细菌常用的几种试验ppt课件

1、菏泽市医院病床微生物区系检查中常用的几种试验，1、常用实验方法，革兰氏染色拉丝试验，耐酸染色氧化酶试验，触酶试验，凝固酶试验，调理素实验卫星试验，环磷酸腺苷杆菌肽敏感试验，硝酸盐还原试验，脱氧核糖核酸酶试验，生化反应血清分型(志贺菌、沙门氏菌、霍乱菌、链球菌)，2、革兰氏染色，快速染色法：1、初级染色：结晶紫染色10 2，媒染：革兰氏碘溶液染色10秒，水洗，干燥；3.脱色：用95%乙醇脱色1020秒，水洗，干燥；4.再染色：用沙黄色或红色染色10秒钟，水洗，干燥后镜检。5.结果判断：革兰氏染色呈紫色，革兰氏染色呈红色，3。革兰氏阳性菌是革兰氏阴性菌，4。氢氧化钾拉丝试验和“氢氧化钾拉丝试验”能

2、快速鉴定革兰氏阳性菌。1.原理：由于革兰氏阴性菌细胞壁肽聚糖层数少于稀碱溶液，容易断裂，并释放出未断裂的DNA螺旋，使KOH菌悬液变粘，搅拌后可将丝拉出，但2。试剂：4%氢氧化钾水溶液。它应该是新鲜准备的。3.方法：取1滴4%氢氧化钾水溶液放在干净的载玻片上，取几个新制备的菌落放在带有接种环的固体培养基上，在氢氧化钾溶液中搅拌混合均匀，每隔几秒钟提起接种环，看看丝是否能被拉出。4.结果：接种环能拉出丝为阳性，悬丝仍为阴性。大多数革兰氏阴性菌在5到10秒内呈阳性，有些需要30到45秒。60秒后革兰氏阳性菌仍为阴性。5、耐酸染色，1、一次染色：石炭酸变红，加热染色3-5分钟，水洗，干燥；2.脱色：

3、用3%盐酸酒精脱色3060秒，水洗，干燥；3.再染色：碱性亚甲蓝60秒，水洗，干燥后镜检。4.结果判断：抗酸菌为红色，非抗酸菌为蓝色。5.意义：用于区分抗酸细菌和非抗酸细菌。6.耐酸染色-耐酸细菌。7.氧化酶试验。原理：具有氧化酶的细菌首先氧化细胞色素C，然后氧化细胞色素C氧化对苯二胺产生有色醌。方法：取一小块干净的滤纸，涂上少许菌苔，加入一滴氧化酶试剂(对苯二胺溶液)，观察颜色变化。判断：它立即变成粉红色，并迅速变成紫红色，这是积极的，而它不改变颜色，是消极的。意义：从气单胞菌和假单胞菌中鉴定肠杆菌科细菌，8，9，酶接触试验，1。原理：具有过氧化氢酶的细菌可以催化过氧化氢，释放新的生态氧，然

4、后形成分子氧和气泡。2.方法：用接种环挑取固体培养基上的菌落，置于干净的玻片上，滴加3%过氧化氢溶液，观察结果。3.结果判断：5秒内释放的大量气泡为阳性。4.意义：大多数球菌酶接触试验为阳性，而链球菌为阴性，主要用于区分葡萄球菌和链球菌。10，11，血浆凝固酶试验，1。原理：金黄色葡萄球菌能产生两种凝固酶。一种是结合凝固酶，它与细胞壁结合，使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白并粘附在细菌表面，发生凝集，这是通过玻片法测定的。另一种是细菌形成后从培养基中释放的游离凝固酶，它可以将凝血原转化为凝血酶物质，从而凝固血浆，这可以通过试管法测定。2.方法：(1)玻片法：取一滴血浆和生理盐水，滴在干净的玻片上

