食品中铜绿假单胞菌检测PPT课件

1、. 1、銅綠假單胞菌、2、一、概括地说，銅綠假單胞菌(P. aeruginosa )俗称銅綠假單胞菌，在代谢过程中产生水溶性绿色素，使伤口和创面呈绿色，故命名为銅綠假單胞菌。 銅綠假單胞菌能够在众多污染物中生存和繁衍生息，生长营养需求不高，善于利用各种碳源和阿摩尼亚化合物作为氮气源，广泛存在于水、土壤、食品及医院等环境中，连蒸馏水、消毒液都不例外，例如季铵类消毒液，特别是含有有机物的液体。3、銅綠假單胞菌可以通过多种方式传播，主要是污染医疗器械、器械和带菌医疗从业者，引起压电石英原性感染，应对烧伤病房、手术器械和治疗器械进行严格消毒灭菌，保证无銅綠假單胞菌污染。 庆大霉素、多粘菌b和羧基苯偶酰

2、青霉素可用于治疗銅綠假單胞菌感染。 銅綠假單胞菌与其他革兰氏阴性细菌相比抵抗力强，561h即可杀菌，多数抗生素均有耐受力。 对消毒剂、干燥、紫外辐射等理化因素及不良环境抵抗力强，化学药物抵抗力强于一般革兰氏阴性细菌。 培养特性本菌属假单胞菌属，非发酵革兰阴性无芽胞杆菌，菌体细长长度不同，有时呈俱乐部状或线状，排列成对或短链状。 菌体一端有单鞭毛，在暗视野显微镜或相差显微镜下观察到细菌活动活跃。 2菌体形态无芽胞，不夹膜，有革兰氏阴性杆菌、单鞭毛或丛鞭毛，运动活跃。 菌体大小为0.51m1.53.0m，菌体为直溜溜或哩溜歪斜。5、3、生化特性氧化酶催化剂和过氧化氢酶阳性。 O/F试验为氧化型，还

3、原硝酸盐分解亚硝酸盐、乙酰胺，产生阿摩尼亚。 98菌株产生水溶性荧光色素。 銅綠假單胞菌可以液化动物胶，水解作用干酪素，但不水解作用淀粉。 90多个菌株产生青绿色素。 分解蛋白质能力强，氧化分解发酵糖类能力低，氧化分解葡萄糖，不产生酸的瓦斯气体发生剂，不分解甘露醇，乳糖和蔗糖，也可以液化动物胶，分解尿素，不产生吲哚，氧化酶催化剂试验阳性，硝酸盐瓦斯气体发生剂，印度基质阴性，硫化氢。6、3、致病性的主要病原物质是内毒素，以及其他菌毛、荚膜、胞外酶和外毒素等多种病原因子。 局部化脓性炎症，可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎、胃肠炎、心内膜炎、脓胸，引起菌血症、败血症及婴儿严重流行性拉肚子。 WHO的HA

4、CCP评价明确指出，銅綠假單胞菌是婴儿瓶装饮用水的危害指示菌，可能引起婴儿拉肚子。 特别是抵抗力弱的老年人的小盆友们，饮用含有銅綠假單胞菌的瓶装水很有可能招致疾病的发生，患者食用103104个菌体细胞球之后会受到侵害。 关于銅綠假單胞菌的成长，亚硝酸盐的含量也增加的参考文献。7、国内外污染状况-参考文献国内污染状况： -瓶装天然矿泉水铜绿假单细胞菌的检出率1.223.6瓶装饮用纯水銅綠假單胞菌的检出率为11.6。 国外污染情况：-Richards等人报道，104件检测品中有4件被分离为铜绿假单细胞菌-Rosenberg，德意志1.210.2瓶装矿元素水检测出铜绿假单细胞菌。 在刚刚商品发货的产

5、品中，銅綠假單胞菌的数量很少，但据文献报道，5加仑的桶装产品(1531天的储存期间)，銅綠假單胞菌的生长繁殖可以达到CFU/ml。 国内卫生标准：0 CFU/250mL，8，3，实验室检查，GB/T 8538-2008銅綠假單胞菌检查(过滤法)，9，原理是用孔径0.45m的过滤烟嘴过滤250ml的水样。 或者可以在CN琼脂上生长，氧化酶催化剂在阳性、紫外线(36020nm )照射下发光，能够利用乙酰胺产阿摩尼亚的革兰氏阴性杆菌，确认为銅綠假單胞菌，其检测结果是阳性。培养基和试剂假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂(低温遮光保存)金氏b培养基(低温遮光保存)乙酰胺肉汤营养琼脂氧化酶试剂纳米金属钍试剂

