2 人类性染色质小体的制备和观察

1、实验二人类性染色质小体（巴氏小体）的制备与观察,一、目的,1，掌握人类x小体（巴氏小体）玻片标本制作方法。 2，观察识别巴氏小体形态特征及所在部位，鉴定个体的性别。,二、原理,巴氏小体又称X小体：正常女性，位于间期细胞核中，紧贴核膜内缘，大小约11.5 um，呈现三角或椭圆形小体，数量为x染色体数减一。巴氏小体是由于女性两个X染色体中的一个失活形成的。 具有两个（或以上）X染色体的细胞中，不活化的X染色体所浓缩形成的紧密结构。 它会依附在细胞核边缘的核膜内侧，虽然此染色体上的小部份区域能保持着活跃的状态，但大多数的基因都是不会表现的。只有位于性腺之细胞内的巴尔氏体在进行减数分裂时会再度活化。,

2、Lyon的剂量补偿学说认为：女性有两个X染色体，但所表达的绝大部分遗传物质与只有1个X染色体的男性是一样多的。 这是因为女性的X染色体中只有1个保持活性，而另一个是晚复制的，没有活性。该失活的染色体在形态学上呈异染色体，即DNA螺旋压的很紧，染色深而致密，称之为巴氏小体。,三、实验材料,口腔粘膜细胞，毛根鞘细胞，显微镜，载玻片，盖玻片，牙签，吸管，固定液（乙醇:冰醋酸3:1），乙醇，二甲苯，卡宝品红染液,四、实验步骤,1）取材 口腔粘膜细胞：受检者清水漱口数次，用洁净牙签从女性口腔两侧刮取粘膜，原位刮23次，第1次舍去，第2，3次分别涂于干净载玻片上。 发根细胞：拔取女性带有毛囊的头发（约2c

3、m），置于载玻片上。,2）固定 口腔粘膜细胞加入新配置的固定液（95%乙醇:冰醋酸3:1），固定30min以上，空气干燥。,2）固定 毛囊细胞-拔取一根毛根比较大的毛发，在一张干净的载玻片中央滴一滴45%的醋酸，静置约5分钟，待毛根稍软后，用镊子尖把外层毛囊的组织细胞轻轻刮下，弃去毛干。将细胞用解剖针在载玻片上均匀摊平，并在空气中晾干。 实验改进意见：拿起上述发根的梢部，将其上毛囊细胞轻轻蹭于另一干净载片上即可达到转移的目的。（若用刀片或镊子将毛囊细胞刮下，可造成细胞的堆积，同样会出现多层细胞的现象。1根发根的毛囊细胞可以转移到3-4张载片上，以达到充分利用实验材料的目的。观察时又可以看到清晰

4、的单层涂布细胞，便于观察统计。）,3）染色、制片 滴加染液，室温10min（勿干）； 在95%的酒精中分色1-3分钟； 在无水乙醇中继续分色两次，每次1分钟 用二甲苯透明两次，每次约3分钟； 加盖玻片，压片。,巴氏小体为女性细胞中所特有的染色体结构，是1条X染色体呈异固缩状态所形成，各实验室所统计的观察率不尽相同，从30一50不等，有些实验室中在男性的细胞中发现X小体有2%的出现率，但小体结构不规范、典型。 巴氏小体常位于核膜内侧。直径为1m左右，其形状有微凸形、三角形、卵形、短棒形和双球形等。观察时需注意巴氏小体与细胞的比例。 正常女性细胞中仅可观察到1个巴氏小体，而正常男性细胞中无巴氏小体或仅在个别细胞中有不典型的巴氏小体存在。,箭头所示为巴氏小体（女性细胞左中存在，男性细胞右中没有）,六、注意事项,1在实验中取材时应该注意安全； 2如果用毛囊细胞进行试验，采样前应清 洗头发，因出油后拔取毛发时不易带出毛囊细胞。,程序,取材：受检者清水漱口数次，用洁净牙签从女性口腔两侧刮取粘膜，原位刮23次，第1次舍去，第2，3次分别涂于干净载玻片上。 固定：口腔粘膜细胞加入新配置的固定液（95%乙醇:冰醋酸3:1），固定30min以上，空气干燥。（固定液勿干） 染色、制片：滴