中药化学试验技术

1、（4）洗脱：开启输液泵，按适当流速输入展开剂。（5）收集：按一定ml数或依据色带（可见或紫外）分部收集。（6）鉴定：洗脱液TLC鉴定，相同斑点合并，浓缩结晶。4、例（P137）人参叶提取物经硅胶柱层析分离后，得到收集流份，某流份经TLC检查，出现4个斑点。此混合物250mg溶于1ml展开剂及2ml乙醇中展开剂：n-BuOH：CHCl3：MeOH：H2O（40：20：15：20），流速为1.7ml / min。TLC板：硅胶GF25435g + 0.5CMC-Na 75ml，90。C活化3h收集流份25份（56ml/份）：流份5人参皂苷Rb2 流份911人参皂苷Rc 流份151720-glc人参

2、皂苷Rf 流份1923人参皂苷Rd（六）离心液相色谱法（CLC） CLC是在离心TLC的基础上发展起来的一种制备分离技术。1、特点a) 不用预制板，制板体积固定。b) 载量大，厚度可达1cm，厚度均匀，分离效果好，制备量大于CTLC。c) 填充剂可用多种分离材料：硅胶、氧化铝、聚酰胺、凝胶、离子交换树脂。扩大了使用范围。d) 与柱层相比，因引进了离心，所以分离速度快，效果好。2、仪器（1）控制器：调节转速（由此控制流速），分离时间，收集时间。（2）洗脱器：进样，注入展开剂。有进样通道，展开通道。（3）分离盘：由底盘、垫圈、盘盖、柱芯、旋盖组成，由垫圈的不同规格，控制装填厚度。注入吸附剂，在离心

3、作用下，圆盘封闭体系内逐渐被分离材料充满，形成一定厚度的平整涂层。（4）分部收集器3、操作（1）制备填充剂 硅胶填料的用量垫圈规格 防漏层硅胶（g） 铺板用硅胶（g） 调糊用溶剂（ml） 3mm 8 80 450 5mm 12 120 600 10mm 16 160 1000（2）填装防漏层（3）装填填充剂（4）进样、洗脱（5）收集、鉴定：分部收集器收集，TLC鉴定，洗脱液处理同常法。4、实例（P141） 红秦艽MeOH提取物，上样量200mg，60g硅胶G制板，板厚2mm，转速300转/min。展开剂Pet：四氢呋喃：MeOH（100：10：3），分离时间1h，得丹参酮IIA，丹参酸甲酯，丹

4、参酮I。（七）电泳1937年开始，现在中药成分研究中，成功地用于生物碱、有机酸、氨基酸、蛋白质的分离、鉴定。1、原理带电荷的化合物在电场作用下产生定向移动，由于混合物中各组分所带电荷性质（+、）、数量、强度及分子量不同，各组分移动的方向及速度均不相同，从而达到分离。2、电泳速度的影响因素 电泳速度cm2/秒/伏=电子迁移率a、分子的性质，离子态，电泳速度快。 极性基团多，电泳速度快，在电场作用下，发生极化，产生电性。b、电场强度（电位降/cm），电场强度高，电泳速度快。c、溶液离子强度：介质（缓冲液），离子强度高，成分移动慢。d、电渗（液体对于支持体的相对移动） 支持物的极性基团在电场作用下产

5、生电性，支持物上的溶液产生相反的电性，这样，影响到各个组分的电泳速度。此外，缓冲液黏度、温度也有一定的影响。3、纸电泳（简单、易行）（1）装置：稳压器，电极，缓冲液槽（2）缓冲液的选择：离子强度0.020.2，控制电泳速度恒定。（3）点样：点状或带状，点在滤纸中央。 点样后纸两端浸入缓冲液，至距样品45cm取出，让缓冲液扩散至样品。（4）电泳：点好样的滤纸放在支架上，二端下垂浸入缓冲液槽中，通电流。 一般电场强度为10伏/cm，电泳2h（5）显色：同一般PC（6）作用：了解各组分酸碱性及强弱，再针对性地提取、分离。 纸电泳谱位及判断 缓冲液 正极 负极 结果判断酸性缓冲液 中性成分碱性缓冲液

