临床分子生物学检验总

1、四个阶段：首先，以导致遗传病的基因突变位点为靶点，以dna分子杂交为核心第二，以聚合酶链反应技术为核心第三，以生物芯片为核心第四，以基因测序技术为核心广义：分子标记包括基因组脱氧核糖核酸、各种核糖核酸、蛋白质和各种代谢物临床分子生物学试验的主要目标是核酸(脱氧核糖核酸和核糖核酸)基因组dna是临床分子生物学测试中最常用的分子靶标病原生物基因1。菌种鉴定：聚合酶链反应-测序和聚合酶链反应-脱氧核糖核酸探针杂交；缩短检测时间2.确定病毒感染和病毒载量：识别传染源，判断病情，监测疗效3.病毒分析：基因型变异会产生不同的临床症状4.细菌耐药性监测和分子流行病学调查：随机扩增多态性dna；指导治疗方案的

2、选择，以控制病原菌的传播基因变异1。致病基因的分子缺陷。线粒体基因过程3。肿瘤相关基因单基因疾病。致病基因的结构发生了改变，从而影响了编码产物的数量和质量，如血红蛋白病、血友病、杜氏肌营养不良等。2.致病基因中的核苷酸三重重复序列高度扩增，如脆性x综合征、亨廷顿氏病、强直性肌营养不良等。基因多态性用于：1 .基因定位和疾病相关性分析；2.疾病诊断和遗传咨询；3.多基因疾病研究；4.器官移植匹配与个体识别循环游离核酸检测(包括游离脱氧核糖核酸和游离核糖核酸)用于产前诊断、恶性肿瘤早期诊断和病例检测临床分子生物学检测技术主要包括分子杂交技术、聚合酶链反应技术、基因测序技术、芯片技术、双向电泳技术和

3、生物信息学技术分子生物学检测技术可用于微生物感染的诊断、感染性病原体的分型和耐药性监测。分子生物学检测技术有利于临床上遗传性疾病的早期预防、早期诊断和早期治疗。重要的国际生物信息学中心：1。国家生物技术信息中心(ncbi)，2。欧洲生物信息学研究所(ebi)，3。日本国家遗传学研究所(ddbj)第一级核酸数据库是基因银行、embl和ddbj；蛋白质序列数据库中有瑞士-prot、pir、uniprot等。蛋白质x光晶体三维结构数据库包括pdb等。常用的蛋白质数据库有瑞士-prot、pir和pdb数据库。有许多二级数据库，如gdb、transfac、scop等。* *检测乙型肝炎病毒核酸的常用技术

4、：1。通用聚合酶链反应技术2。荧光定量聚合酶链反应技术。支链脱氧核糖核酸技术。核酸杂交技术。混合捕获系统6。基因芯片技术*hbv基因分型方法：1。rflp 2号。rbd 3号。elisa 4。基因芯片人乳头瘤病毒基因组结构：人乳头瘤病毒是一种双链闭环分子，基因组可分为三个部分：早期区(e)、晚期区(l)、长控制区或上游调控区或非编码区。* * *人乳头瘤病毒基因检测和基因分型：1。核酸杂交技术(主要包括核酸印迹、原位杂交、杂交捕获等技术。目前常用的有hc 技术、核酸杂交和聚合酶链反应。具有很强的特异性和分型性)。聚合酶链反应技术已经成为人类乳头瘤病毒感染最常用的检测方法之一。目前常用的有通用引

5、物聚合酶链反应和实时定量聚合酶链反应。1.聚合酶链反应是根据不同人乳头瘤病毒亚型具有共同保守序列的特点设计的通用引物，可以高灵敏度扩增人乳头瘤病毒核酸，检测10-400份人乳头瘤病毒。在聚合酶链反应的基础上，建立了检测人乳头瘤病毒核酸的巢式聚合酶链反应和巢式多重聚合酶链反应。提高了检测灵敏度和多重感染率。2.实时定量聚合酶链反应，可实现人乳头瘤病毒核酸的定量快速检测。基因；e6和e7可以被商业产品检测到。hpv16、18、31、33和45型。检测灵敏度高，但设备昂贵，操作繁琐，不适合大规模筛查宫颈癌。3.基因芯片技术(基因芯片可以对人乳头瘤病毒进行分类，诊断多种感染，适用于高通量的人乳头瘤病毒

