实验5 大黄中蒽醌类的提取与分离

1、大黄中蒽醌类化合物的提取与分离，导师：导师：罗，潘绍涛，吴，大黄中蒽醌类化合物的提取与分离，实验原理，2，实验材料，3，实验步骤，4，思考问题，5，实验目的，1，1，实验目的，2，实验原理，大黄(大黄的干燥根可入药，性寒味苦。它具有清热解毒、活血化瘀、泻火凉血等多种功能。大黄的主要有效成分和结构，大黄的化学成分复杂，主要是蒽醌衍生物。包括游离蒽醌、蒽醌苷、蒽酮苷、单宁等。游离蒽醌主要包括大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素和大黄酸。根据萃取分离原理，大黄中的蒽醌苷被酸水解成游离蒽醌苷元，可溶于乙醚提取。然后，利用蒽醌类化合物的不同酸度，用酸碱度梯度萃取法分离各种蒽醌类化合物。三、实验材料、设

2、备：500毫升圆底烧瓶、烧杯、滴管、橡胶管、球形冷凝器、30厘米色谱柱、样品瓶、索氏提取器、250毫升分液漏斗、布氏漏斗、吸滤瓶、普通滤纸、薄层板、喷雾器、大容量酸碱度试纸：大黄20g、碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠、浓硫酸、浓盐酸等4。实验步骤：1。研磨；2.酸水解；3.水洗、抽滤、干燥；4.索氏提取法；5.萃取结晶；6.硅胶薄层色谱法；7.纤维素柱色谱；1.粉碎，将大黄切成块，用粉碎机粉碎成大黄粗粉，过80目筛成大黄细粉。80目，2。酸水解，取20克大黄粉，加入20% h2so 4 200毫升，在70水浴中加热34小时。70，20g，3。水洗、抽滤、干燥、抽滤。滤饼洗涤至中性后，在约70下干燥

3、并研磨成粉末。真空泵，用水洗涤至中性，4。电缆萃取器，圆底烧瓶中的萃取剂被加热挥发，蒸气通过空气导管上升，在冷凝管中冷却成液体，滴入装有样品滤纸管的管中，使样品浸入纯萃取剂中。待萃取的物质逐渐从样品中溶解到萃取剂中。当样品管中萃取剂的液位逐渐上升到与回流管(虹吸管)上端齐平时，在虹吸管的作用下，被萃取的物质从一侧的虹吸管被带入烧瓶中，完成一个循环。实验装置，提取过程，滤饼干燥后，放入索氏提取器中，用150毫升乙醚提取34小时，得到乙醚提取物。注意颜色的变化。经薄层色谱初步检测，乙醚提取物中含有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。检测方法：取硅胶-羧甲基纤维素钠板，取上述乙醚提取物，

4、以石油醚(60-90)-乙酸乙酯(7: 3)为展开剂，展开干燥，在可见光下观察，可见四个黄色斑点，Rf值由大到小为大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素和大黄酸的混合物。在氨蒸汽中熏制后，斑点变红。5 .酸碱度梯度提取，取2/3乙醚提取物，放入250毫升分液漏斗中。1.大黄酸：用60毫升2.5%碳酸氢钠溶液提取三次，合并三次提取液，用浓盐酸调节ph至2-3，过滤，得到大黄酸沉淀。2.大黄素：大黄酸乙醚层用60毫升2.5%碳酸钠溶液分离提取三次。将三种提取物合并，用浓盐酸调节至pH2-3。3。芦荟大黄素：分离大黄素的醚层，继续用2.5%碳酸钠溶液60毫升提取四次，合并四次提取液，用浓盐酸调节酸碱

5、度至2-3，过滤得到芦荟大黄素沉淀。4。大黄酚和physcion :的混合物。芦荟大黄素乙醚层用0.5% 60毫升氢氧化钠溶液提取三次，合并三次提取液，用浓盐酸调至pH2-3，抽滤，得到大黄酚和大黄素甲醚的混合物。酸化和结晶，酸化后，碱液，硅胶薄层层析，薄层层析在这种方法中，吸附剂被均匀地散布到玻璃板(或硬塑料板等)上的薄层中。)，将待分析鉴定的样品溶液置于薄层的一端，然后选择合适的溶剂作为流动相(展开剂)，在封闭的层析柱中进行层析，从而达到分离鉴定的目的。在本实验中，吸附剂：硅胶CMC展开剂：石油醚(6090):乙酸乙酯7: 3，薄层制备，2g硅胶G 20ml 0.25% CMC，混合均匀，

6、取一个20cm5cm的光滑干净的玻璃片，水平放置，将制备好的硅胶G均匀涂在玻璃片上，取一根干净的玻璃棒，用拇指、食指和中指控制玻璃棒的两端，始终保持玻璃棒。调整玻璃棒的高度，使玻璃棒与玻璃板之间的距离约为1.0毫米，从上到下缓慢均匀地拉下玻璃棒。重复两到三次，直到硅层铺好(铺好的薄层可以清楚地看到玻璃板下的手指！)将硅胶板在室温下干燥30分钟，然后放入烘箱中，慢慢升温至105左右，烘烤20分钟(活化硅胶)，然后放入烘箱中备用。105活化，薄层层析，用铅笔在离硅胶板斑点端约2厘米处平行标记斑点，用毛细管取样(注意：斑点间距不应小于1厘米，斑点直径不应超过0.5厘米！)，自然风干，将1cm深的显影

7、剂倒入烧杯中，将样品片倾斜放入其中，并迅速盖上盖子。12小时后，当显影剂的前缘达到薄片34的高度时，将薄片从层析筒中取出，立即用铅笔写下显影剂的前缘，自然风干。注意事项：1。本实验的提取方法是酸水解法，即水解药材中的蒽醌苷类化合物，得到游离蒽醌类化合物，然后用连续回流2。酸水解后的滤饼必须洗涤至中性。为了节省时间，可以将第一次抽滤得到的滤饼悬浮在水中，加入10%的氢氧化钠水溶液调节酸碱度至6，抽滤后洗涤至中性。3.3 .酸碱度梯度萃取法分离羟基蒽醌是基于羟基蒽醌的不同酸度，可以溶解在不同酸碱度的碱液中。在分离时，要注意萃取次数不要太多，否则，分离的组分会混合在一起，所以最好同时使用薄层对比。碱液的酸碱度为：5%碳酸氢钠为8，5%碳酸钠为10-11，0.5%氢氧化钠为12以上。5.思考问题。1.简述大黄中五种游离羟基蒽醌