6、酸性缓冲液 中性成分碱性缓冲液 酸性缓冲液 弱碱性成分碱性缓冲液 酸性缓冲液 强碱性成分碱性缓冲液 酸性缓冲液 弱酸性成分碱性缓冲液 酸性缓冲液 强酸性成分碱性缓冲液 酸性缓冲液 两性成分碱性缓冲液 4、琼脂板电泳以琼脂板为支持物的一种凝胶电泳。制板 点样 电泳 染色常用于分离测定蛋白质，因为琼脂对蛋白质吸附极微。三、柱层析法分离原理同平面层析，不同在于将分离材料加入玻璃柱中，再洗脱分离。分离样品量大，0.150g，多为制备性分离。 吸附柱层 分配柱层 离子交换柱层 凝胶带柱层（一）氧化铝、硅胶吸附柱层氧化铝生物碱、挥发油、内酯、甾体等亲脂性成分。硅胶亲脂性、亲水性化合物分离，亦可用于分配。程

7、序：装柱 上样 洗脱 鉴定1、装柱 样品：吸附剂 Al2O3 1 : 20 50 （极性小的可 1 : 100） SiO2 1 : 30 100 （极性相近的可 1: 300 400） 层析柱规格 1 : 10 30（直径 : 高度） 原则 ： 均匀、致密，无气泡、缝隙。( 1 ) 干法装柱 ： 底部塞脱脂棉，敲击，顿击。( 2 ) 湿法装柱 ： 倒入溶剂后，加吸附剂； 吸附剂 + 溶剂 搅拌后，倒入柱中 2、上样 a 样品 + 展开剂 溶液、 上样 ，（注意： 柱床表面防冲击） b 样品 + 易溶溶剂 溶液 + 少量吸附剂 拌匀、干燥、过筛 装于干柱顶端 装于（上端留有一定体积溶剂）湿柱溶剂

8、中 3、洗脱 洗脱液由TLC 摸索确定 常用梯度洗脱法：eg、 Pet- EtOAC 、CHCl3 - MeOH 注意 ：少用 OH-、 H+ 、三相溶剂 分部收集洗脱液、体积小、组分交叉少、但后处理麻烦 a 体积大、组分交叉多、但后处理便利 b a 用于 Rf 值差异小、or 单体纯化 b 用于 Rf 值差异大、 粗分 常根据上样量、柱子大小、分离度好坏来决定2、 鉴定 TLC 、PC 荧光检测、微生物活性显示 相同组分合并、浓缩后析晶，结晶法如前述 5、实例， 粉防己中汉防己甲、乙素的分离 P153 汉防己甲素 R = CH3 汉防己乙素 R = H 汉防己根粗粉200 g + 95% E

9、tOH1400 ml 回流3次 滤液浓缩至糖浆状 残渣 50C +1%HCl300 ml 边加边搅 滤液 环乙烷 : EtOAC (1:3) 萃取2次 有机层 水层 + NH4OH pH = 9 环乙烷 ：EtOAC(1:3) 有机层 水层 无水Na2SO4 脱水 ，蒸干抽松，Me2CO结晶 总碱 硅胶柱层，加压：0.5 0.6Kg/cm2 环乙烷 : ETOAC : 二乙烷(6:2:1)洗脱 流速0.7 0.8 ml/min 汉防己甲素 汉防己乙素 （二）聚酰胺柱层析1、分离原理(1)氢键吸附（60年代初形成）聚酰 OCH OHH ETOAC 聚酰胺 化合物溶剂洗脱难易：水 MeOH EtO

