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文档简介

1、紫外分光光度法测定蛋白质含量,实验目的,学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。 掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术。 掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。,本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量。蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280 nm附近（不同的蛋白质吸收波长略有差别）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度的关系服从朗伯-比耳定律。,280nm,275nm,实验原理,实验预习,预习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。 预习紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验步骤。 了解TU-

2、1901紫外-可见分光光度计的主要构造。,TU-1901紫外-可见分光光度计，比色管，吸量管 标准蛋白质溶液：5.00 mg.mL-1溶液 0.9% NaCl溶液，待测蛋白质溶液,仪器与试剂,1. 启动计算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器。 2. 在工作界面上选择测量项目（光谱扫描，光度测量），本实验选择光度测量，设置测量条件（测量波长等）。 3. 将空白放入测量池中，点击START扫描空白，点击ZERO校零。 4. 标准曲线的制作。,基本操作,实验步骤,1. 标准曲线的制作 ： 用吸量管分别吸取1.0 、1.5、 2.0 、2.5 、3.0 mL 5.00 mg.mL-1标准蛋白质溶液于5只10 mL 比色管中，用0.9% NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1 cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液为参比，在280 nm处分别测定各标准溶液的吸光度A280，记录所得读数。 2. 样品测定： 取待测蛋白质溶液3 mL，按上述方法测定280 nm处的吸光度。平行测定三份。,1. 以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 2. 根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。,数据处理,注意事项和问题,1. 紫外吸收法与Folin-酚

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