疟原虫的制片技术

1、疟原虫的制作技术，1，内容，(1)血片制作(2)染色，2，所需设备，幻灯片采血设备为75%酒精棉球，一次性采血针，抗凝管等标记：标签数，卫生纸写：清洁，清洁，清洁，清洁。3，样本要求，末梢全血：指尖，耳垂末梢全血，婴儿现场采血的现场制作。静脉全血：抗凝管采血。采集血液后最好立即制作。血液放置太久会影响镜子下的形态。冷冻的血不能用于制作。骨髓：可用于临床诊断恶性疟疾感染，可找出恶性疟疾大滋养体和分裂体。注：(1)使用抗疟疾药之前，要先放血。(。(2)采完血后，要尽快制作(血细胞和疟原虫的形态保存得很好)。4，血膜的种类，检查疟原虫的血膜有两种。一种是把血液涂成薄膜。这称为薄膜。一种是把血液涂成圆

2、盘的形状，这叫做厚血膜。要求：在一张幻灯片上同时制作两种又厚又薄的细胞膜！5，血膜的位置，标准血片：每张幻灯片涂厚，每张薄血膜一种方法：幻灯片平均6等分：1，2格用于贴标签。在第三格中央涂上厚厚的细胞膜。薄膜从4格前边缘到6格中间形状。血片从左到右是薄-厚-标签，6，制作厚细胞膜的方法：取一张干净的幻灯片，一张左手安装幻灯片，左手安装幻灯片平坦，大约45ul血(相当于火柴头大小)。位置：幻灯片中心位于右侧或6等分中的3格中间。形状：圆形，厚度均匀，边缘整齐。太厚，容易脱落，太薄，不能满足出库率要求。1个油镜视野中5 10个白细胞为宜。注：厚细胞膜制作完成后，必须平放，倾斜后厚度不均匀，容易脱落

3、。7，薄膜制作方法：约11.5ul的血(相当于1/4火柴头大小)位置：幻灯片左半部或4号船队到6号中部。外观：舌形，厚度均匀，无划痕。在幻灯片上形成棋盘状红细胞，红细胞徐璐不重叠，徐璐接触。注：推速度必须均匀。血滴大小、推拉和滑梯之间的角度大小、拉开细胞膜的速度等都会影响细胞膜的厚度。8，正确的推姿势，9，标准疟疾原虫血小板，10，制作时注意事项，滑动清洁无磨损幻灯片必须完全清洁。制作时，为了防止手指接触幻灯片表面，防止油垢薄的细胞膜在空白空间和厚的细胞膜脱落。(约翰f肯尼迪，Northern Exposure美国电视剧，制作)推拉的边缘必须光滑干净，这样挤出的细胞膜才能均匀，不会与边缘发生抵

4、触。(莎士比亚，哈姆雷特)刚涂好的细胞膜，要平展还没有干的厚厚的细胞膜。为了防止血液膜向一侧倾斜，血液膜的厚度变得不均匀，厚的地方不容易溶血和着色，会影响检查结果。擦干细胞膜时，要注意防止灰尘，防止苍蝇、蟑螂等昆虫吸血膜。晾干后，要及时放入标本盒，盖紧。11，制作时注意事项，细胞膜要自然干燥。在毒太阳下晒太阳或在火上烤渡边杏。加速干燥可以使手背或衣服摩擦，冷风吹。血凝块干燥后，才能用甲醇固定薄膜。细胞膜应尽可能及时地处理夏季标本24-48h内的固定染色。冬天也不能超过72h。放置时间越长，厚的细胞膜就越不容易溶血，染色效果也越差。如果不能及时染色，薄血膜应先用甲醇固定(13分钟)，然后用过滤后

5、的清水溶血厚血膜，干燥后，将盖子放在箱子里，以后再染色。12，内容，(1)血片制作(2)染色，13，染液的种类，目前临床上使用最广泛的是西氏染液和吉氏染液。推荐吉氏染液。具有方便染色效果稳定，长期保存方便的优点。徐氏染色的染色时间短，但染色效果不如吉氏稳定，主要用于门诊就诊量大的门诊实验室。14，染色前处理，无论是吉氏染色液还是徐氏染色液，染色前都要固定薄膜，厚细胞膜要进行溶血处理。薄膜固定：将皮瓣薄膜向下倾斜45度，用吸管吸出一定量的甲醇或无水乙醇固定。厚血膜溶血：在厚血膜中加入清水水滴，或将厚血膜向下插入水槽，厚血膜表面变白即可。注：(1)固定薄膜时，甲醇不要接触厚重的细胞膜。(。(2)后

6、血膜溶血后要干燥染色。否则后血膜很容易脱落。15，注：母液的稀释水使用可能的pH 7.0-7.2的缓冲液。原因：染液的pH值为7.0-7.2时，染色效果好，疟原虫的细胞质染成蓝色，疟原虫的细胞核染成红色。染液偏酸时，红细胞和疟原虫的核染成鲜红色，疟原虫的细胞质着色不好。染液碱化后，红细胞被染成紫色，很难观察。16，吉氏染液染色法，染色前处理：血凝块干燥后，先用甲醇或无水乙醇固定薄膜，然后用清水在厚细胞膜上溶解血红蛋白。(新制作的血液篇可以跳过这个阶段。染液中含有高浓度的水，在染色过程中溶血。)染液的赵霁：1毫升缓冲液或蒸馏水，2-3滴加吉氏母液；或者将母液和缓冲液按1:9的比例混合。染色法：每

7、个血小板需要约2毫升的染色液，要均匀混合染色液，在细胞膜上加入铃铛，复盖整个细胞膜，染色15-20min。然后用清水轻轻冲洗染液，晾干后进行镜子检查。17，陆毅(路)染液染色法，染色前处理：血液膜干燥后，先用清水在厚细胞膜上溶解血红蛋白，烘干厚细胞膜，然后直接染色。(这种染色方法省略了固定薄层的步骤，染色液中含有高浓度甲醇，在染色过程中固定薄层。)染液准备和染色方法：按说明书操作。18，染色注意事项，(1)滴染液时，不要让吸管接触细胞膜。否则容易产生划痕。(2)滴染液的时候，不要出现泡沫。(。否则，将影响着色。(3)不要直接扔掉幻灯片的染色液，以免残渣附着在幻灯片上，影响镜子检查。(4)冲洗染

8、液的水流必须很轻，不要冲向厚厚的细胞膜。(。否则，厚的细胞膜将直接冲洗。用冲洗的方法，从水盆中斜拉出血。(5)必须翻过来渡边杏！19，影响染色效果的因素，血片染色的好坏与幻灯片清洁度、血片制作质量、染色技术等有关，(1)染液稀释后的使用时间目前应稀释，当时使用，一般在0.5h时间内染色力最强。吉氏和徐氏染液的主要成分是由美蓝、李红、美蓝氧化生成的天青，这三种物质溶于甲醇，但在水溶液中，李红遇到美蓝和天青就会沉淀，失去染色能力。(2)染液稀释浓度染液的浓度要适中。染液浓度高，着色快，深。疟原虫寄生红细胞的舌籽点很粗，但颜色总是碱性的。染液浓度低需要染色时间长，颜色偏酸，雪氏点不明显或消失。20，影响染色效果的因素，(3)染色时间染色时间长染色效果好，反之则不好。染色时间应根据染液的稀释浓度和温度适当增减。室温高，着色快，染色时间稍短，气温低，可适当延长。(4)染色用水染色液的稀释水和染色后的清洗用水要选择pH7.0-7.2缓冲液，也可以使用新鲜蒸馏水或过滤后的冷水