10、H Me2CO 稀NH3OH CH3CH2CH2COOH b 对、间位酚OH 邻位酚OH c 芳香核、共轭双键多、吸附力强d 形成分子内氢键、吸附力弱 （2）极性吸附原理，（双重层析性能：氢键 + 极性吸附） 既有酰胺基，又有非极性脂肪链 适于难与聚酰胺形成氢键的：萜类、甾体、生物碱 适于以非水性有机溶剂为洗脱剂，如CHCl3 : MeOH 如 黄酮苷(A)、相应的黄酮苷元(B) 含水溶剂洗脱（含水醇）： A B（水中氢键牢固，且对苷溶解性大） 非水溶剂洗脱（如CHCl3-MeOH）：B A （极性吸附原理）2、聚酰胺的制备与再生： 制备：市售聚酰胺（1530目 +H20，浸1224h 研磨

11、过筛（80100目） 混悬液 装柱 抽滤 60-80C，2-3h 备用 再生： 5% NaOH 洗至无色，水洗中性 含多元酚液（鞣质）+5% NaOH 浸泡过夜 换5% NaOH 反复数次 水洗至pH =9 2倍10%HAC洗 水洗中性3、 柱层操作： 装柱：混悬液直接装柱，自然沉降，水与柱床表面齐平即可。 细粉 +H2O 搅拌至气泡除去 装柱，同上 加样：20 30% 样品水液 样品：聚酰胺 = 1：40 60 a、除杂，样品量可大大增加 b、样品不溶于水，可用少量醇溶后，拌入少量聚酰胺粉，挥去溶剂，悬浮于洗脱剂中上样 洗脱：一般H2O 10% EtOH 30% EtOH 50% EtOH

12、70% EtOH 95% EtOH 3% NH4OH 5%NaOH. 梯度更换，根据洗脱液颜色掌握 鉴定： TLC检索，相同流份合并，浓缩后适当溶剂结晶4、实例 甘草叶中黄酮类成分的提取分离 甘草叶1050 g + 95% EtOH渗漉 乙醇提取液 残渣 回收EtOH后，Pet萃取 有机层 水层 + 175g硅胶拌匀， MeOH：H2O（7：3）洗脱 洗脱液 浓缩 依次用CHCl3、EtOAC、n-BuOH萃取CHCl3液 EtOAC液 n-BuOH液 浓缩 总黄酮17g 聚酰胺干柱层析 CHCl3：MeOH（6：1）展开，切割，MeOH洗脱 A部分3.5g B部分1.5g C部分 聚酰胺干柱

13、层析 聚酰胺柱层析 MeOH-H2O重结晶 CHCl3：MeOH（6：1）展开 CHCl3：MeOH（1：2）洗脱 Sephadex LH-20纯化 naouralenol 100mg Uralenol 50mg 聚酰胺柱层析 CHCl3：MeOH梯度洗脱晶50mg Uralenin 250mg（三） 炭柱层析法价廉，吸附力大，适用于大量制备分离。 1、原理 非极性吸附 对非极性化合物吸附力强 对极性化合物吸附力弱 规律： a 在极性大的水中吸附力强 在极性小的有机溶剂中吸附力弱 所以，一般以不同梯度含水有机溶剂洗脱，极性大 小 b 化合物极性基团（-COOH，NH2，OH .）多，吸附力弱

14、极性基团少，吸附力强 c 化合物母核大，吸附力强；反之，吸附力弱。 所以，吸附力：多糖 低聚糖 单糖 多肽 氨基酸d 吸附力：芳香族 脂肪族e 吸附力：生物碱：碱水液中酸水液中（离子态，极性大）有机酸、酚类：酸水液中碱水液中（离子态，极性大）f一般用于水溶性化合物：氨基酸、单糖、多糖、苷类2、活性炭的处理特点：易吸附空气，气体占据吸附表面，俗称“中毒”，所以用前一般需要活化（120150。C活化26小时），锦纶活性炭80。C活化数小时（高温变形）。3、操作（1）装柱：水中，同聚酰胺粉状活性炭+硅藻土（1：1）（增加流速），再以蒸馏水混悬，装柱。（2）上样：2040%样品水液；不溶样品醇溶后上样

