免疫分析技术.ppt

1、免疫分析法概述免疫是指机体识别和排除进入人体内的抗原性异物的保护性应答反应。 从本世纪50年代开始，首先应用于体液大分子物质分析的1960美国学者Yalow和Berson等开辟了放射免疫分析方法的先河，同年Oliver开辟了用免疫分析法检测小分子药物的新领域。 免疫分析法，原理：对半抗原或抗体进行标识牌，利用标识牌物质的生物或物理或化学扩增作用进行工作，收集测定的高灵敏度和抗体反应强的专一性。 优点：操作简单、快速、灵敏、专一性强、廉价，样品需求量少，免疫分析方法、非标识牌免疫分析技术、标识牌免疫分析技术、免疫扩散、免疫阳离子电泳、标识牌免疫分析技术、标识牌免疫分析技术、标识牌免疫分析技术、胶

2、体金免疫技术发光免疫技术免疫电泳、免疫分析方法， 金胶体免疫技术发光免疫技术铁蛋白免疫技术荧光免疫技术放射免疫分析酶催化剂免疫分析、免疫阳离子电泳、免疫分析方法、金胶体免疫技术发光免疫技术铁蛋白免疫技术荧光免疫分析酶催化剂免疫分析、免疫阳离子电泳、 免疫分析方法金胶体免疫技术发光免疫技术铁蛋白免疫技术荧光免疫技术放射免疫分析酶催化剂免疫分析、免疫阳离子电泳、免疫分析方法、免疫阳离子电泳、免疫分析方法、免疫分析标识牌技术、简档：免疫分析标识牌技术是基于抗原抗体间的特异反应，定性或定量地检测各种标记物(定量信号)物质的研究。 到2007年，应用于免疫分析检测的各种标识牌技术：放射物标识牌、酶催化剂

3、标识牌、发光标识牌、荧光标识牌、金标识牌和超顺磁性粒子标识牌等放射免疫分析，原理：以放射性同位素为示踪，结合免疫反应的一种分析方法，提供的检测信号是不断放射的放射线。 标识牌中常用的放射性同位素元素体： 3H、14C、25 N、121I、125I等。 优点：准确灵敏专一性强，仪器试剂价格低廉，技术成熟。 缺点：药箱寿命短，批间、批内变异大，难以自动化分析。酶催化剂免疫分析方法、原理：以酶催化剂标识牌抗原或抗体为示踪物，以高活性的酶催化剂催化底物显色或发光，从而达到量化分析的目的。 到目前为止，用于酶催化剂标识牌法的酶催化剂多为辣根过氧化酶、碱磷酸酯酶、酸性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。 酶催化剂通过

4、与自各儿的特殊作用基质反应，产生典型的有色沉淀物。 优点：避免对人体的放射性伤害、环境污染，酶催化剂标识牌物质比较稳定，半寿期可超过1年.酶催化剂免疫应答通常不需要温育，不需要与抗体结合的标识牌药和游离的标识牌药分离。 缺点：标识牌酶催化剂不能像同位素标识牌物质、荧光标识牌物质那样直接产生信号，需要酶催化剂基质、辅酶催化剂等参与，完成酶促反应，引起吸收谱等变化后才能测定的迄今为止比较满意的标记物有：异硫氰酸荧光素(FITC )， 二氯三嗪氨基萤光素(DTAP )、四乙基罗丹明(RB200 )和四甲基异硫氰酸罗丹明(TMR ITC )。 化学发光免疫分析法，原理：高灵敏度的化学发光测定技术和高专

5、一性的免疫应答结合，检测抗原和抗体的分析技术。 兼具发光分析的高灵敏度和免疫应答的专一性。 优点：灵光亮度高，线性范围宽，光信号持续时间长，分析方法简便快速，结果稳定，误差小，安全性好，使用周期长。化学发光免疫分析包括免疫分析和化学发光分析两个系统。 免疫分析系统以化学发光物质和酶催化剂为标识牌物质，直接标识牌抗原和抗体，经过抗原和抗体的反应，形成抗原抗体免疫复合物。 化学发光分析系统在免疫应答结束后，加入氟化剂或酶催化剂的发光基质，化学发光物质通过碱介质中的氟化剂氧化释放出大量的自由能，产生激发态的中间体，该激发态的中间体从最低振动能级返回稳定的基态，当在各振动能级产生辐射时在云同步上产生能

6、量，多馀的能量发光强度可以使用发光信号量测仪器检测分析受光量子的产量，根据化学发光标记和发光强度的关系使用定标曲线计算被测定物的含量。 常见的发光体系、鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物体系：鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物体系：吖啶系化合物：(金刚烷)-1，2 -二恶烷及其诱导体、(金刚烷) -。 北美荧光虫体内的萤光素酶/萤光素酶是萩名的活化学发光系统，由虫萤光素酶、虫萤光素酶、ATP、Mg 2和O2组成。 蝮蛇萤光素酶在催化时，首先与蝮蛇西尔腺嘌呤核苷酸(Mg 2 -ATP和蝮蛇萤光素酶复合而成)生成复合物，该复合物放出质子，使酶催化剂变化，蝮蛇萤光素酶氧化脱羧而放出光子。 另一个生物发光系统是水母发光蛋白质，不需要添加萤光素酶，只要添加Ca2和Se2，分子内反应就能发出max为470 nm的蓝光。 特点是光视效能、灵敏度、选择性非常高。其他无机氧化剂的化学发光系统，近年来对一些科学家在一些无机氧化剂直接氧化几个物质产生化学发光的化学发光新系统如高锰酸钾元素、铈()、过氧化氢、高氯酸钾、次氯酸和铁氰化钾等药物分析的应用进行了研究，并取得了一定的成果总结和展望，总之免疫学分析技术的发展，即标记学的发展。 目前，多种免疫分析标记方法并存，