DNA重组技术的基本工具2011.5.24.ppt

1、快速增长、肉质好的转基因鱼(中国)、牛奶中含有生长激素的转基因牛(阿根廷)、基因操作案例、1、基因工程概念：也称为基因拼接技术或DNA重组技术。通俗地说，就是按照人的意思提取并改造一种生物的某些基因，然后放入另一种生物的细胞，正向地改造生物的遗传特性。基因重组，体外，基因/DNA，分子水平，切割结合导入表达，人类需要的基因产物，回顾：优点：定向变形生物的遗传特性；实现基因徐璐在不同物种之间转移，迅速培育新的生物品种，1基因结合的理论基础(1)大部分生物的遗传物质是DNA。(2)DNA的基本构成单位共四个脱氧核苷酸。(。(3)双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。1.基因工程诞生的理论基

2、础，2外源电子在体内表达的理论基础(1)基因是控制生物性质的独立遗传单位。(2)遗传信息的传递都遵循中心规律。(3)生物界共享一套遗传密码。DNA重组技术的基本工具，要想做好工作，首先要利用该工具。想想为了得到转基因抗虫面需要做什么。实施此精确操作过程的工具是什么？正确切割DNA的工具(“分子手术刀”)限制性核酸内切酶DNA片段的连接工具(“分子缝合针”)DNA连接酶基因转移工具(“分子运输车”)基因进入受体细胞的载体，2，DNA重组的基本工具，原核生物长期进化，(a)限制性核酸内切酶防止外来病原体的侵害。外源DNA入侵后，利用限制性酶切外源DNA，确保自身安全。因此限制酶在原核生物中主要切割

3、外源DNA，使其无效，从而达到保护自己的目的。限制性核酸内切酶的作用特征：可以识别特定的核苷酸序列。在特定部位的两个核苷酸之间切割。限制性内切酶、限制性内切酶、限制性内切酶在识别序列的中轴线两侧切开时，限制性内切DNA的双链切口具有几个突出的核苷酸，它们之间徐璐融合，这种切口称为粘性末端。(阿尔伯特爱因斯坦，Northern Exposure，成功)，平坦的尽头是什么？限制酶在识别序列的中轴上切割时，被切割的DNA两个单链切口是扁平的。这种切削称为平头端。限制性内切酶识别的序列的特征，限制性内切酶识别的序列，即6个碱基或4个碱基都可以找到中轴，中轴两侧双链DNA中的碱基以相反的对称重复排列。限

4、制性内切酶的识别序列：Go back，限制性内切酶特异性可识别的切割部位都有回文序列。在切割部位，一条链正向读取的碱基的顺序与另一条链的反向读取顺序完全一致。1 .限制性核酸内切酶“分子手术刀”(1)来源：主要从原核生物中分离出来，纯化出来。(2)化学的本质：蛋白质。(3)作用(4)作用特征：特异性，即限制性酶识别特定脱氧核苷酸序列，并切断特定部位。(5)切割方法，催化作用，因此可重复使用，可用于切割DNA的目的基因和载体的切割，误差切割：生成两个相同的粘性末端，形成扁平端，基因的缝合：DNA连接酶，1，类：2，2，(b)，分子缝合针DNA连接酶，DNA连接酶的作用过程，粘性末端之间的间隙可以

5、“缝合”，Ecoli DNA连接酶或T4DNA连接酶，即通过限制酶切割的两种核苷酸之间的磷酸二酯连接还原，T4以下是两种限制酶GC AA TTC GC CT AA CG G G，(1)其中一个是限制性内切形成的末端，两者都需要重组一个DNA分子，使用的DNA连接酶通常是(2)和其他限制性内切形成的末端，两者都形成重组DNA片段，常用的连接酶，反馈练习：1)将单个核苷酸连接到现有核酸片段，磷酸形成酯键，1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，2)将单个核苷酸作为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接到互补的DNA链，2)将DNA连接到特定核苷酸序列的磷酸二酯键，切割DNA双链氢根据右图，对工具酶功

6、能的叙述不正确的是()A .限制性内切酶能阻断A，DNA连接酶能连接A B . DNA聚合酶能连接A到C。降解酶可以从B解d .连接C。克隆开始的序列，切割部位，标记基因的存在，含有氨苄青霉素的培养基鉴别，3。基因进入受体细胞的传递链“分子运输车”的质粒存在于很多细菌和酵母等生物细胞中。暴露，简单结构，细菌假核DNA或独立于核自我复制的小双链环DNA分子，载体必须具备四个条件。一个或多个其他限制性酶接触是对受体细胞无害的自我复制。导入基因可以在受体细胞中复制和表达(可以在宿主细胞内复制和稳定保存)，具有特定的标记基因。很容易筛选出细菌的质粒噬菌体衍生物(3)动植物病毒。在基因工程工作中，载体是天然质粒或病毒人工转化的，质粒未被选定为基因载体的原因是A，可克隆()B，多个限制性酶切线C，标记基因D，环状DNN。质粒有酶的触点，目