原分析方法修订。,验证分析项目,1 鉴别试验、杂质定量或限度检查。 2 原料药或制剂中有效成分含量测定。 3 制剂中其他成分（降解产物、防腐剂等）的测定。 4 药品溶出度、释放度等功能检查。,验证内容（指标）,1 精密度 2 准确度 3 专属性 4 检测限 5 定量限 6 线性 7 范围 8 耐用性,一 精 密 度,一 精 密 度,指在不同实验室由不同分析者测定结果的精密度. (药典分析方法的建立

17、）,1 重现性 (reproducibility),一 精 密 度,指同一实验室,不同的时间由不同分析者或使用不同的仪器进行测定的结果的精密度.,一 精密度,在相同条件,由一个分析者测定所得结果的精密度.,一 精密度,容量分析、重量分析法 0.3% 0.5% ; 氧瓶燃烧法 0.5% ; 紫外、原子吸收分析法 1.5% HPLC、GC分析法 2% TLC分析法 2%,二 准确度,指用该方法测定的结果与真实值接近的程度. 一般以回收率表示. 要求：制剂 RSD2% 回收率98102%（UV、HPLC、GC) 98102%（容量法） 体内药物分析80120%,三 检 测 限,1 非仪器分析目视法

18、用已知浓度的被测物试验出能被可靠地检测出最低浓度或量.,2 仪器分析信噪比法 用于能显示基线噪音的分析方法。 以3倍信噪比（S/N=3)相对应浓度确定检测限量。,指样品中被测物能被定量测定的最低量.（应具有一定的准确度和精密度）,四 定 量 限,确定方法: 1 仪器分析 S/N=10 2 非仪器分析目视法,能准确并专一测出被测物的能力.是在分析复杂样品混合物时衡量其是否受到干扰及其程度的一种方法.,五 专 属 性,药物分析中考虑:杂质、降解产物、相关物质、制剂辅料.,生物药物分析中考虑:内源性物质干扰,代谢产物的干扰,同时服药时的干扰.,如化学分析法专属性差,指在一定的浓度范围内,测试结果与供试物浓度呈正比关系的程度.,六 线 性,方法 用作图法或计算回归方程建立. Y=ax+b r=0.999,浓度 应包括一定梯度的5-8个浓度.对于含量测定要求浓度上限为样品最高浓度的120%,下限为样品最低浓度的80%,但应高于LOQ.,七 线性范围,指利用一种方法取得精密度和准确度均符合要求的试验结果,而且成线性的供试物浓度的变化范围.,原料药和制剂含量测试浓度 80%120% 制剂含量均匀度测试浓度 70%130% 溶出度或释放度的溶出量 限度20%,1.一般方法的耐用性因素：被测溶液的稳定性、样品提取次数、时间、试剂来源等。 2.色谱方法要求进行系