15、。 上样量：样品：活性炭 = 1：1020（3）洗脱、鉴定：同聚酰胺4、实例：人参中糖类成分分离 人参根100g2 +水提取 提取液 残渣 +EtOH放置 沉淀 滤液 50以下减压浓缩 糖浆状液 H2O 5%EtOH 15%EtOH 20%EtOH 30%EtOH 洗脱液 洗脱液 洗脱液 洗脱液 洗脱液 减压浓缩 葡萄糖及果糖 浓缩液 三糖 四糖 更高寡糖 通过AmberliteIRl20、 IR45离子交换树脂 脱盐溶液 纤维素柱层析 异丙醇丙酮水（40 4218） 蔗糖 蔗糖 麦芽糖 （含少量麦芽糖）（四）分配柱层1、原理 样品随流动相通过含有固定相填料的层析柱时，成分在固定相流动相之间不

16、断分配，而达到分离。分配系数差异越大 ，越易分离。2、支持剂a、中性多孔性粉末。b、化学惰性，不溶于固定相、移动相。c、能吸附相当量的固定相，且流动相能自由通过。 如：硅藻土、纤维素、硅胶3、溶剂系统选择文献记载（PC）预试（分配TLC或PC）4、 操作（1）装柱a 支持剂 + 固定相（流动相已饱和）搅匀 抽滤 吸附了固定相的支持剂 + 流动相 剧烈搅拌使两相平衡 混悬液 b柱中加入流动相（固定相已饱和） 加入支持剂混悬液 自然沉降 流动相与柱床表面平齐，敲击均匀（2）上样能溶流动相+流动相 溶液 上样样品 能溶固定相+固定相 溶液 + 支持剂 上样能溶其它溶剂+其它溶剂 溶液 + 支持剂 挥

17、去溶剂 上样（3）洗脱（同前）注意：流动相预先用固定相饱和（4）鉴定（同前）5、实例：P164狄戈辛（异羟基洋地黄毒苷）的分离装柱：硅胶 + H2O（EtOAC饱和）搅匀、抽滤 +EtOAC（H2O饱和）浸泡 混悬液湿法装柱上样：毛花洋地黄次生苷总苷 + EtOAC（H2O饱和）溶解 上样 洗脱：0.5%MeOH-EtOAC（H2O饱和）洗脱 鉴定:各流份TLC或PC检查，相同流份合并，减压浓缩，MeOH结晶得：洋地黄毒苷（Digitoxin）、 羟基洋地黄毒苷（Gitoxin）、异羟基洋地黄毒苷（Digoxin）（五）凝胶柱层析 六十年代发展起来的一种分离技术有葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼

18、脂糖凝胶等。本节主要介绍葡聚糖凝胶。1、分离原理凝胶吸水后形成凝胶粒子，凝胶粒子构成网眼，小分子进入，大分子流下。如同按照分子大小过筛一样，故称为“筛层析”。G型：水或含水醇上样、洗脱分离水溶性大分子化合物。 LH-20（引入羟丙基）：可用有机溶剂极性大、极性小化合物均可分离。2、操作（1）凝胶的选用不同分子量范围的化合物选用不同规格的凝胶。对于分子量相近，难分离的，要对凝胶预处理，筛选粒度范围较窄的；水浮去除粉末、碎片。（2）装柱装柱前按不同的规格要求充分膨胀，同前述湿法装柱，均匀、致密、无气泡、无缝隙。层析床装填均匀与否，是分离成败的关键。（3）上样洗脱剂与柱床表面平齐时，移液管吸取样品液

19、，上样同前述液体样品上样。（4）洗脱水溶性强的大分子水、电解质（盐类或缓冲液）水溶性较差的大分子醇-水、丙酮-水系统亲脂性的（Sephadex LH-20）醇-Me2CO-CHCl3系统，分部收集（5）鉴定 一般化合物PC、TLC蛋白质、多肽、多糖在UV特定波长检测，相同流份合并（6）浓缩与干燥（多为水液）6080薄膜或旋转蒸发浓缩多糖可浓缩后加醇沉淀热不稳定化合物（蛋白质、多肽、酶），冷冻干燥。（7）凝胶的再生一般用洗脱剂洗至平衡即可。有污染（有色）0.2N NaOH与0.5N NaCl浸泡、水洗净，洗脱剂洗平衡即可。3、实例 山杨中活性成分的分离山杨的皮、叶提取物 Sephadex G-2