6、筛查)。流动荧光液体核心技术5。飞行时间质谱技术的临床意义：(1)宫颈疾病风险预测(2)疗效评价和术后随访(3)预防控制和疫苗开发。* *在hiv-1基因组中，gag、pol和env是编码病毒核心蛋白(gag)、聚合酶(pol)和外膜蛋白(env)的结构基因。六个基因，包括vpr、rev、vif、tat、vpu/vpx和nef，是调节基因，编码调节蛋白和辅助蛋白。核酸序列依赖扩增(nasba)是一种等温技术，用于扩增核糖核酸，它可以直接扩增单链核糖核酸特异性序列。通过合成cdna，序列特异性核酸可以在体外等温条件下扩增。nasba需要amv逆转录酶、核糖核酸酶h和噬菌体t7rna聚合酶。nas

7、ba分为两个阶段：非循环阶段(模板核糖核酸与引物一互补)和循环阶段(转录反义核糖核酸与引物二互补)流感病毒核酸检测：主要包括逆转录聚合酶链反应、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应、基因芯片、逆转录环介导等温扩增等。结核分枝杆菌核酸： 1的检测。聚合酶链反应2。实时聚合酶链反应3。rflp 4号。线性探针杂交(lpa) 5。链替代扩增技术(sda) 6。结核分枝杆菌直接扩增试验7。基因芯片技术。基因专家自动组合检测平台结核分枝杆菌耐药性检测：(1)基因测序(2)聚合酶链反应-sscp (3)聚合酶链反应-rflp (4)聚合酶链反应-rdb (5)基因芯片技术淋病奈瑟菌核酸： 1的检测。聚合酶链反应

8、2。实时荧光定量聚合酶链反应。连接酶链式反应4。连续替代扩增淋球菌的主要耐药基因为：(1)gyra和parc基因(2)pen a和pona基因(3)porb基因(4)mrt系统调节基因(5)erm基因淋病奈瑟菌：耐药性检测的分子生物学技术(1)基因测序(2)聚合酶链反应-sscp (3)聚合酶链反应-rflp (4)基因芯片技术*医院内细菌感染常用分子生物学检测技术： 1。脉冲场凝胶电泳被认为是菌株分子分型的“金标准”。rflp 3号。扩增限制性片段长度多态性分析。重复序列聚合酶链反应5。随机扩增多态基因技术。多位点测序分型白色念珠菌的分子生物学检测：1 .聚合酶链反应、普通聚合酶链反应、实时

9、聚合酶链反应、巢式聚合酶链反应和多重聚合酶链反应等。2.聚合酶链反应-点杂交，3。dna指纹技术，包括rflp、随机扩增多态性分析(radp)、电泳核型分析等。4.聚合酶链反应，5。脱氧核糖核酸序列分析，6。基因芯片技术新生隐球菌的分子生物学试验：1 .聚合酶链反应2。斑点杂交3。聚合酶链反应-rflp沙眼衣原体的分子生物学检测：1 .聚合酶链反应2。连接酶链式反应3。脱氧核糖核酸序列分析肺炎衣原体的分子生物学检测：聚合酶链反应、实时荧光定量聚合酶链反应、巢式聚合酶链反应和竞争聚合酶链反应肺炎支原体的分子生物学检测：1 .聚合酶链反应2。核酸杂交，探针包括特异性dna片段探针、合成寡核苷酸探针

10、和全dna探针。点杂交是常用的。3.聚合酶链反应-rflp梅毒螺旋体的分子生物学试验：1 .聚合酶链反应2。核酸杂交3。聚合酶链反应-rflp分子生物学检测可早期诊断梅毒感染，及时治疗，防止疾病恶化和传播。此外，它还是耐药性基因分析和流行病学研究的首选。弓形虫dna有三种主要形式：染色体dna、线粒体dna和细胞质dna。用分子生物学技术检测了弓形虫的主要基因，包括b1基因、p22基因、p30基因、p43基因和杆状蛋白1。分生组织检测：1 .聚合酶链反应主要检测b1基因和p30基因。2.点杂交-珠蛋白合成障碍性贫血1的分子生物学试验。聚合酶链反应2。southern杂交3。聚合酶链反应4。ss

