郭小洁-紫外-可见分光光度法在药品检验中的应用.ppt

1、1、紫外可见分光光度法在药品检测的应用，北京牌市药品检测所化学室郭小洁，2，1，概况2，基本概念3，分光光度法的基本原理4，紫外分光光度计5，紫外可见分光光度法在药品检测的应用6，结束语，3，1，概况：分光光度法是一种通过测定某一特定波长下的物质的吸光率和发光强度，对物质进行定性定量的分析方法。 紫外可见分光光度法具有操作简便快速，专业特性和灵敏度高等优点。 因此，被广泛采用于药品的分析检查。 各国药典中药品的理化常数、鉴别、检验和含量测定等各项目均可见紫外可见分光光度法的应用实例。 4、2 .基本概念：光的分散：日光通过棱镜项目后，依次射出七种颜色的光，即红色、橙色、蓝色、靛蓝色，这样把日光

2、分解成各种单色光的现象就是光的分散。 光谱：分散的单色光按一定顺序排列的情景称为光谱。 5、可见光：分散的各色单色光通常称为可见光。 波长范围：400-760nm为可见光区域的紫外光：与可视色光谱的紫色端相接的是紫外光，肉眼无法直接感知。 波长范围3360200 nm为紫外光区，6、吸收谱：来自发出连续光谱的光源(例如氘灯或钨丝灯)的光通过透明的物质(固体、液体、气体)之后，某波长的单色光成分被该物质吸收，在原始的连续光谱上出现几个暗线或黑带的光谱波长(符号是) :从一个波上的任意点到相邻的下一个波上的对应点的直线距离。 单位是nm。 7、a、b、c、d、e、8、光子能量与其传播频率和波长的关

3、系： E=h=h*C/其中：E光子转换能量h普朗特数(6.62619610-34J )的频率，每秒发射波的数量(单位： HZ) C光速(2.99799 ) 由以上公式可知，与光子能量和频率成正比的波长成反比的总能量E=E平移e振动e使e电子旋转，9，转变：分子被吸收的光辐射激发的能量从低能量水平跳到高能量水平的过程。 根据光吸收过程中的能量过程分为：转能跃迁振动能跃迁电子跃迁远红外吸收谱转动光谱红外吸收谱振动谱紫外可见吸收光谱电子光谱ee分子振动跃迁e分子转动跃迁， 在紫外和可见光区域灵敏度和精度高，一般可以测定为每1ml溶液含有数微米计程仪拉姆(g )的物质，误差约为1-2%，在该区域，物质

4、的光的吸收主要是由分子中的电子的能级的迁移引起的，云同步伴随分子的振动和旋转能级的变化电子的吸收谱通常缓慢，选择性差于红外光域，因此紫外可见光域主要作为量化分析和物理常数用于测定。 11、由于红外光区域的灵敏度和精度低，一般需要测定数百微计程仪柱(g )的供试品，在该区域中，物质的光吸收系统由于分子中的振动和旋转能级的迁移，红外光谱的特征性强，特别是在7-15m (称为指纹区)中吸收峰多除了旋光异构外，两种不同的化学物质并不遭遇完全相同的红外吸收谱，因此红外区主要用于识别和分析物质的结构。12、光透射率(t ) :单色光通过物质溶液时透射光的强度(I )与入射光的强度(I0 )之比。 T=I/

5、I0。 在吸光率(a ) :透光率的负对数值：A=log1/T=-logT，13、兰伯特规律：溶液浓度不变化的情况下，吸光率与溶液的液层厚度成比例。 当啤酒定律：溶液液层厚度不变时，吸光率与溶液的浓度成正比。 比耳郎伯定律：吸光率(a )与溶液的浓度(c )和光程长度(l )成正比。即，A=ECL，14，比耳-郎伯法则的适用范围：1.不使溶液的浓度过高或过低，使测定结果的相对误差最小的最佳透过率为T=37%左右。 2 .使用的溶剂不得与测定物质和分子之间发生缔合，不得生成复合物，使其异构化，不得平衡酸和碱。15、4、紫外吸收光谱、1 .基本结构：稳压电源、光源、波长选择装置、样品池、检测器、记

6、录装置：16、光源：在可见光光源中经常使用的钨丝灯； 紫外光光源常用的氘灯波长选择装置：一般来说，简单的仪器，例如比色计，多采用滤光片来获得一定波长的光辐射。 分光光度计以棱镜项目和衍射光栅为中心构成单色器，得到纯度高的单色光。 样品单元(吸收单元): 玻璃吸收单元仅适用于320nm以上的波长的测量。 水晶或熔融石英吸收池可用于200nm以上波长的测定。 最常见的是光路长度为1cm的吸收池。 检测器：用紫外可见光度计作为检测器的受光元件有光电池、光电池、光电子倍增管和受光二极管阵列等。 17、2 .仪器的校准和检定；(1)波长的校准：由于温度变化对机械部分的影响，仪器的波长经常有些变化，除了定