20、5柱层析 MeOH-H2O洗脱 水杨苷 白杨苷 特里杨亭 大齿杨素 柳葡萄苷 (Salicin) (Populin) (Tremuloidin) (Grandidentatin) (Salireposide)（六）离子交换柱层析 1、原理 利用大分子树脂网状结构内存在的交换基团而进行的交换性柱层析。离子交换树脂是由有机高分子化合物组成的网状多孔性结构材料，由二部分组成。 母体结构组成多孔性网状骨架 交换基团多孔骨架内部连接着相当数量的交换基团阳离子交换树脂： R-SO3-H+ + M+OH R-SO3-M+ + H2O 阴离子交换树脂： R3-N+OH- + M-OH+ R3N+M- + H2

21、O 被分离成分由于酸性或碱性化合物的解离系数不同，结合能力也就有所区别。当用一定酸性或碱性溶液洗脱时，这些化合物根据解离系数的差异而被分离。分离遵循化学平衡规律进行，在层析柱上，由于连续添加新的样品液或洗脱液，平衡反应不断向正反应方向进行。 2、影响离子交换因素 溶液酸碱度 阳离子树脂： 交换溶液酸度过高，则抑制树脂中酸性基团的解离。 强酸性树脂，样品液 pH 3 弱酸性树脂，样品液 pH 6 阴离子树脂：交换溶液碱度过高，则抑制树脂中碱性基团的解离。强碱性树脂，样品液 pH 10 弱碱性树脂，样品液 pH 7 成分的性质：取决于成分的介离离子电荷、半径及酸碱性强弱 介离常数大，酸碱性强，介离

22、离子价数高，易交换，洗脱难 反之，难交换，易洗脱。 成分的浓度：浓度略低较好，浓度过高则树脂网孔易失水而造成收缩，影响成分离子进入网孔内。 交换液的温度：温度高，树脂及成分的介离系数增大，交换速度快，洗脱也是如此，但热不稳定成分，避免加温。 交换溶剂：一般为水，也可是稀醇。极性小的有机溶剂由于介离能力差，难以交换或不能进行交换。 交换流速：快，不完全，成分易泄漏；慢，交换充分，但时间长。 一般，1:1525 的柱子， 12 ml/cm2min 树脂用量： 理论上 ：根据树脂的交换容量，样品中成分的大致含量计算。实际上：中药提取液中常含可介离的无机盐成分。故一般用量要大得多。 可用小试方法3、操

23、作： 树脂预处理 ：a 筛选：过筛 或 浮选 b 充分膨胀2 3 天c 转型 强酸型（Na型）：装柱 + 10 倍 2M HCl H型 浸泡 交换 + H2O 至中性 + 10 倍 1M NaOH (或NaCl) Na型 + H2OpH 78 +10 倍1N HCl H型+ H2O pH 7 Na- H- Na- H- 强碱型（Cl- 型）：装柱 + 10 倍2M NaOH OH - 型 + H2O pH 9 + 10 倍 1M HCl Cl- 型 + H2O pH 7 + 10 倍 1M NaOH OH - 型 Cl- OH - Cl- OH - 装柱：（树脂处理时已装好） 交换：放出多余液

24、体，待液面与树脂面平齐时，加入样品液。 样品液的pH值：原则，样品与树脂均可介离。 生物碱， pH 偏酸； 有机酸， pH 偏碱。 洗脱，先以水洗至无色，再以适宜溶剂洗脱。 酸性化合物，酸洗(0.11N HCl)后，有机溶剂洗； 碱性化合物，碱化(0.11N NH4OH)后，有机溶剂洗，化合物碱性由弱强洗脱 再生，同树脂预处理。 4、实例：南瓜子氨酸（Cucurbitine）的提取分离南瓜子(压榨去油) +H2O温浸5次 水提取液 残渣 通过磺酸型阳离子交换树脂柱 水溶液 树脂柱 H2O洗净 1%NH4OH洗脱 氨水洗脱液 减压蒸发至除尽NH3 固体物 溶于水(2倍),+乙醇(10倍) 上清液