11、cp 5 .缺口聚合酶链反应-珠蛋白再生障碍性贫血的分子生物学检测：聚合酶链反应-rdb法、聚合酶链反应-rflp法、基因芯片法、聚合酶链反应-天冬氨酸法、聚合酶链反应-天冬氨酸法血友病b分子生物学检测：直接检测方法包括southern印迹杂交、基因测序、基因芯片和毛细管电泳；间接检测方法包括rflp、sscp、变性梯度凝胶电泳(dgge)、双脱氧指纹图谱和变性高效液相色谱(dhplc)。脆性x综合征的分子生物学检测：(1) southern印迹杂交；(2)聚合酶链反应；(3)微卫星序列分析。通过fmr-1基因突变的分子诊断，进行患者鉴定、携带者筛查、产前诊断和人群筛查。肿瘤相关基因：原癌基因

12、、肿瘤抑制基因、细胞周期调控基因、凋亡基因和维持细胞基因组稳定的基因等。细胞周期调节基因：细胞周期蛋白、细胞周期蛋白依赖性激酶(cdks)、cdk抑制因子(ckis)和其他蛋白如细胞周期检查点凋亡相关基因可分为三类：凋亡促进基因、凋亡抑制基因和凋亡过程中表达的基因。p53是一种被广泛研究的肿瘤抑制基因，它与肿瘤的发生和发展有着明确的关系。大多数肿瘤伴有p53基因突变。与乳腺癌发生发展密切相关的基因(位于17号染色体长臂上)有brca1、brca2、tp53、c-erbb2、c-myc、p53、bcl-2、bax、iaspp、atm、mdm-2和pten等乳腺癌的分子生物学检测：1。雌激素受体(

13、er)和孕激素受体(pr)检测(免疫组织化学)2.c-erbb-2/her2检测(免疫组织化学、荧光原位杂交)3 .ps2探测4号。ki67检测5。乳腺癌复发基因检测(基因芯片技术、多基因逆转录聚合酶链反应定量检测技术)遗传性结直肠癌相关基因：结直肠腺瘤性息肉病基因、错配修复基因、微卫星异常微卫星异常主要表现为：微卫星不稳定性；微卫星杂合性缺失。结直肠癌的分子生物学检测：1 .筛选1。hnpcc 2。微卫星异常检测3。apc基因突变4的检测。dcc基因突变5的检测。脱氧核糖核酸甲基化的检测。结直肠癌个体化治疗的检测白血病相关基因突变：c-kit，flt3，npm，n-ras，notch1白血病

14、相关基因异常表达：wt1，hox11，白血病融合基因。(wt1可作为无特异性分子异常的急性髓系白血病微小残留白血病的理想检测指标)白血病的分子生物学检查：荧光原位杂交、聚合酶链反应、逆转录聚合酶链反应和实时定量聚合酶链反应(荧光原位杂交适用于许多临床标本，但其灵敏度不如聚合酶链反应，主要用于初诊和复发的检测。(线粒体12srrna基因的a1555g和c1494t突变是氨基糖苷类抗生素耳毒性的主要分子致病基础。t7511 c(ucn)等突变与非综合征性耳聋相关。而trnaleu(uur)a3243g等突变可导致综合征性耳聋。耳聋相关mtdna突变的检测：1 .rflp 2号。dhplc 3。dn

15、a测序。基因芯片有rflp聚合酶链反应、sscp聚合酶链反应、dhplc聚合酶链反应、脱氧核糖核酸测序、荧光定量聚合酶链反应、砷聚合酶链反应、基因芯片等方法来检测与lhon相关的mtdna突变位点trnaleu(uur)a3243g仍然是唯一国际公认的导致糖尿病的线粒体突变线粒体糖尿病的分子生物学方法包括聚合酶链反应-dhplc、聚合酶链反应-rflp、聚合酶链反应-测序、荧光定量聚合酶链反应、基因芯片等。染色体结构异常类型包括缺失、重复、倒位、等臂染色体、环状染色体、易位等。常见的染色体疾病分子生物学检测技术：鱼类、mlpa、降钙素基因相关肽和非侵入性产前染色体疾病分子生物学检测技术药物相关基因的分类：药物靶向相关基因、药物代谢酶基因(cyp450、n-乙酰转移酶)和药物副反应相关基因植入前基因诊断(pgd):聚合酶链反应及其相关技术、多色荧光原位杂交、全基因组扩增和基因芯片已相继应用于pgd。pgd首先应用于性别