红曲菌株的分离纯化和鉴定

1、红曲菌株的分离纯化和鉴定 【摘要】目的对红腐乳中的红曲菌进行分离纯化和鉴定。方法根据红曲菌嗜酸、耐乙醇的生长特性，用含乙醇的麦芽汁、含乳酸的大米培养基分离红腐乳汁中的红曲菌，并用对数稀释平板法进行纯化。纯化后的红曲菌显微观察确定其属别。依照其在MEA培养基上25培养的菌落形态特征鉴定到种。结果从红腐乳中分离的两个菌株经鉴定M-1属丛毛红曲菌(M.pilosus)，M-3属红曲红曲菌(M.anka)。结论红腐乳中分离的纯培养为红曲属真菌。 【关键词】红曲菌;分离;纯化;鉴定 红曲菌隶属真菌界(Eumycophyta)子囊菌门(Asycota)真子囊菌纲(Euasycetes)散子囊菌目(Euro

2、tiales)红曲菌科(Monascaceae)红曲属(Monascus)1，具有防腐，解毒;消食活血、健脾燥胃之功效2。我们根据红曲菌嗜酸、耐乙醇的生长特性1，对市售红腐乳中的红曲菌进行分离纯化，并对它们进行了形态学鉴定，为进一步发掘红曲菌生物资源做了有益探索。 1材料和方法 1.1实验材料 (1)原料：市售红腐乳、大米、琼脂粉、乙醇、乳酸，麦芽浸出粉(maltextract)。(2)麦芽汁：麦芽浸出粉3g，蒸馏水100ml，PH3.54.0，分装5ml/管，每管加95%乙醇2滴。(3)大米培养基大米10g，蒸馏水15ml，1%乳酸40ul。(4)麦芽汁培养基麦芽浸出粉6g，琼脂粉4g，蒸馏

3、水200ml，PH5.06.0。(5)麦芽提取物琼脂(maltextractagar，MEA)培养基麦芽浸出粉2g，蛋白胨0.1g，葡萄糖2g，琼脂粉1.5g，蒸馏水100ml，PH6.0。 1.2方法 1.2.1分离 无菌条件下，红腐乳汁经2层纱布过滤，取0.1ml滤液于5ml麦芽汁，一式3管，空白对照1管。32培养，观察。挑取麦芽汁上长出的红色菌体少许，置于大米培养基中，一式3皿，空白对照1皿。32培养，观察。 1.2.2纯化 从大米培养基上挑取红色菌体少许于1ml无菌生理盐水(NS)中，用对数稀释平板法3，4获得纯培养。 1.2.3鉴定 取纯化后的红曲菌种，点种到MEA培养基32培养成熟

4、。在载玻片上滴加一滴蒸馏水，用解剖针挑取少许菌丝，用50%乙醇浸润，再用蒸馏水清洗一下，然后放入载玻片上的液滴中，仔细地用解剖针将菌丝分散开来，盖上盖玻片(勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片)，制成水浸标本片，用显微镜观察。取纯化后的红曲菌种，点种到MEA培养基25培养，观察红曲菌落大小、形态、色泽，气生菌丝的产生情况。 2结果 2.1分离 接种红腐乳汁的麦芽汁在34d后可见白色团状菌丝，7d后菌丝转为红色，培养液亦呈红色，而CK管中始终无菌体生长。3d后，接种分离菌的大米培养基上有微量无色菌体生长，6d后菌落明显，呈白色，7d后菌落长大，粉红色，8d后菌落更大，红色。 2.2纯化 将大米培养基

5、的真菌稀释液涂布于麦芽汁平板培养后发现菌体生长良好、无杂菌，并出现明显的单菌落，编号为M-1M-3。 2.3形态学鉴定 显微镜观察所分离的菌丝具不规则分枝，多核，有横隔，含油滴，透亮或有深浅不一的红、褐色色素，分生孢子着生在菌丝及其分枝的顶端，孢子单生或链状，闭囊壳球形，有柄(图1)。 纯化后的M-1菌株点种到MEA培养基，25培养，初期为圆形白色小菌落，7d后菌落圆形，直径28mm，米色，气生菌丝丛毛状，菌落背面红色，有放射状条纹(图2)。 纯化后的M-3菌株接种到MEA培养基，25培养，菌落初期为圆形，白色，7d后菌落直径8mm，铁锈色，中间裂开，边缘较整齐，质地致密;25d后，菌落直径22mm，深锈色，中间隆起，裂开，边缘有缺刻，无气生菌丝，菌落背面深赭色，有放射状条纹(图2)。 3结论 红腐乳汁接种到含乙醇的麦芽汁中长出的菌产红色色素、菌丝致密、成团生长，初步判断为红曲菌，再用含乳酸的大米培养基筛选祛除杂菌。这与红曲菌的生态习性有关，同时也证实了在PH2.5和高达10%乙醇的培养条件下一般只有红曲菌才能生长。将分离菌株的显微形态特征与红曲菌(Monascus)的属征1相对比，两者基本吻合，进一步证实我们所分离的纯培养M-1、M-3确为红曲属真菌。将纯化后的分离菌株点种到MEA培养基，25培养，观察其菌落生长形态特征，对照李钟庆等的红曲菌属分类检索表1，将M-1菌株鉴