7、期对使用的仪器进行全面的校准检定外，测定前还要校准测定波长。 钬玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm和637.5nm的波长处具有尖溜溜吸收峰，可以用于波长校正。 (18 )吸光率的精度：精密测定以120C干燥至恒重的标准重铬酸钾元素约60mg，用0.005mol/L硫酸溶液溶解于1000ml中稀释，在规定波长测定吸光率并计算其吸声系数。 (19 )、(3)杂散光的检查：按照下表的试剂和浓度配制水溶液，装入1cm灰水晶吸收池，在规定波长下测定透光率，必须符合表的规定。20、3 .采用紫外分光光度法的溶

8、剂要求：在池中加入溶剂，使空气为空白测定吸光率的溶剂和吸收池的吸光率，波长吸光率要求220nm-240nm不可超过0.40nm250nm不可超过0.20 251nm-300nm不可超过0.10nm以上4 .紫外分光光度法测定法：以测定时除另有规定外还配制样品溶液的同批溶剂为空白对照，用1cm的灰水晶吸收池，在规定的吸收峰波长2nm以内测定几个点的吸光率，验证样品的吸收峰波长是否正确。 除特别规定外，吸收峰波长必须在该品种项规定的波长的2nm以内，必须考虑该试样的真伪、纯度及设备波长的精准性。 将吸光率最大的波长作为测定波长。 一般供试品溶液的吸光率值为0.3-0.7的误差较小。 如果装置的狭缝

9、乐队宽度不小于供试品的吸收乐队的半峰宽，则测定的吸光率变低。 狭缝宽度的选择请以减小狭缝宽度时供试品的吸光率不再增加为基准。 由于吸收池和溶剂本身可能有空白的吸收，所以在测定供试品的吸光率后，减去空白的读数，计算含量。22，5 .紫外可见分光光度法在药品检测中的应用，药典和药品标准中应用紫外可见分光光度法的项目有：吸声系数、鉴别、颜色检验、纯度检验、溶出度、含量均匀度检验和含量测定等。23，1 .吸声系数：药品的吸声系数是药品的理化特性常数，可作为药品生产过程中纯化的指标之一。 精制对紫外波段的一定波长的光具有特征吸收的药物时，由于产品在该特定波长下测定的吸声系数达到稳定的最大值之前进行，因此

10、吸声系数和其他物理常数一样，也成为判断药品纯度的依据。 中国药典2005年版收录的甲苯砜尿素和地塞米松等品种，按性状项检测吸声系数。24，2 .鉴别：药物对光辐射的吸收特性(即其吸收谱)作为与其他化学或物理方法相结合的鉴别方法之一，建立了药物吸收光谱曲线和标准品的吸收谱。 实际上，化合物的理化常数资料和药品标准中，一般只表示各化合物的最大吸收(有时为最小吸收)的波长位置。 对于具有两个以上最大吸收的药物，可以使操作更加简单，无需花费时间制作吸收谱曲线，只要测定各最大吸收波长下的吸收率，求出它们的吸收率之比，并测定它们的相对位置之比即可。 对于25、维生素B12的鉴别规定，每1ml含有维生素B1

11、225g的水溶液，采用分光光度法进行测定，在278、361和550nm的波长下有最大的吸收。 a 361纳米/a 278纳米为1.70-1.88。 a 361纳米/550纳米为3.15-3.45。 26、27、3 .纯度检验：如果某化合物对紫外光和可见光区的某波段光学透明(即不吸收或几乎不吸收)，杂质吸收，则该物质的生产纯化必须在规定波长下进行到吸声系数最低。 有些药物以此作为杂质限度检查的依据。 另外，一些药物的杂质用比色法与杂质对照品进行比较控制。 检测肾上腺激素中的酮体：取肾上腺激素，加入盐酸溶液0.1mol/L，制成每1ml含2mg的溶液，采用分光光度法在310nm波长下测定，吸光率不

