免疫组化基本技术(三).ppt

1、免疫组织化基本技术(3)，6 .根据本实验室经验对各种组织的残奥片包埋条件(1)大动物组织(犬、兔、小儿解剖)的脱水、透明与浸蜡时间、75乙醇30120 min、85乙醇30120 min、95 (2)小动物组织脱水、透明与浸蜡时间75乙醇30min； 85乙醇30min、95乙醇1h、1h、一夜或2h，无水乙醇和各30min，混合二甲苯15min、10min、10min() (3)活检或手术切除标本的脱水透明和蜡浸泡时间75乙醇30min、85乙醇1h、95乙醇1h、1h和4h或一夜，无水乙醇30min 七、组织切片可分为残奥鳍切片、冰冻切片、石棉橡胶切片，IHC切片要求与常规切片不同，要求

2、连续有序、防止脱片等特殊要求。 1 .切片前的准备工作(1)清洗载玻片：市面上的载玻片需要清洗气泡24h、流水清洗、系列乙醇浸渍、冷却涂布，为了展开原位杂交，需要将载玻片240烧成2h。 (2)切片胶粘剂的种类聚赖氨酸(分子量300KD):0.5%浓度。 APES试剂(3-氨基化学基、丙基三氧基硅烷):清洁的载玻片丙酮5minAPES(50ml丙酮1ml ) :用铝箔包裹用大头针定径套浸泡在APES试剂中的13次纯丙酮洗涤二次干燥的载玻片，保存在室温或4小时。 矾类动物胶液：矾类0.5g动物胶5g H2O2 1000ml甲醛动物胶液： 40甲醛2.5ml动物胶0.5g H2O2 100ml，2

3、 .残奥翅片切片：3.冰冻切片： IHC冰冻切片，ISH冰冻切片(恒冷冻库冻结切片和开放型冻结切片) (2)5260 (3)切片厚度24m。 (4)切片刀应尽早(5)编号(6)切片可在4处三年五载保存(残奥片切片)，(7)冰冻切片冷却后立即(8)冰冻切片分为固定和新鲜组织，固定组织需经蔗糖处理24h，冰冻切片。 (9)冰冻切片固定后-80保存准备，8 .组织和细胞球材料的保存1 .冷冻保存：-80，-145，-198组织在离体30分钟内迅速取材，放入专用冷冻管，编号，登记册，2 .新鲜组织适当固定后放入冷冻保存管，-80冷冻保存。 3 .蜡块的保存4 .活细胞球的保存可根据需要将细胞球直接培养

4、在玻璃罩上，9孔板上的细胞球固定后可保存-80，大容量培养的细胞球冻结存在于液氮中。 第二部分IHC的一些基本技术，主要内容有：一、实验的设定修订二、残奥鳍切片的脱蜡水三、内因性酶催化剂的除去方法四、IHC的非特异性染色五、抗原的暴露和修复六、抗体的购买和注意事项七、抗体的最佳稀释度的测定和保存八、显示系统和衬剂的选择和调制九、IHC，2.IHC实际3 .通过预备实验寻找第一抗体的最佳稀释度，应该设置怎样的对照。 4 .各批实验应用相同稀释度的电阻、培育时间和温度、相同的发色时间。 5 .表示阳性判定标准的6 .要达到的目标有：二、从残奥散热片切片脱蜡到水冰冻切片，在冷干或电吹风干燥后，可以直接进行免疫组织化标记。 残奥鳍切片需要如下脱蜡制作IHC。 混合二甲苯10min，混合二甲苯10min，混合二甲苯10min，无水乙醇2min，95乙醇2min，85乙醇2min，75乙醇2min，流水冲洗。 三、内源性酶催化剂的去除方法(一)内源性过氧化酶的去除方法：1. 0.3%3%H2O2甲醇液20min 2. 1 H2O2 2