5、。挑选要检测的菌落，分别与血浆和生理盐水混合。如果血浆中有明显的凝集颗粒，而盐水中没有自凝，则为阳性。(2)试管法：取两根试管，加入0.5毫升血浆(用生理盐水1: 4稀释)，挑出几个菌落，加入到测量管中，充分研磨并混合均匀，加入一个阳性菌株到对照管中373-4小时。血浆凝固呈阳性。12、13、14、OPT(操作测试)，1。原理：肺炎链球菌对视托钦(乙基氢化去甲喹)非常敏感2.方法：将待测A溶血后的链球菌均匀涂于血片上，贴上光托钦纸(含5毫克药物)35小时，孵育18-24小时，观察抑菌圈大小。3.从结果来看，肺炎链球菌为14毫米抑菌圈，绿色链球菌为狭窄抑菌圈。15，16，卫星测试，1。原理：流感

6、嗜血杆菌生长时需要两个因子X和V，在血盘上形成微小、圆形和透明的菌落。如果与金黄色葡萄球菌同时培养，金黄色葡萄球菌产生因子V，促进流感嗜血杆菌的生长，金黄色葡萄球菌周围的菌落大，形成卫星生长现象。它不能在普通培养基上生长。2.方法：用采菌环挑取可疑菌落，分别接种于血平板和MH平板，然后用采菌针挑取金黄色葡萄球菌，与原标记线垂直交叉，接种于平板。3524小时观察结果。3.从结果判断：金黄色葡萄球菌周围的菌落较大，卫星检测呈阳性。4.意义：只有卫星现象流感嗜血杆菌出现在血盘上；血片和MH都显示出卫星现象副流感嗜血杆菌。从而用于区分流感和副流感嗜血杆菌。17，18，19，CAMP测试，1。原理：b组

7、链球菌可在血平板上产生camp因子，促进金黄色葡萄球菌溶血素的活性，从而增强血平板上两种细菌结合处的溶血能力，形成箭头形透明溶血区。其他链球菌一般不产生环磷酸腺苷因子，因此该试验可作为乙组链球菌的鉴定指标之一。2.方法：在血平板上，用金黄色葡萄球菌画一条水平线，然后用相隔5毫米左右的被测菌接种一条或两条垂直短线，观察3524小时。3.结果观察：受试菌的接种线与金黄色葡萄球菌的接种线之间有一个箭头形或半月形的透明溶血区，可推断为B群链球菌。无溶血区为阴性。20，21，杆菌肽敏感性试验，1。原理：A组链球菌对杆菌肽非常敏感，而其他链球菌通常对杆菌肽有耐药性，因此该试验可以鉴别链球菌。2.方法：将待

8、测链球菌紧密涂于血片上，将杆菌肽纸片贴于血片表面，观察3524小时。3.杆菌肽周围明显的抑菌圈为10毫米，为阳性，则推断为A群链球菌，10毫米为阴性，为其他群链球菌。22，23，硝酸盐还原试验，1。原理：有些细菌可以减少培养基中的硝酸盐，生成亚硝酸盐、氨和氮。亚硝酸盐与乙酸反应生成亚硝酸，亚硝酸再与对氨基苯磺酸反应生成重氮苯磺酸，重氮苯磺酸可与-萘胺结合生成红色的N-氨基苯磺酸。2.方法：将待测菌接种于硝酸盐培养基中3524小时，加入1滴硝酸盐还原剂A(对氨基苯磺酸和乙酸)和1滴溶液B(-萘胺和乙酸)，观察结果。3.判断结果：红色为阳性。如果没有出现红色，添加一点锌粉。如果红色仍然没有出现，它将是积极的，红色将是消极的。4.显著性：肠杆菌科细菌，硝酸盐还原试验阳性，24，25，脱氧核糖核酸酶试验阳性，1。原理：一些细菌能产生脱氧核糖核酸酶。脱氧核糖核酸酶可以将长的脱氧核糖核酸链水解成由几个单核苷酸组成的寡核苷酸链。水解形成的寡核苷酸可溶于酸。在脱氧核糖核酸平板上加入酸后，菌落周围可