25、 沉淀 +过氯酸至pH5, 滤除沉淀 +乙醇至浑浊, 放置 粗晶 母液 溶于少量水中 通过弱碱型阴离子交换树脂柱水溶液 树脂柱(吸附过氯酸) 浓缩、析晶南瓜子氨酸（七）闪式柱层析（Flash chromatography）： 1、闪式硅胶：4063um微球形，分离速度、效果均优于普通硅胶。2、操作：方法同普通硅胶。 3、实例：山莨菪碱和樟柳碱的分离吸附剂：闪式硅胶洗脱剂：氯仿-甲醇（9：1） 据TLC选择溶剂系统，以氯仿洗脱至柱底后，以上述系统洗脱，10ml/份鉴定：TLC检查后，合并相同流份结果： 成分 山莨菪碱 成分 樟柳碱 流 份 13 45 612 1317 洗脱体积 30ml 20m

26、l 70ml 50mL（八）大孔吸附树脂分离法： 1、原理： 吸附性（范德华引力或氢键） 筛性 （多孔网状结构） 依据分子体积大小及吸附力不同而分离水液中吸附力强。2、影响分离的因素： a 分子极性大小 极性大的成分中极性树脂分离； 极性小的成分非极性树脂分离。 b 分子体积大小：分子大，吸附力强，选择大孔径树脂。 c pH值影响： 酸性成分： 酸性条件下易被吸附 碱性成分： 碱性条件下易被吸附 中性成分： 中性条件下易被吸附 3、洗脱液的选择： 可选用不同浓度的MeOH、EtOH、Me2CO，流速0.55ml/cm2.min。非极性大孔树脂 洗脱剂极性越小，洗脱能力越强。 中极性大孔树脂 用

27、极性较大有机溶剂。4、预处理与再生： 预处理：MeOH 或Me2CO浸泡过夜，装柱后连续洗涤至流出液加等量水无浑浊。 再 生：EtOH洗涤（上样液一般为水液） 或 0.1 1 mol/L NaOH (or HCl)洗涤，再用水洗至中性。 实例 ：黄芪皂苷的分离黄芪根粉 +EtOH提取 提取液 残渣 减压浓缩，+H2O 清液 通过D101大孔树脂柱 30%EtOH洗脱，90%EtOH洗脱 30%EtOH洗脱液 90%EtOH洗脱液 浓缩 硅胶柱层析 黄芪皂苷Ed200mg Ec80mg W2120mg（九）减压柱层析： 简便、实用、快速。原理同吸附层析。 1977年澳大利亚学者Cool首次创用。

28、 特点：1、应用：极性分段； 较大量制备性分离。 2、装置：G-4垂熔玻璃漏斗，磨底抽滤瓶， 减压泵，收集瓶。 3、层析条件：吸附剂硅胶或氧化铝 上样量1：30200（样品：吸附剂）4、操作：吸附剂装入（5cm）后，减压泵抽紧。 加样；干法 洗脱；（减压下）可梯度洗脱，分部收集 鉴定 实例 黑芨草中讪酮类化合物的分离（减压柱层析法） 样品：黑芨草总讪酮100mg吸附剂：硅胶H洗脱剂：Pet：EtOAc梯度洗脱，100ml/份鉴定：TLC，展开剂：Pet：EtOAc（7：3）结果：Pet：EtOAc（90：10）部分得1-OH-2,3,7-OCH3讪酮65mg Pet：EtOAc（86：14）部