6、(制备后低温遮光保存)、 设备和仪器玻璃仪器：使用所有玻璃仪器前121高压蒸汽灭菌15分恒温孵化机： 361紫外线灯管：波长为36020nm过滤烟嘴：直径47mm，孔径0.45 (处理方法：如果过滤烟嘴未经灭菌，使用前将过滤烟嘴放入烧杯，加入蒸馏水，放入沸水浴，最初2次煮沸后更换水推荐使用一次性物品无菌过滤烟嘴。 显微镜： 10100冰箱： 08、12、13、14、操作步骤-水样过滤在100级洁净台中进行过滤操作。 首先，用无菌的大头针定径套取出除菌过滤器的边缘部分，使粗糙面朝上，粘贴到灭菌完毕的滤床上，固定过滤器，用孔径0.45m的过滤膜过滤250mL的水样或稀释液，粘贴到调制了过滤膜的CN

7、琼脂平板上，使过滤膜和培养基之间不夹有气泡。 观察培养20h24h，观察和修正过滤烟嘴上菌落生长情况，防止培养过度生长菌落融合。 (40h48h更容易观察色素发生状况和荧光状况)。18、19、20、21、可疑菌落校正数情况校正了所有显蓝色或绿色(绿脓色素)菌落，初步判定为铜绿假单胞菌。 订正过滤烟嘴上发出荧光的绿脓色素怀疑銅綠假單胞菌菌落，进行乙酰胺肉汤的确定试验。 (在紫外辐射下检查过滤烟嘴膜时，请勿长时间在紫外线下照射。 否则平板上的菌落会死亡，有可能无法在培养基上生长。 对其他不发出红褐色荧光的菌落全部进行了氧化酶催化剂试验、乙酰胺肉汤、金氏b培养基实证试验。 纯化营养琼脂：在营养琼脂培

8、养基上划分应验证的可疑菌落，361培养20h24h，纯化可疑菌。 对呈现红褐色的菌落进行氧化酶催化剂试验、氧化酶催化剂试验：原理：氧化酶催化剂(细胞色素氧化酶催化剂)是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。 具有氧化酶催化剂的细菌首先氧化细胞色素c，接着利用氧化细胞色素c氧化乌尔兹，生成有色醌系化合物。 操作：将新鲜调制的23滴氧化酶催化剂试剂滴在放在碟子里的洁净滤纸上。 用白金合十礼棒接种戒指和玻璃棒，在准备的滤纸上涂抹适量的纯粹培养物。 将10秒以内呈现深蓝色紫色的视为呈阳性。 也可以按照商品化氧化酶催化剂测试产品的说明书进行这个测试。26、产阿摩尼亚实验(乙酰胺肉汤)原理：銅綠假單胞菌产生脱酰

9、胺酶催化剂，使乙酰胺在脱酰胺作用下释放阿摩尼亚，滴加纳金属钍试剂(碘化汞钾元素)，阿摩尼亚在碱条件下与碘化汞钾元素作用，生成红色配合物。 操作：将纯培养物接种装有乙酰胺肉汤的试管中，361培养20小时。 然后，在各试管培养物中加入12滴纳金属钍试剂，检查各试管的阿摩尼亚发生状况，如果显示从深黄色向砖红色的颜色变化，则得到阳性结果，否则为阴性。 (金氏b培养基)原理：蛋白胨提供氮气源，磷酸盐促进萤光素生成，抑制绿脓色素生成，硫酸镁提供生成萤光素所需的阳络离子，而琼脂则是培养基凝固。 操作：将上述红褐色的氧化酶促反应阳性的培养物接种金氏b培养基，以361恒温箱培养24h5d。 每天在紫外灯下检查是

10、否发生荧光性，将5d内发生荧光的菌落记录为阳性。 校正数结果说明菌落校正数公式： NPF(cF/nF)R(cR/nR) P呈蓝色/绿色的菌落数(所有实证均为銅綠假單胞菌的菌落)。 f是没有绿脓色素但显示荧光的菌落数。 r是呈现红褐色的菌落数。 nF是进行了阿摩尼亚生成试验的荧光菌落数。cF是阿摩尼亚生成阳性的显荧光菌落数。 nR是在阿摩尼亚、氧化酶催化剂、金氏b培养基中进行荧光检查的红褐色菌落数。 cR为阿摩尼亚、氧化酶、金氏b培养基中荧光测量全部为阳性的红褐色的菌落数。 31、例N=17 16(2/5) 10(3/5) 17 :呈蓝色/绿色的菌落数。 16 :没有绿脓色素但显示荧光的菌落数2 :阿摩尼亚生成阳性的显荧光菌落数5 :进行阿摩尼亚生成试验的显荧光菌落数10 :呈现红褐色的菌落数3 :在阿摩尼亚、氧化酶、金氏b培养基上荧光检查全部呈现阳性的红褐色菌落数5 :在