细胞化学染色检验课件

1、细胞化学染色，1。目的了解过氧化物酶染色的原理、方法、注意事项及临床意义。原理(四甲基联苯胺法):粒细胞和一些单核细胞的溶酶体颗粒含有过氧化物酶(POX)，它能将四甲基联苯胺(TMB)的氢离子转移到H2O2中，并将其氧化成四甲基联苯胺蓝。四甲基联苯胺蓝可与亚硝基铁氰化钠结合，然后氧化形成稳定的蓝色颗粒，位于细胞质酶的位置。在没有亚硝基铁氰化钠的情况下，四甲基联苯胺蓝被脱氢并氧化成棕色的四甲基苯醌二胺，该二胺沉积在酶位点。1、学会沟通PPT、取1毫升0.1TMB乙醇溶液，加入10l饱和的亚硝基铁氰化钠溶液，溶液呈浅棕黄色。使用前应准备好染色溶液。在新鲜干燥的涂片中加入0.5毫升0.1毫巴-亚硝基

2、铁氰化钠饱和溶液的混合试剂，静置1分钟，然后加入0.7毫升稀释过氧化氢溶液，吹匀并染色6分钟。直接用自来水冲洗，直到它变干，然后用莱特染料溶液再染色1520分钟。用自来水冲洗后，等待干燥，并用油镜检查。结果胞浆中出现蓝色或蓝黑色颗粒为阳性反应。尹：没有粒子。弱阳性：分布稀疏的小颗粒。杨：颗粒稍粗，分布较密。强阳性：颗粒较厚，密集分布于整个细胞质中。方法和步骤。学会沟通PPT，注意事项、涂抹应新鲜制作，厚度适当。TMB制剂在8588乙醇溶液中有很好的染色效果，所以不要使用9095乙醇，否则细胞表面的蛋白质会很快凝固，这将阻碍试剂渗透到细胞中，减弱或消失显色反应。过氧化氢溶液需要新鲜配制，其浓度和

3、添加量不能随意改变。涂片上粒细胞没有阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，这意味着过氧化氢浓度过高。如果过氧化氢没有在血液切片上产生气泡，它是无效的。染色溶液的适宜酸碱度应为5.5。如果酸碱度为5.0，将出现假阳性结果。试剂应放置在低温和黑暗的地方，以防止光照射失败。染色时加入稀释过氧化氢溶液后，必须与染色液充分混合，否则，同一膜上的细胞染色情况不一致。3、学会交换PPT、临床意义、POX染色是区分急性髓系白血病(AML)、急性单核细胞白血病(AMOL)和急性淋巴细胞白血病(ALL)的重要细胞化学染色方法。在急性髓系白血病中，白血病细胞可呈阳性反应，阳性颗粒一般越来越厚，往往呈局部分布；白血病细胞呈阴

4、性反应。在AMOL，白血病细胞呈阴性或弱阳性反应，而在阳性病例中，颗粒稀疏、小且分散分布。4。学会交流PPT和高碘酸盐-希夫反应。目的了解高碘酸盐-希夫反应的原理、方法、注意事项及临床意义。原理：周期酸希夫反应，也称为糖原染色。其原理是高碘酸盐能氧化细胞中含有1，2-二醇基团的糖，产生二醛基团，二醛基团与席夫碱染料反应，将无色的品红变成紫红色的化合物，紫红色的化合物位于含有多糖的细胞质中。根据细胞质中糖原的类型和含量，可以显示不同厚度的红色颗粒、团块或均匀的红色。5，学会交流PPT，方法和步骤，新鲜和干燥的涂片用95%乙醇固定10分钟，用流动水洗涤，然后晾干。加入10g/L高碘酸盐氧化1520

5、分钟，用蒸馏水冲洗，干燥。在谢弗染料溶液中于37(或室温)染色3060分钟。用亚硫酸溶液冲洗3次，然后用自来水冲洗23分钟，然后晾干。20克/升亚甲基绿复染1020分钟。用水清洗，干燥，显微镜检查。结果：如果胞浆内有弥漫性、颗粒状或块状红色，则为阳性。细胞质是无色或颗粒状的，这意味着糖原阴性。反应强度的判断标准如下。学会交流PPT、(1)中性粒细胞分级标准：0分，细胞质无色。1分钟细胞质带红色，很少4分钟的细胞质呈深紫红色，颗粒致密，无空隙。(2)淋巴细胞分级标准：0在细胞质中无色。1分钟细胞质是弥漫的和红色的或有一些细颗粒(10)。2裂殖子的细胞质是红色的，有很深的分散或有许多细小的颗粒。细

6、胞质中有粗颗粒或少量红色物质。在4分钟的细胞质中发现大多数粗颗粒和大红色物质。(3)幼红细胞分级标准：0分，细胞质无色。1分钟的细胞质中有少量分散的细小颗粒或淡红色的弥散物质。两部分细胞质中有12个致密颗粒或细胞质呈弥漫性红色。在三细胞细胞质中有粗糙的红色颗粒到红色物质的小片。四细胞胞质中有浓稠的红色块状或浓稠的紫红色颗粒。(4)巨核细胞的分级标准：0分钟时细胞质中无红色颗粒，但仍呈弥散色，这是其他多糖。1.少量糖原内含体，通常位于核膜附近。2.中等糖原包涵体位于核膜或分散在细胞质中，约占细胞质的1/3。3.大量糖原包涵体分散在细胞质中，占细胞质的1/2。四点糖原包涵体充满了整个细胞质。8、学

7、会沟通PPT、染色所用的缸和器皿应非常干净和干燥。希夫染料溶液应存放在避光的密封冰箱中，可在4小时内保存6个月。试剂应该是无色的，如果变成红色，就会失效。10g/L周期酸溶液的质量应得到保证，但当其变黄时不能使用。氧化时间应该准确，最好是20分钟。染色时间和温度应相对恒定，最佳染色时间为3730分钟。染色后的污迹应及时检查，以免褪色。焦亚硫酸钠易分解，周期酸易潮解，应密封、干燥、贮存。碱性品红的质量对实验结果有影响。注意事项。学会沟通PPT、红细胞疾病、红白血病和贫血类型的识别：当红细胞疾病、红白血病、缺铁性贫血、重型地中海贫血和骨髓增生异常综合征时，年轻红细胞表现出强烈的阳性反应；在溶血性贫血、急慢性白血病和淋巴瘤中，年轻红细胞呈阴性反应或弱阳性反应；在再生障碍性贫血和巨幼细胞性贫血中，年轻红细胞呈阴性反应。白血病类型的鉴别：急性髓系白血病原