12、得超过0.05。 在29，30，苯偶酰氟噻嗪和氢氯噻嗪等药物中，芳香一胺的检测采用了比色法。 样品经亚硝酸氮化后，生成盐酸萘乙亚胺和偶氮化物，在518nm波长下测量吸光率，不可超过规定的限度。 31、柠檬酸哌嗪和磷酸哌嗪检测项目，一胺、阿摩尼亚和亚硝基铁元素氰化金属钍在丙酮存在下的碱性溶液中从黄色反应红色，用比色法测定600nm和520nm波长的吸光率比，控制药品中杂质一级胺和阿摩尼亚的含量。 用284nm测定葡萄糖注射液和葡萄糖氯化纳金属钍注射液中杂质5 -羟甲基糠醛的吸光率，控制杂质含量。 药典规定，1%葡萄糖溶液的吸光率不得超过0.32，5-羟甲基糠醛的e1m以1308计算，5 -羟甲基

13、糠醛为0.00024%以下。 33、碘元素脱磷注射液：按照分解产物的检验规定，样品用0.1mol/L盐酸溶液稀释，制成每1ml含有0.01mg的溶液，在294和262nm的波长下分别测定吸光率，A294/A262必须在3.1以上。 碘元素脱磷定的0.1mol/L盐酸溶液在225和294nm的波长处有最大吸收，在262nm的波长处有最小吸收的顺式同分异构体及其水解作用物吡啶-2-甲醛-N碘元素物在同条件下在294nm的波长处无吸收，这些个的杂质在262nm处有吸收，不34、盐酸赤霉素：杂质吸收率检查，本品盐酸甲醇溶液2mg/ml在430nm波长下的吸光率不得超过0.5。 本产品的10mg/ml盐

14、酸甲醇溶液在490nm波长下的吸光率不得超过0.2。 盐酸赤霉素在酸性溶液(pH2.0 )中最大吸收353nm，在上述波长和浓度条件下几乎不吸收盐酸赤霉素。35、华法林金属钍：溶液澄清度和颜色检测规定，本品为丙酮溶液20mg/ml，4cm吸收池，460nm吸光率不可超过0.12。 36、比色法检测：冰乙酸氟与氟尿嘧啶和茜素红氟蓝反应检测氟； 胰岛素制剂和锌试剂反应检查亚金属铅的冰乙酸地塞米松等和二氨基萘反应检查硒。 37，4 .含量测定：药典中的含量测定方法分为(1)对照品比较法(2)吸声系数法(3)分光光度法(4)比色法，38，(1)对照品比较法，应用范围：单一成分药材的测定。 混合物或复合

15、制剂，但其他成分对被测成分的测定波长没有吸收或几乎没有吸收，39、测定要求为供试品溶液和对照品溶液的对照品溶液中含有的对照品的量在供试品溶液中的被测成分的显示量的10%以内。所用溶剂、其他试剂、操作方法和条件均应一致。 40、计算公式： Cs=Cr*As/Ar Cs :供试溶液的浓度As :供试溶液的吸光率Cr :对照品溶液的吸光率、41、(2) .吸声系数法：应用范围：单一成分药剂的测定。 混合物或复合制剂，但其他成分对被测成分的测定波长无或几乎无吸收，42，测定要求：通常，为了测定最大吸收峰值波长下的吸光率，供试溶液的测定波长下的浓度和吸光率严格遵循比耳-郎伯定律，具有良好的线性关系。 测

16、量条件和操作必须与测量吸声系数时完全一致。 吸声系数是使用标准物质校正的不同型号的分光光度计多次测定而求出的平均值。 特别要注意仪器的校准和检定，43、计算公式： A=ECL将中国药典2000年版氯霉素含量测定例：精密放置氯霉素0.1009g、100ml的瓶子，加入乙醇10ml，边摇晃边溶解，将水稀释至刻度，甩出，精密取2ml， 放置100ml的瓶子，将水稀释至刻度，在278nm波长下测定吸光率为0.596，以氯霉素(C11H12Cl2N2O5)吸声系数(e1m )为298计算氯霉素含量。 如果A=0.596 E=298 L=1，则c=a/(e * l )=0. 596/(298 *1) %=

17、0. 002 %氯霉素含量=0. 002 % * 100 * 100/(0. 1009 *2)=99.1 %、44、(3) 计算分光光度法、联立方程式法示差分光光度法、二波长分光光度法、三波长分光光度法、系数倍率法、微分光谱测定法正交函数分光光度法、45、(4)比色法、样品本身在紫外可见光区域没有被强吸收、被紫外波段吸收，是为了避免干扰作用或提高灵敏度， 46、盐酸可乐定片及注射液：在适当的pH条件下将溴酚蓝溶液与盐酸可乐定定量结合形成有色配合物，用三氯甲烷萃取后直接比色测定，采用与对照品相同的方法操作47、冰乙酸泼尼松眼膏及醋酸氢化可乐定用盐酸化学基性(四甲基氢氧化铵)将氯化三苯四唑还原成红色，可以在485nm的波长下测定。 48、计算公式： Cs=