微生物平板划线试验

1、平板划线实验实习，一是培养相关基础理论细菌，一般细菌都可以用人造的方法培养，使之繁殖，可以进一步观察研究他们的各种生物学特征。 为了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，采用适当的培养基，除了考虑其他的培养条件外，掌握各种分离培养和接种的基本技术也是重要的一环。 1、培养基在土壤、水、食品、空气以及人和动物、植物中，混杂着不同种类的细菌生活。 研究其中的任何一种细菌，需要分离每种细菌，得到只含有那种细菌的纯粹培养。 细菌分离为纯种后，需要接种相关的培养基来测定各种生物科学性状，需要根据细菌在不同的培养基中培养。 1、培养基、培养基按其物理性状分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。 培养基

2、根据用途分为基础培养基、加富培养基、选择培养基、鉴别培养基。 按物理状态划分，在固体培养基、液体培养基、液体培养基中加入一定量的凝固剂制成固体状态，琼脂含量通常为1.5%-2.0%，琼脂含量通常为0.2%-0.7%，不加任何凝固剂，观察半微生物的运动特征、分类鉴定以及噬菌体效价滴定， 在大规模工业生产和实验室对微生物的基础理论和应用进行了研究，按用途分类，是基础培养基、鉴别培养基、或从混合微生物群中分离某种微生物的培养基、鉴别不同种类微生物的培养基、基础培养基中加入特殊营养物质制成的营养丰富的培养基，微生物产生某种代谢产物， 与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征变化，牛浆

3、蛋白培养基是最常用的基础培养基，加富培养基，2，常见培养基即基础培养基肉浸液培养基：一般细菌可以在该培养基内生长营养琼脂培养基：一般细菌培养是蛋白蛋白水培养基：靛蓝常见培养基，加富培养基血琼脂培养基：作为肺炎双球菌、链球菌、葡萄球菌、嗜血杆菌等的分离培养也可用于某些菌落的溶血作用的朱古力琼脂培养基：淋球菌和脑膜炎奈瑟氏菌在该培养基上生长良好，2，优选常见培养基， 选择亚硒酸盐增菌液作为培养基：沙门氏菌属属和某志贺氏菌属增菌用伊红美青琼脂：分离沙门氏菌属和志贺氏菌属细菌的Baird-Parker培养基：鉴别用于培养分离金黄色葡萄球菌的培养基三糖铁元素琼脂：用于鉴定肠道细菌的二糖铁元素琼脂：用于鉴

4、定肠道细菌的葡萄糖柠檬酸盐琼脂：鉴别大肠菌群和瓦斯气体发生剂杆菌的二、接种细菌的方法、分离混合细菌的方法有几种细菌分离为纯种后，还可以在斜坡、液体、半固体培养基上检测细菌的培养特性，因此接种方法可以相应分为4种。 表3中常见的一些细菌培养和化学基接种方法的例子，1、斜面培养基接种法常用于细菌大量繁殖、菌种保藏或对一些生化特性的观察。 琼脂、尿素、二糖、铁元素、柠檬酸等具有斜面外形的固体培养基可用此法接种。 1、斜面培养基接种法、步骤： (1)在用标记物接种的培养管上标明标记物。 (2)点燃酒精灯。(3)左手大拇哥、食指、中指及无名指分别保持与菌种接种的培养基管，使菌种管位于左侧，斜面部朝上。

5、(4)用右手大拇哥和食指捏住试管的插头，在接种时进行拔出。 (5)右手拿着接种环，在火焰上灼烧灭菌。 1、斜面培养基尺接种；(6)右手掌和小拇指、小拇指和无名指分别拔下2根试管塞夹持，对2根管口进行灭菌。 (7)将经灭菌蒸发制冷的接种放入菌种管内，从斜面上轻轻取出少量的菌苔，退出菌种管。 再放入接种的培养基中，进行斜面培养基接种，从斜面底部向前端轻轻地弯曲划线，使其不接触培养基表面。 1、斜面培养基接种法、(8)完成接种，灭菌两试管管口，堵塞试管塞子，置于原位。 再灼烧接种环，灭菌后返回试管架子。 所接种的试管在37温箱中培养，1824年观察生长状况。 1、斜面培养基接种法、图2-1斜面培养基

6、接种法、2、液体培养基接种方法，可用于观察细菌的不同生长状况，有的均匀混浊，有的沉淀生长，有的在液体表面形成菌膜。 此外，也可用于测定细菌的生化特性。 肉汤、葡萄糖蛋白胨水和各种单糖发酵管等液体培养基都用此法接种。 2 .液体培养基的接种方法，在步骤：(1)用标记接种的培养基上标明标记。 (2)与斜面培养基的接种方法相同，握住与菌种管接种的肉汤管。 (3)接种环灭菌蒸发制冷后，放入菌种导管中，内投射少量细菌，放入肉汤导管内，并在靠近液面导管壁的表兄弟处轻轻研磨，沾少量肉汤，并混合细菌。 堵塞试管后，摇动液体，使细菌在液体中均匀分布。 (4)接种完成后，将接种环灭菌后放回试管支架。 肉汤管放入3