29、分得1-OH-2,3,5-OCH3讪酮13mg（十）短柱层析： 1、有关理论： 过去认为，柱效随柱径的加大而下降 近年来认为，柱径加大后，在适当条件下柱效反而提高。 Konx:“无限直径效应”理论：柱径粗，层析集中于中部进行，减少“柱壁效应”，柱效提高； 另一方面，柱短可使洗脱液在柱内受阻减少，加之载面增大，使流速增加，从而为高细度吸附剂提供了条件。 2、方法： 柱直径：3 20cm , 长度：1:2 5 3、实例（1）黄芪醇提物通过大孔树脂的水洗脱液，：520cm硅胶柱，EtOAc-MeOH洗脱，得W2 0.2g。（2）茜草乙醇提取液：1640cm硅胶柱，得蒽醌类成分。（3）暴马子醇提物：6

30、30cm硅胶柱，CHCl3-MeOH梯度洗脱，得粗晶，Pet重结晶，得纯品。（4）人参总皂苷苷元：35cm氧化铝柱，环己烷-乙酸乙酯洗脱，得人参二醇、人参三醇。（5）天麻醇提物：525cm硅胶柱，苯、乙酸乙酯-苯、乙酸乙酯-甲醇洗脱，得对羟基苯甲醇、天麻苷。（十一）低压柱层析： 采用1040u的填料，在加压情况下进行。1、装置：低压柱上端磨口连有溶剂球体的优质玻璃层析柱，玻璃承受压力约为24Kg/cm2。压力源多为N2气，适于易氧化破坏的成分分离。 空气压缩机（小型）及皮球袋，适于稳定性好的成分分离。 控制压力0.3 1.2kg/cm2自动部分收集器2、操作：装柱 上样 洗脱 加压 收集 鉴定

31、3、特点 ：a、效果好；分离材料粒度小、均匀性好，加之恒压，使得理论塔板值增加，分离度提高。b、速度快；分离速度与压力成正比，且使用优良吸附剂，故一次可达分离目的，而常压柱层往往需几次才可分离得单体。c、应用范围广，对空气中稳定或不稳定的化合物均适用，这一点对不稳定的化合物尤其重要。4、实例 甲基还原青蒿素立体异构体的分离： 吸附剂：硅-胶H，4.58cm，压力 2kg/cm2； 洗脱剂：苯，25ml/份； 结果：15 29份b-甲基还原青蒿素49 55份a-甲基还原青蒿素（十二）高效液相层析法 第五章 提取与分离的方案的设计 已知成分查阅文献，借鉴前人方法，针对性地设计提取分离方案。 未知成

32、分系统分离，药理指标为导向，追踪分离其中的有效成分。 提取 粗分（部位分离） 分离 细分（部位分组分离） 单离一、提取7095%EtOH 除多糖、蛋白质外的绝大多数成分，无毒、价廉，b p较低H2O 绝大多数水溶性成分，强亲脂性成分出不来无毒、价廉，b p高，EtOAc、C6H6、Me2CO、Pet 提取杂质少，价格较贵，有毒二、分离1、部位分离 水中萃取 方法 连续回流提取法（拌入硅藻土） 短柱或减压层析（拌入硅胶）不同学者的部位分离法 Dragendorff Power FB Zeliner J 刹米达夫 stahl 丘晨波非极性 Pet Pet Pet Pet、C6H6 Pet Pet、

33、C6H6较非极性 CHCl3 Et2O CHCl3 CHCl3 CHCl3 Et2O Et2O Et2O Et2O 中极性 无水EtOH 戊醇 醋酸铅法 EtOAc Me2CO EtOAc EtOH MeOH n-BuOH极性 水 水 酸性水 碱性水 * 若只想重点分离中等极性成分时，可略去非极性部分，非极性部分与水溶性部分也是这样。2、部位分组分离 某些含量高并易于结晶的，在浓缩或放置的情况下，可直接析出粗晶。大部分情况下，需对不同部位成分再分组分离。非极性部位的分组分离a、直接进行层析分离，有时需要进行几次层析才可得到单体。b、分为酸性、酚性和中性三部分 非极性部位 溶于Et2O或Pet 2%Na2CO3 萃取35 次（每次约为母液的1/3） 有机层 碱水层 2%NaOH萃取3次 HCl酸化，Et2O或C6H6萃取3次