7、7温箱进行培养，1824小时后观察生长情况。 2 .液体培养基接种方法，图2-2液体培养基接种法，3 .穿刺接种法常用于半固体琼脂、醋酸铅培养基、二糖铁元素培养基等接种，前者用于测定细菌的动力，后者用于观察细菌的生化反应。 3、穿刺接种，在步骤：(1)用标记接种的培养基上标明标记。 (2)如斜面培养基接种法，与菌种管接种，把持半固体琼脂培养基。 (3)右手拿着接种针，灭菌蒸发制冷后，用针取出菌苔，垂直刺入半固体琼脂培养基的中心，虽然接近管底，但即使不及管底，然后沿着原路退出。 (4)接种完成后，将接种针再次灭菌后放入试管支架，拧紧试管塞子，37培养1824小时后观察细菌生长情况。 3、穿刺接种

8、法、图2-3穿刺接种法、4、平板划线接种法常用于分离单一菌落，观察细菌生长情况，也可观察某些生化反应。 沙门氏菌属的各属在亚硫酸铋琼脂平板上呈黑色，而具有金属光泽的志贺氏菌属在HE琼脂大板块、SS琼脂大板块、麦康凯琼脂大板块上呈无色透明不发酵乳糖的菌落。 4、平板划线接种的接种方法，(1)在培养皿底面，用标记明确记载接种的菌名、接种者名、日期等。 4、平板划线接种法，(2)灭菌接种环点燃酒精灯，右手拿笔拿着接种环，在火焰中灼烧灭菌，首先把接种环的接种丝部分放在火焰中，在合十礼球发红甚至蔓延到金属端之后，直接灼烧金属环，然后从金属环向金属棒方向4、平板划线接种法，图2-4灭菌接种环，4、平板划线

9、接种法，(3)取菌种左手拿放金黄色葡萄球菌或大肠菌群菌液的试管，拿着接种环用右手掌和小拇指拔出试管塞子，迅速地用火焰灭菌试管管口23次。将经灭菌、蒸发制冷的接种环放入菌种管，取出接种环的菌液，退出菌种管，再次在菌种管管口用火焰灭菌23次，堵塞试管塞子，放在原来的位置。 4、平板划线接种法，(4)分离划线接种细菌(四区接种法)左手拿琼脂平板培养基(将皿盖放置在桌上的酒精灯附近)，尽量使空气中的细菌不掉落，使其直立，接近火焰。 右手拿着接种环往来于琼脂大板块的上端，涂上细菌薄膜(约占大板块的1/10 )，作为一个区。 划线时使接种环和接种平板面成3040度的角度，用手臂的力使平板表面轻快地进行往复

10、折射动作。 使琼脂大板块旋转90度，灼烧接种环，杀死环上的残留细菌，使接种环接触培养基表面进行蒸发制冷。 灭菌接种环通过薄膜进行连续平行划线(约占平板的1/5 )，将其作为两区。 4、平板划线接种法，琼脂平板旋转90度，灼烧接种环，灭菌蒸发制冷。 对灭菌接种环连续2区进行平行划线(约占平板的1/4 )，这是3区。 琼脂大板块旋转90度，接种环不再需要灭菌，连续划3区平行划线，填满大板块佝偻部分，视为4区。 各区的接种管线之间尽量不相互交接，达到细菌逐渐稀释的目的。 4、平板划线接种法，图2-5四区划线，4、平板划线接种法，4、平板划线接种法，(5)完成划线后，将琼脂平板放入皿盖，放倒培养皿，放

11、入37个温箱进行培养。 (培养1824h后取出培养皿。 观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。 三、金黄色葡萄球菌和普通大肠菌群的平板划线接种实验，1、实验内容2、实验目的3、实验用品4、实验步骤5、观察结果1、实验内容；(1)用四区划线法将金黄色葡萄球菌放在血琼脂培养基的平皿上；(2)用四区划线法接种普通大肠；(2)实验器材：酒精灯4、实验程序，参照前面介绍的四区划线法的操作程序操作，在无菌条件下培养无菌意识。 (1)标记(2)灭菌接种环(3)菌种(4)分离划线接种细菌(5)的划线完成，送到37温箱培养(6)中培养1824h，观察结果，5，观察结果，5，观察结果，(1)菌落的形态特征：大小边缘(平滑、波形、锯齿状、卷曲状等)，5，观察结果，(2)菌落溶血特征：菌落溶血有以下3种情况。 溶血：也称为草绿色溶血，是在菌落周围培养基上出现12mm的草绿色环，由高铁元素血色素引起的溶血：也称为完全溶血，是在菌落周围形成完全清晰的透明溶血环，细菌产生的溶血素使血红细胞完全溶解引起的溶血：即不溶血5、观察结果： (3)色素：部分细菌产